대식세포 관련 염증 억제를 통한 급성 신장 손상 마우스 모델에서 오리도닌의 재생 보호 효과
Mar 17, 2022
소개
급성의 중요한 특징신장 손상(AKI)는신장 기능. 그것은 사회에서 광범위한 관심을 불러 일으킨 세계적인 건강 문제입니다. 통계에 따르면 매년 전 세계적으로 약 1,330만 명이 AKI로 고통 받고 있으며 그 중 85%가 개발도상국에 있으며 이로 인해 170만 명이 사망합니다.1,2) 특히 AKI는 단일 질병이 아니며 합병증일 수 있습니다. 여러 질병의. 일반적으로 패혈증, 쇼크, 허혈 재관류 및 중독으로 인해 발생할 수 있습니다. 이 질병은 장기간 발달 후 만성으로 진행되는 경향이 있습니다.신장병,울혈성 심부전 및 말기신장 질환.3-5) 요약하면, AKI는 막대한 경제적 부담을 야기할 수 있으며, 환자의 심리적, 육체적 부담을 사실상 증가시킬 것이다.신장허혈-재관류는 현재 AKI의 가장 흔한 원인으로 간주되며 일반적으로 외상, 외과적 절제 또는신장 이식. 대식세포는 AKI 진행에 중요한 역할을 하는 주요 염증 세포 중 하나입니다. Mincle은 주로 골수 세포와 호중구, 특히 대식세포에서 발현됩니다. 그것은 항진균 면역의 주요 역할을 하는 고도로 유지된 C형 렉틴 도메인을 가지고 있습니다. Mincle은 원래 Card9-Bcl{6}}MALT1 신호 전달을 통해 핵 인자-카파B(NF-κB)를 활성화할 수 있는 유도 단백질인 지질다당류(LPS)로 마츠모토에 의해 확인되었습니다. 선천성 면역 반응과 후천성 면역 반응을 연결하는 염증 인자의 발현을 촉진하는 효과적인 T 헬퍼 1(Th1) 및 Th17 하위 유형의 형성.6) 최근 연구에 따르면 Mincle은 세포의 모든 종류의 이상 물질을 인식하고 관련 신호를 받은 다음 관련 응답에 응답합니다. 예를 들어, Mincle은 손상된 세포의 유비쿼터스 세포내 대사산물인 -GlcCer에 결합하여 사이토카인을 활성화 및 유도하고 항원 특이적인 T 세포 반응을 유발할 수 있습니다.7) Mincle은 이질적인 세포 사멸을 감지하는 수용체이며, 내인성 리간드를 인식할 수 있습니다. 죽은 세포에서 분비되는 SAP130은 염증성 사이토카인의 생성을 유도하고 손상된 조직으로 호중구 침윤을 유도한다.8,9) 특히 Lan 연구팀은 Mincle이 M1 대식세포에서 특이적으로 유도되며, 염증 표현형을 유지하는 데 핵심적인 역할을 한다는 것을 확인했다. M1 대식세포.6) 따라서 표적 혼합 요법이 AKI 질환 치료의 열쇠가 될 수 있습니다.
오리도닌은 런던에서 추출한 카우리엔 골격을 가진 사환식 디펩티드 천연 화합물로 항균, 항종양, 항염, 항섬유화 등 다양한 생물학적 기능을 가지고 있습니다. 많은 연구에서 이러한 천연 디테르페노이드의 항종양 가능성과 기전이 일련의 암세포주에서 보고되고 있습니다.10,11) 항암제인 오리도닌이 현재 국내 임상 1상을 진행 중인 것으로 확인되었습니다. 중국. 그러나 오리도닌의 역할은신장병드물게 보고됩니다. 여러 유형의 연구에서 오리도닌이 단백뇨 및신장 손상자발성 홍반성 루푸스 마우스 모델에서, 그리고 in vitro 연구에서는 Oridonin으로 치료한 후 Oridonin이 염증성 사이토카인의 분비와 LPS에 의해 유도된 염증 반응을 감소시킬 수 있음을 발견했습니다.12,13) 이 연구에서 우리는 Oridonin의 잠재력을 밝히는 데 중점을 두었습니다. AKI의 치료와 그 기본 메커니즘이 대식세포에서 Mincle의 억제와 관련이 있는지 여부. 이 연구는 AKI 치료제의 스크리닝에 대한 강력한 증거를 제공할 수 있습니다.
키워드:오리도닌; 급성 신장 손상(AKI); 대식세포; 민클; 염증; 신장 기능
재료 및 방법 동물36마리의 수컷 C57BL/6 마우스(8-10주령)를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technologies Co., Ltd.(Beijing, China)에서 얻었고 온도가 조절되고 습도가 높은 곳에 보관했습니다. -Southwest Medical University의 동물 실험 센터의 통제실(각각 21.{10}} ± 2.0도 및 65 ± 5%). 모든 마우스는 확률적으로 3개의 그룹으로 나누었습니다: 가짜 그룹, 허혈-재관류 손상(IRI) 모델 그룹(IRI 그룹), 그리고 오리도닌 처리된 IRI 그룹(OR 그룹)(15 mg/kg). 수술 전에 마우스를 45 mg/kg의 펜토바르비탈 나트륨을 복강내 주사하여 마취시켰다. AKI 마우스 모델은 양측 클램핑으로 확립되었습니다.신장35분 동안 동맥. 가짜 그룹의 마우스는 35분 동안 복강만 노출시켰고 OR 그룹의 마우스는 수술 후 3일 동안 연속적으로 위내 투여되었고 다른 그룹에는 대조군과 동일한 부피의 식염수가 주어졌습니다. 3일째에 식염수로 희석한 펜토바르비탈 나트륨(200mg/kg)을 복강 내 주사하여 마우스를 안락사시켰다. 모든 동물 실험 절차는 실험 동물 관리 지침(허가 번호 201812-55)에 따라 수행되었습니다.
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화학물질 및 시약오리도닌(BP1041, 순도 95% 이상)은 Biopurify phytochemicals Ltd.(중국 청두)에서 입수했습니다. NF-κB, p-AKT 및 유도성 산화질소 합성효소(iNOS) 항체는 Cell Signaling Technology(Beverly, MA, USA)에서 구입했습니다. 인터루킨(IL)-1, 종양 괴사 인자(TNF)-, Mincle, p-NF-κB 및 AKT 항체는 Santa Cruz Biotechnology(Santa Cruz, CA, USA)에서 구입했습니다. Total RNA 추출 키트는 Tiangen Biochemical Technology (Beijing) Co., Ltd.(Beijing, China)에서 구입했습니다. Shanghai Promega Bioproducts Co., Ltd.(Shanghai, China)에서 제공하는 Reverse Transcription Kit, Real-time PCR Kit. LPS(Escherichia coli 055:B5)는 Sigma Chemical(St. Louis, MO, USA)에서 제공했습니다. DNA 형질감염 시약은 Zeta Life(Zeta Life, USA)로부터 입수하였다.
세포 배양 및 형질감염RAW264.7 세포는 중국 과학원 세포 은행(중국 상하이)에서 구입하여 Dulbecco의 변형 독수리 배지(DMEM) 고 포도당 배지에서 5% CO2 환경에서 37도에서 배양했습니다. 세포가 80% 합류로 성장했을 때 소화가 수행되었습니다. 전체 실험은 대수 성장기 세포를 사용했습니다. RAW264.7 세포에서 Mincle의 과발현은 Mincle-과발현 플라스미드(Genechem, Shanghai, China)를 Zeta Life Advanced DNA 형질감염 시약으로 세포에 형질감염시켜 수행했습니다. 광학현미경을 이용하여 세포의 형태와 성장상태를 관찰하였다.
세포 계수 키트-8(CCK{1}}) 분석3,000개의 세포를 그룹당 6개의 복제 웰이 있는 96-웰 플레이트에 접종했습니다. 이어서, 무혈청 배지에서 24시간 동안 세포를 굶주린 후, 약물 함유 배지로 24시간 동안 처리하였다. 그런 다음 배지를 제거한 후 각 웰에 100µL의 10% CCK{8}} 시약을 추가하고 3시간 동안 배양합니다. 각 웰의 흡광도 값에 따라 세포 생존율을 계산하였다.
신장 기능 평가혈청 크레아티닌과 요소 질소의 수준은 적절한 키트(Jiancheng, Nanjing, China)를 사용하여 측정되었습니다. 값은 혈청의 mmol/L로 표시됩니다.
헤마톡실린-에오신(H&E) 및 과요오드산-쉬프(PAS) 염색수집된신장조직을 24시간 동안 4% 파라포름알데히드에 넣은 다음 다른 농도의 에탄올 용액에 넣고 포매를 위해 크실렌 및 왁스 블록에 넣었습니다. 염색 전 슬라이드를 60도 오븐에 2시간 동안 넣은 후 탈랍 및 재수화하였다. 일부 샘플은 에오신과 헤마톡실린 색소로 염색되었고, 다른 샘플은 과요오드산 알코올과 쉬프다이 용액을 별도로 첨가했습니다. 마지막으로 현미경 카메라로 관찰 및 사진 촬영.
효소 결합 면역흡착 분석(ELISA)세포 배양 상층액에서 IL-1, IL{1}} 및 TNF-의 수준은 ELISA 키트(IL-1: Neobioscience, EMC001b; IL-6: Neobioscience , EMC004, TNF-: Neobioscience, 500850). 시약 공급자가 제공한 방법에 따라 검체 검사를 수행하고 표준 곡선에 따라 각 그룹의 농도 값을 계산합니다.
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웨스턴 블롯모든 동물 및 세포 샘플을 얼음 상의 방사성면역침전 분석(RIPA) 완충액에 용해시키고 원심분리하여 상응하는 단백질 샘플을 얻었다. Coomassie bright blue assay를 이용하여 각 시료의 단백질 농도를 측정하였고, 일정량의 단백질 시료를 이용하여 gel을 실행하였다. 단백질의 각 그룹은 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)으로 분리한 다음, 폴리비닐리덴 디플루오라이드(PVDF) 막으로 옮겼다. 막을 4도에서 1차 항체와 함께 밤새 인큐베이션한 후, 2차 항체를 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 밴드의 색상은 발색 솔루션으로 현상되고 밴드의 회색 강도는 Image J 소프트웨어로 계산되었습니다.
실시간 PCRTiangen kit의 사용설명서에 따라 total RNA를 얻어 enzyme-free water에 녹였습니다. 관련 지침에 따라 역전사 키트를 사용하여 cDNA를 합성합니다. RT-PCR 반응 조건은 37도 15분, 95도 5분, 40주기로 진행하였다.
95도 10분, 95도 15초, 60도 1분 각 유전자의 상대적인 mRNA 발현 수준은 글리세르알데하이드{6}}인산 탈수소효소(GAPDH)에 대해 정규화되었습니다. 프라이머의 서열은 표 1과 같다.면역형광 염색RAW264.7 세포를 4% 파라포름알데히드에 고정한 다음 실온(rt)에서 1시간 동안 소 혈청 알부민으로 차단하고 해당 1차 항체와 함께 4도에서 밤새 인큐베이션했습니다. PBS(phosphate-buffered saline)로 3회 세척한 후, 세포를 이차 항체와 함께 실온에서 1시간 동안 인큐베이션했습니다. 핵은 4'{9}}디아미디노{10}}페닐인돌(DAPI)로 염색되었습니다. 면역형광 이미지는 Nikon Eclipse 현미경(Nikon, Tokyo, Japan)으로 캡처했습니다.통계 분석통계 분석 결과는 평균 ± 표준편차(SD)로 표시되며, 일원 ANOVA, p를 사용하여 그룹 간 비교를 수행했습니다.< 0.05="" was="" considered="" significant.="" graphpad="" prism="" 7="" software="" was="" used="" to="" calculate="" data="" for="" statistical="">
결과
Oridonin 억제 허혈-재관류 유도 신장 손상 및 염증AKI에 대한 오리도닌의 보호 효과를 평가하기 위해신장허혈 재관류에 의해 유발된 혈액 크레아티닌, 요소 질소 및신장각 그룹의 마우스의 세뇨관 손상 지수 및 신장 조직에서 염증성 사이토카인의 발현 및 평가신장H&E 및 PAS 염색에 의한 병리학. 그 결과 AKI 모델군의 혈청 크레아티닌(Fig. 1a)과 요소질소(ureanitrogen)(Fig. 1b) 수치가 Oridonin을 3일간 연속 주입하였을 때 감소하였음을 그림으로 나타내었다. 이에 따라, 세뇨관 손상 지수는 Oridonin이 세뇨관 괴사를 강력하게 감소시키는 것으로 나타났습니다.신장AKI 마우스 (그림 1c). Real-time PCR 결과 Oridonin이 IL-1 , MCP-1 및 F4/80의 mRNA 수준을 유의하게 하향 조절하는 것으로 나타났습니다.신장AKI 모델 그룹(그림 1d-f). 더욱이, 병리학적 염색 및 면역형광의 결과는 오리도닌이 AKI 마우스에서 세뇨관 괴사(그림 1g) 및 염증성 사이토카인의 단백질 수준(그림 1h)을 유의하게 감소시켰으며, 이는 신장 손상을 효과적으로 개선하여 오리도닌이 상당한 항손상을 가졌음을 나타냅니다. 및 AKI 모델에 대한 항염증 효과.
AKI 마우스의 신장에서 오리도닌 억제 Mincle/AKT/NF-κB 신호 경로오리도닌의 치료 기전을 밝히기 위해신장염증, 우리는 Oridonin 투여 후 Mincle/AKT/NF-κB 신호의 활성화를 추가로 조사했습니다. Western blot 결과는 Oridonin 개입이 AKI에서 염증 관련 단백질 IL{2}} 및 iNOS의 발현을 상당히 감소시킬 수 있음을 보여주었습니다.신장AKT 및 NF-κB 경로 단백질의 활성화를 감소시켜(그림 2a-e), Oridonin이 IRI 유도 염증을 억제할 수 있음을 나타냅니다.신장아키의. 특히 Real-time PCR 및 Western blot 결과 Oridonin이 Mincle의 mRNA와 단백질 수준을 효과적으로 감소시키는 것으로 나타났습니다.신장AKI 모델(그림 2f, g). 에서 Mincle의 위치를 감지하기 위해신장, 우리는 각 그룹에서 면역 형광법을 수행했으며 (그림 2h) 결과는 Mincle이신장간질과 대식세포 마커 F4/80과 함께 국소화되어 Mincle이 주로 다음에서 발현되었음을 나타냅니다.신장대식세포, AKI 후 강력하게 상향조절된다. 면역-FL 형광 결과는 또한 대식세포가 AKI 후 유의하게 증가함을 보여주었으며, 이는 AKI의 발달에서 대식세포의 중요한 역할을 시사한다. 특히 Oridonin은 다음에서 Mincle을 유의하게 억제했습니다.신장AKI 마우스의 대식세포. 위의 결과는 오리도닌이 개선될 수 있음을 나타냅니다.신장Mincle/AKT/NF-κB 신호 전달을 억제하여 염증 및 손상을 예방합니다.
오리도닌은 LPS에 의해 유도된 RAW264.7 대식세포 형태학적 변화를 상당히 회복시켰습니다염증성 대식세포에 대한 오리도닌의 효과를 연구하기 위해 우리는 LPS를 사용하여 RAW264.7 세포를 자극하여염증 세포 모델. Oridonin의 화학 구조는 그림 3a에 나와 있습니다. 따라서 우리는 RAW264.7 세포에서 다양한 농도에서 Oridonin의 독성을 테스트했습니다. CCK8 결과는 농도가 5μM일 때 Oridonin이 세포 형태에 큰 영향을 미치지 않는다는 것을 보여주었으며(그림 3b), 이는 후속 시험관 실험에 사용되었습니다. 우리는 놀랍게도 Oridonin이 세포 내 액포를 감소시키고 세포를 더 단단하게 만드는 것을 포함하여 LPS로 유도된 대식세포 형태를 유의하게 개선한다는 것을 발견했습니다(그림 3c).
오리도닌은 LPS로 자극된 RAW264.7에서 염증 인자의 분비와 발현을 억제했습니다.세포 LPS로 자극된 RAW264.7 세포에 대한 오리도닌의 항염증 효과를 명확히 하기 위해 real-time FL 형광 PCR, ELISA, 면역형광법을 이용하여 각 세포군에서 분비되는 염증 인자를 측정하였다. 결과는 Oridonin이 LPS 자극 세포에서 IL-1, IL{6}}, TNF-, iNOS 및 MCP-1의 mRNA 수준을 유의하게 감소시키는 것으로 나타났습니다(그림 4a-e). 또한 Oridonin은 염증 세포 모델의 상등액에서 IL{12}} , IL{13}} 및 TNF-의 분비를 유의하게 하향조절했으며(그림 4f-h), LPS로 자극된 대식세포의 염증성 사이토카인(그림 4i). 위의 결과는 오리도닌이 대식세포에서 명백한 항염 효과가 있음을 보여줍니다.
Oridonin은 시험관 내 염증성 대식세포에서 Mincle/AKT/NF-κB 신호 전달 경로를 차단했습니다Mincle은 패턴 인식 수용체로서 대식세포 관련 염증을 촉진하는 데 필수적입니다.신장아키의. 위의 동물 실험 결과는 Oridonin이 Mincle의 발현을 하향 조절하는 것으로 나타났습니다.신장아키의. 따라서 우리는 Oridonin이 LPSstimulated macrophage inflammatory model에서 Mincle의 mRNA와 단백질 수준을 감소시킬 수 있는지 여부를 추가로 조사했습니다. Western blot, immunofluorescence 및 real-time PCR 결과, 5 µM Oridonin은 mRNA 발현을 유의하게 감소시켰을 뿐만 아니라(Fig. 5c), 염증성 대식세포에서 Mincle의 단백질 수준을 하향 조절하는 것으로 나타났습니다(Fig. 5a, b). , d). 더욱이, 오리도닌은 LPS 처리된 RAW264.7 세포에서 iNOS 및 인산화된-AKT 및 NF-κB의 단백질 수준을 유의하게 하향조절하였다.
Mincle의 과발현은 LPS로 자극된 RAW264.7 세포의 염증에 대한 오리도닌의 억제 효과를 제거했습니다Mincle이 대식세포에서 염증을 억제하는 Oridonin의 주요 표적인지 여부를 결정하기 위해 우리는 Mincle의 발현을 상향 조절하기 위해 Mincle 과발현 플라스미드로 RAW264.7 세포를 형질 감염시켰다. Real-Time PCR 및 Western blot 결과, RAW264.7 세포에서 Mincle의 mRNA와 protein level이 transfection 후 증가함을 보였다(Fig. 6a, b). 그런 다음 플라스미드를 Oridonin 처리된 염증 세포에 형질감염시킨 결과 이 그룹의 세포에서도 Mincle의 발현이 증가하는 것으로 나타났다(Fig. 6c, d). 벡터를 음성 대조군으로 세포에 형질감염시켰다. 회복 실험의 결과는 Oridonin 처리된 염증성 대식세포에서 Mincle의 과발현이 이 두 단백질의 인산화 수준을 증가시켜 AKT 및 NF-κB의 활성화를 상향 조절함을 보여주었으며(그림 6d-g), 이는 Oridonin이 대식세포의 염증을 억제함을 시사했습니다 Mincle 및 다운스트림 AKT 및 NF-κB 신호전달을 하향 조절하는 것일 수 있습니다. 또한, 실시간 PCR 및 ELISA 결과는 Mincle의 과발현이 Oridonin 처리된 염증성 대식세포에서 사이토카인의 발현 및 분비를 회복시키는 것으로 나타났습니다(그림 6h-1). 위의 결과는 Oridonin이 Mincle/AKT/NF-κB 신호를 조절하여 대식세포의 염증을 억제한다는 것을 나타냅니다.
논의
AKI는 다양한 병인 및 병리학 적 기전에 의해 유발되는 임상 증후군입니다.신장허혈-재관류 손상은 클리닉에서 흔한 병태생리학적 과정이며, 급성 질환의 주요 원인 중 하나입니다.신장 손상.14,15) 염증 반응은 다음과 관련된 복잡한 네트워크입니다.신장대식세포가 중요한 역할을 하는 실질 세포와 상주 면역 세포신장 손상.16) 면역 미세 환경의 변화로 인해 대식 세포는 주로 M1 및 M2 유형으로 구분되는 여러 표현형으로 분극화됩니다. iNOS 표현은 M1 유형의 기호입니다. 생체 내 및 시험관 내 연구 모두 모델 그룹에서 iNOS 발현이 증가하고 치료 후 발현이 감소한다는 것을 발견했습니다. 대식세포 유도 C형 렉틴(Mincle)은 활성화된 대식세포에서 발현되는 C형 렉틴 수용체이며 유전적으로 마우스 6F2 및 인간 염색체 12P31에 위치합니다. 일부 연구에서는 Mincle이 병원체 관련 분자 패턴 인식 수용체를 인식하여 선천성 면역 반응의 개시에 참여한다고 보고했습니다.17) 일부 실험 연구에서는 마우스에서 뇌허혈 손상 후 손상 부위의 백혈구 침윤이 증가한다는 것을 발견했습니다. 혈관 관류 영역에서 뉴런의 손실로 이어질 수 있으며 Mincle의 녹아웃은 크게
중간 대뇌 동맥 폐색으로 인한 허혈성 손상을 늦추십시오. 최신 연구에 따르면 Mincle은 그의 죽음을 감지할 수 있습니다.신장-글루코실세라마이드와 결합하여 염증반응을 가속화하고 염증제거를 지연시키는 관상상피세포.18) 에 대한 연구신장병Mincle은 허혈 재관류 및 시스플라틴 유도 AKI 모델 모두에서 높게 발현되며 M1-형 대식세포에서 특이적으로 발현된다는 우리 연구 결과와 동일합니다. 요약하면, 표적 Mincle 연구는 염증성 대식세포에 의해 유발되는 관련 질병에 대한 새로운 치료법이 될 수 있습니다. 우리의 연구는 AKI 마우스 모델에서 Mincle의 발현이 증가한다는 것을 발견했습니다.
허혈 재관류에 의해 구성. 면역형광 co-localization 결과에 따르면 Mincle은 주로신장모델 그룹 생쥐의 대식세포와 Lan의 연구 결과와 일치합니다. Mincle은 M1 대식세포에서 특이적으로 유도되며, Mincle-sky 신호전달은 급성기에서 M1 대식세포의 염증성 표현형을 촉진하고 유지합니다.신장 염증.6) 밍클은 C형 렉틴 수용체(CLR)에 속하여 균류 및 기타 형태의 미생물 또는 무균 위험을 인식할 수 있습니다. 이들은 링커 단백질 CARD9를 통해 염증을 유도한 후 CARD{3}}Bcl10 복합체의 조립과 전형적인 NF-κB 조절을 유도합니다. 규제 관계가 있다
NF-κB와 AKT 단백질 사이.10,19) LPS로 자극된 대식세포의 염증 연구에서 AKT와 NF-κB의 발현이 증가함을 확인하였다. 그 후, 약물 중재를 처리한 세포에 Mincle의 고발현 플라스미드를 형질감염시킨 결과, AKT의 신호 경로와 NF-κB 신호 경로가 다시 활성화되는 것으로 나타났다. Mincle이 이 경로의 단백질 발현에 영향을 줄 수 있다고 결론지을 수 있습니다. 그러나 Mincle이 이 두 신호 경로를 어떻게 상향 조절하는지, 보고된 연구에 따르면 이 단백질이 하늘 경로를 통해 활성화되는지 여부도 명확하지 않습니다.
오리도닌은 오리온에서 추출한 천연 디테르페노이드 화합물로 항종양, 항염, 신경보호 등 다양한 약리효과를 가지고 있습니다. 오리도닌의 신경보호 기능에 대한 연구에서 Wen 팀은 Oridonin이 자가포식을 억제하여 인지 기능 장애를 개선하여 인슐린 저항성을 차단할 수 있음을 발견했습니다.20) Lin 팀은 Oridonin이 신경 산화 스트레스 및 기타 신경 보호 효과를 감소시켜 파킨슨병 및 발작을 예방할 수 있음을 발견했습니다. 21) 가장 철저하게 연구된 것은 오리도닌의 항종양 효과이다. 연구팀은 비소세포폐암 모델 쥐를 치료하기 위해 이 약물을 흡입 가능한 입자로 만들어 강력한 혈관신생 억제 효과와 세포자멸사 촉진 효과를 보이며 상당한 항암 효과를 보였다.22) 오리도닌도 항염증 작용을 할 수 있다. 효과. Notch 경로를 억제하고, 대식세포의 분극화를 유도하여 항염증 표현형으로 전환하고, 자가면역 신경염의 발병을 억제할 수 있습니다.23)
또한 염증인자의 분비와 환원성 산화효소의 생성을 억제하여 골관절염의 발병을 완화시킬 수 있습니다.24) 일부 연구에서는 오리도닌이 다양한신장 질환. 연구에 따르면 Oridonin은 5-fluorouracil(5-FU)과 협력하여 항종양 효과를 발휘하고 5-FU의 세포독성을 향상시킬 수 있다고 보고했습니다.신장암 세포.25) 본 연구의 생체 내 실험 결과에 따르면, Oridonin은 허혈 재관류 손상이 있는 생쥐에서 혈청 크레아티닌 요소 질소를 유의하게 감소시키고 병리학적 손상을 유의하게 감소시킬 수 있습니다. 그 결과 오리도닌이 AKT 및 NF-κB 경로 억제와 관련된 염증 활성을 억제할 수 있음을 보여주었는데, 이는 당뇨병성 신증에 대한 오리도닌 중재 연구 결과와 유사하며 염증성 사이토카인의 침윤과 톨-유전자의 활성을 동시에 감소시킬 수 있는 것으로 나타났습니다. 수용체 4(TLR4)/NF-κB 신호 전달 경로와 유사합니다.26) 위의 결과는 Oridonin이 Mincle을 억제하고 AKT 및 NF-κB 경로 활성을 억제할 수 있음을 시사했습니다. 시험관 내 실험에서 이러한 경로 지표는 LPS로 자극된 대식세포 염증 모델에서 증가하고 Oridonin에 의해 감소되었습니다. 복원 실험의 결과는 Oridonin 처리된 염증성 대식세포에서 Mincle의 과발현이 AKT 및 NF-κB 신호전달의 활성을 증가시켜 Oridonin 처리된 세포에서 염증성 사이토카인의 발현 및 분비를 상향 조절하는 것으로 나타났으며, 이는 Oridonin이 염증을 억제한다는 것을 시사했습니다. 대식세포는 Mincle 및 AKT/NF-κB 신호 전달 억제를 통해
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AKI 동물 모델을 구성하는 방법에는 양측성 허혈-재관류, 반대측 신장 절제술을 사용한 일측성 IRI, 시스플라틴, 디프테리아 독소, LPS, 아리스토로크산 또는 엽산이 포함됩니다. 그러나 시스플라틴 주사는 임상 환자를 완전히 시뮬레이션할 수 없습니다. 디프테리아 독소 주입에 의해 유도된 모델은 질병의 진행을 연장시키는 경향이 있습니다.신장병, 주로 다음으로 이어질 수 있습니다.신장섬유화증 및 사구체 경화증, 경미한 세뇨관 손상. Aristolochic acid nephropathy는 tubulointerstitial nephritis이고 folic acid는 또한 nephrotoxicity의 유발인자이다.신장그러나 이 두 가지의 임상적 발생률은 낮다.27) IRI에 의한 급성신장 손상높은 이환율, 사망률 및 의료 비용과 관련된 세계적인 공중 보건 문제입니다. 따라서 우리는 급성 재관류를 구성하기 위해 허혈 재관류를 사용합니다.신장부상 쥐 모델. 여러 연구에서 클램핑 시간이 서로 다른 것으로 보고되었습니다.신장동맥. 연구팀은 양측 클램핑을 위한 IRI 동물 모델을 구축했다.신장1시간 동안 Sprague-Dawley(SD) 쥐의 척추경.28) 또 다른 연구팀은 양측에 고정신장Wistar 쥐에서 재관류 모델을 준비하기 위해 45분 동안 동맥. 또한, C57BL/6J 마우스를 이용하여 모델을 구축하기 위해 35분 동안 양측 신장 경경을 고정하는 연구를 진행하였다.신장동맥을 20분 동안 고정하고 3일 후에 혈청 크레아티닌을 정상 기준선 수준으로 되돌렸습니다. 따라서 우리는 재관류 전 35분 동안 양측 신동맥을 고정하기로 했으며 수술 후 3일 동안 혈청 크레아티닌의 변화는 안정적이었습니다. 수술을 하는 동안 우리는 색상을 관찰할 수 있습니다신장분홍색에서 연한 빨간색으로 변하는 이유는신장동맥 혈관 허혈. 35분 후 클립을 제거한 후,신장정상으로 돌아오면 IRI-AKI 모델이 구축되었습니다. 요약하면, 이 발견은 오리도닌이 상당한 항염증 효과를 가지고 있으며, 주로 Mincle 및 NF-κB 및 AKT의 다운스트림 신호 전달의 활성을 억제하는 것과 관련될 수 있는 손상으로부터 AKI의 신장을 보호할 수 있음을 입증했습니다. 이 연구는 AKI의 임상 치료를 위한 옵션을 제공할 수 있는 AKI에 대한 Oridonin 치료의 새로운 잠재적 기전을 제공합니다.
