글루코코르티코이드 유도 쥐 모델에서 Cistanche Deserticola 및 그 막걸리 찜 제품의 신경내분비-면역 기능에 관한 연구

연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com

Bonan Liu, Ji Shi, Zhe Li, Chao Zhang, Pengpeng Liu, Wei Yao 및 Tianzhu Jia

1 중국 다롄 116600 랴오닝 중의약대학 약학부

2 중국 다롄 116600 다롄 의과대학 제2병원

추상적인

사막 거주시탕슈 허브'신농한약경'에 처음 기록되었으며, 이 간행물에 최상급 한약재로 등재되어 있습니다. /e 중국 약전에는 다음과 같은 내용이 기록되어 있습니다. 시스탄체 데저티콜라(CD)와 막걸리 찜시스탄체 데저티콜라(WCD)는 주요 유형의 달인으로 클리닉에서 사용할 수 있습니다. 청주와 함께 찐 후에는 항노화 및 강장제 신장양 효과가 향상됩니다. 이 연구에서 우리는 모델 쥐에서 Cistanche Deserticola와 WCD의 화학적 함량과 신장 양 결핍을 활성화하는 약리학 적 메커니즘을 발견했습니다. 겨냥하다. /이 연구의 목적은 Cistanche Deseticola와 WCD가 신경내분비계에 미치는 영향을 조사하는 것이었습니다.면역 기능글루코코르티코이드 과다복용 모델 쥐에서 신장양 결핍증. 재료 및 방법. Sprague Dawley(SD) 쥐가 선택되었습니다. /e 쥐는 글루코코르티코이드 과다복용 모델 쥐를 위해 코르티코스테론 물 현탁액을 피하 주사했습니다. /e 양성 대조군 쥐에게 Jinkuishenqi 알약과 고용량, 중간 및 저용량 위관 영양 공급시스탄체 데저티콜라/WCD 현탁액(각각 1.646g/(kg/일), 5.48g/(kg/일), 2.74g/(kg/일) 및 1.37g/(kg/일)); 블랭크 대조군(BC) 및 모델 대조군(MC) 그룹에는 1mL/100g의 용량으로 연속 40일 동안 약물 그룹과 동일한 부피의 증류수가 제공되었습니다. 마지막 투여 후 복부 대동맥에서 혈액을 채취하고 혈청 T, CRH, ACTH, CORT, 코티솔, IL{11}}, IL{12}}, IL{13}}, TNF - 및 IFN-c를 측정하였다. 흉선과 비장의 기관 지수를 계산했습니다. /e 부신에서 Bax, Bcl{16}}, caspase{17}}, Fas 및 FasL의 발현은 면역조직화학으로 측정되었습니다. /흉선 및 부신의 병리학적 변화를 HE 염색(×200)으로 관찰하였다. 말초혈액의 T 림프구 부분집합은 동료세포계측법에 의해 검출되었고, 시상하부 및 뇌하수체 조직에서의 CaM mRNA 발현도 RT-PCR에 의해 측정되었다. 결과. MC 그룹과 비교하여 Cistanche Deserticola 및 WCD 그룹은 활성, 흉선 및 비장의 기관 지수, T, CRH, ACTH, CORT, cortisol, IL{20}} 및 IL의 혈청 수준 증가를 나타냈습니다. -10, CD4 + /CD8 + 비율 및 뇌하수체 조직에서 Bcl-2, caspase-3, Fas, FasL 및 CaM의 발현. /이자형시스탄체 데저티콜라WCD 그룹은 또한 혈청에서 IL{0}}, TNF- 및 IFN-c 수준의 감소와 시상하부에서 CaM mRNA의 발현을 나타냈다. 결론. Cistanche Deseticola와 WCD의 각 용량은 글루코코르티코이드 과다복용 모델 쥐에서 조절되지 않는 성 호르몬과 면역 인자를 중화시켜 시상하부 신경 세포의 효과를 향상 및 회복시키고면역 기능.

소개

시스탄체 데저티콜라"사막의 인삼"이라고 하는 한약재는 수세기 동안 신장을 튼튼하게 하고 양을 튼튼하게 하는 양강장제로 사용되어 온 한약재입니다[1]. Cistanches Herba의 8종과 1개의 변이가 중국에서 기록되었으며 Cistanche Deserticola YC Ma와 Cistanche tubulosa (Schenk) Wight만이 중국 약전에 기록되어 있습니다[2]. 약리학적 연구에 따르면 Cistanches Herba는 신경 보호[3], 면역 조절[4], 심장 보호[5], 항피로[6], 항염[7], 간 보호[8], 항산화[9], 항균[10], 설사 [11] 및 항종양 효과 [12]. 이 속의 보고된 생물학적 활성의 광범위한 스펙트럼은 복잡하고 다양한 식물화학적 구성에 기인합니다. Cistanche Deserticola에는 페닐에타노이드 배당체, 이리도이드, 다당류[13] 등이 포함되어 있습니다. 페닐에타노이드 배당체의 함량은 원래 의약 재료 중 가장 높습니다[14]. 중국 약재(CMM)의 가공은 다양한 요구 사항을 충족시키는 전통적인 약학 기술입니다. 중국 전통 의학 이론에 따라 치료, 분배 및 준비합니다. 이러한 가공된 제품을 달인이라고 하며 병원에서 사용합니다. /가공의 목적은 생약의 효능을 높이고/하거나 독성을 줄이는 것입니다. 2015 Chinese Pharmacopoeia는 Cistanche 두꺼운 조각(CD)과 Cistanche(WCD)를 클리닉에서 달인 조각으로 사용할 수 있다고 기록했습니다. 우리 연구팀은 시탕슈를 청주로 찐 후 완하제 효과가 완화되고 노화 방지 및 신장 양보 효과가 향상되었음을 보여 주었다 [15].

시상하부-뇌하수체-부신-흉선(HPAT) 축의 기능이 신장양결핍증후군에서 장애를 일으킨다[16]. 신장양 결핍 환자는 또한 광범위한 면역 기능 장애를 가지고 있습니다. HPA 축 기능 장애는 면역 결핍과 밀접한 관련이 있습니다. 신경내분비-면역 네트워크(NEI) 이론은 면역계와 신경내분비계가 많은 리간드와 수용체를 공유한다는 것을 보여주고[17], 시상하부는 신경내분비계와 면역계를 연결하는 중추로 간주됩니다.

이 연구에서 우리는 외인성 코르티코 스테로이드 주사로 모델 쥐의 신장 양 결핍을 복제하고 내분비 관점에서 Cistanche Deserticola의 다양한 가공 제품에 대한 반응으로 신장 양 결핍의 메커니즘을 탐구했습니다.면역 기능.

재료 및 방법

재료 및 시약.

시스탄체 데저티콜라2019.5 Alashan Neimenggu에서 채취하여 Yanjun Zhai 교수(중국 랴오닝 중의약대학 약학부)에 의해 Cistanche Deserticola YC Ma의 건조 다육질 줄기로 확인되었습니다. 바우처 표본은 랴오닝 가공 공학 기술 센터에 보존되었습니다.

Jugol의 표준 화합물은 Chengdu Pure Chem-Standard Co., Ltd.(Chengdu, China)에서 구입했습니다. cistanoside F, echinacoside, cistanoside A 및 iso-acteoside는 Must Company(중국 쓰촨)에서 구입했습니다. 악테오사이드는 Dalian Meilun Bio에서 구입했습니다. Co., Ltd.(중국 대련). MS 등급 아세토니트릴 및 메탄올은 Merck KGaA(Darmstadt, Germany)에서 구입했습니다. HPLC 등급 포름산은 Merck KGaA(Darmstadt, Germany)에서 구입했습니다. 막걸리는 Zhejiang Brand Tower Shaoxing Wine Co., Ltd.(Zhejiang, China)에서 구입했습니다.

코르티코스테론(CAS: 50-22-6, 순도 > 98%, TCI Shanghai Development Ltd. Co.), chinkuei shinchuan 환약(Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd.), 쥐 ACTH, CRH, T, IL{{ 2}}, IFN-c, TNF-, IL-2 및 IL{6}} ELISA 검출 키트는 Nanjing Jian cheng Co., Ltd.에서 구입했습니다. /e rat cortisol ELISA 키트는 BOSK Co에서 제공했습니다. ., 래트 CD4 항체, CD8a 항체(번호 561833 및 559976), RBC 용해물(Solarbio, R1010), PBS 완충액(Solarbio, P{12}}), TRIzol(MAN0001271), CaM 및 -액틴 업스트림 및 다운스트림 프라이머는 Guangzhou Invitrogen Co.에서 제공했습니다. Reverse Transcription Kit(no. RR037A) 및 cDNA Synthesis Kit(no. 10000068167)는 Bole Life Medicine Products(Shanghai) Co., Ltd.에서 제공했습니다. 클로로포름, 이소프로판올, 75% 에탄올, 및 우레탄 용액은 모두 분석적으로 순수하고 Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.에서 생산했습니다. 초순수는 Milli-Q 시스템(18.2 MΩ, Millipore, MA, USA)에 의해 생산되었습니다.

실험 기기

효소 마커(Thermo, 모델 3530911931), 자동 접시 세척기(모델 HBS- 4009), 디지털 디스플레이 푸시-풀 힘 측정기(모델 VICTOR- 50N), 고속 동결 원심 분리기(모델 Sigma 3k15) ), 초미세분광광도계(모델 B-50Q), 유전자 증폭기(모델 L96G), 실시간 형광 정량적 PCR(모델 StepOne), 유세포분석기(모델 AC66051710132), 파라핀 마이크로톰(모델 Laika), 현미경(Olympus , 모델 BS{11}}) 및 순수 기기(모델 F7JA36507)가 사용되었습니다.

UPLC-Q-TOF-MS 및 약리학적 실험을 위한 샘플 준비.

WCD는 우리 실험실에서 동일한 배치의 Cistanche Deserticola에서 처리되었습니다. WCD 제조를 위해 건조 CD 조각(두께 5mm)(100g)에 청주(30mL)를 주입하고 고압(1.25kPa)에서 4시간 동안 찐 후 55도에서 건조시켰다.

CD와 WCD의 조분말을 1{2}} 95% 에탄올에 0.5시간 동안 담그고 1시간 동안 3회 환류추출하여 여과하고 3회 여액을 합하였다. /e 에탄올을 감압하에서 회수하여 투여용 추출물을 얻었다. /e 추출물(1mL)을 50% 메탄올에 첨가하여 총 부피를 20mL로 만들고 함량 분석을 위해 4도에서 보관했습니다.

CD 및 WCD 추출물 분석을 위한 UPLC-QqQ-MS 조건

MassLynx 4.1 Analyst 소프트웨어가 포함된 UPLC-MS/MS 시스템을 사용하여 데이터 수집 및 처리를 수행했습니다. /e 분석 컬럼은 40℃의 온도에서 Acquity UPLC BEH C18(1{{10}}0 mm × 2.1 mm, 1.7 μm)이었습니다. /e 이동상은 0.1% 포름산 수용액(A) 및 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴(B)이었습니다. /e 용리 기울기는 0.{15}}–1.{17}} 3% B에서 분, 1.01–2.{22}} 3% –11.5% B에서 분, 2.01–3{{ 29}} 분 12% B, 3.01–4.{34}} 15% B, 4.01–5.{39}} 20% B, 5.01–6.{44}} 분 22% B, 6.01–8.{49}} min, 25% B, 8.01–9.{54}} 10% B. /e 유속은 0.3mL/min, 주입량은 다음과 같습니다. 1.0 μL.

음이온 모드에서는 ESI(electrospray ionization) 소스가 장착된 Waters 삼중 사중 질량 분석기(Xevo TQD, Waters Corp., Milford, MA, USA)를 사용했습니다. /e 탈용매 가스는 250도의 온도에서 500L/h의 유속을 갖는 질소였다. 검출된 모든 화합물은 다중 반응 모니터링(MRM) 모드에서 측정되었습니다. 표 1은 에너지 매개변수를 나타내고 표 2는 분석된 구성 요소에 대한 보정 곡선을 보여줍니다.

참조 물질의 준비

튜불로사이드 A(3.{10}}2 mg), 에키나코사이드(3.00} mg), 2'-아세틸락테오사이드(2.34 mg), 악테오사이드(2.45 mg), 이소악티오사이드(0.61 mg), 시스 타노사이드 F (2.14 mg), 살리드로사이드(3.39 mg), 제니포시드산(2.84 mg), 아쥬골(1.58 mg) 및 카탈폴(2.39 mg)을 메탄올에 용해시켜 스톡 용액을 제조하였다. /e 스톡 용액은 작업 표준 용액에 대한 적절한 농도를 얻기 위해 메탄올로 희석되었습니다. 준비된 모든 용액은 사용하기 전에 4도에서 보관했습니다.

동물 모델의 준비 및 그룹화

SD 수컷 쥐(180-220g)는 Liaoning Chang sheng Biotechnological Co., 동물 허가 번호: SCXK(Liao) 2015-0001에서 구입했습니다. 모든 쥐는 25도, 30-50%의 상대 습도에서 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있도록 유지되었습니다. 동물들은 실험 전 7일 동안 수용되었다.

100마리의 쥐를 무작위로 1{{30}} 그룹으로 나누었습니다: 빈 대조군(BC) 그룹, 모델 대조군(MC) 그룹, 양성 대조군(PC) 그룹, 막걸리 대조군(WC) 그룹, CD 고용량(CD-HD) 그룹, CD 중간 용량(CD-MD) 그룹, CD 저용량(CD-LD) 그룹, WCD 고용량(WCD-HD) 그룹, WCD 중간 용량(WCD-MD) ) 그룹 및 WCD 저용량(WCD-LD) 그룹입니다. CD-HD/WCD-HD, CD-MD/WCD-MD 및 CD-LD/WCD-LD의 /e 용량은 5.48g/(kg·d), 2.74g/(kg·d), 1.37g이었다. /(kg ∙ d), 각각. /e 용량은 PC 그룹의 경우 1.646g/(kg·d)이었고 WC 그룹의 경우 40일 동안 1mL/100g이었습니다. /e 투여 후 6일째에 쥐에게 코르티코스테론 수중 현탁액(코르티코스테론 + 0.1% 디메틸 설폭사이드 + 0.1% Tween-80 + 0.9% 나트륨)을 피하 주사했습니다. 염화물) BC 그룹 제외 [18]. 코르티코스테론의 농도는 5g/L이었고 용량은 0.1mL/100g이었다. BC 그룹의 쥐에게 생리 식염수와 0.1% 디메틸 설폭사이드, 0.1% Tween{46}} 및 0.9% 염화나트륨을 같은 용량으로 주사했습니다.

HPA 축 기능의 결정

무게, 온도 및 유지력 테스트:체중 측정은 3일마다, 체온은 6일마다 측정하였다. 실험 중. 39일째에는 그립 미터로 뒷다리의 최대 근력을 측정하였다. /e 쥐를 부드러운 플랫폼 위에 놓고 뒷다리가 기둥을 잡도록 했습니다. /쥐는 당기는 힘이 그립을 초과할 때까지 꼬리가 당겨질 때 뒤로 움직이는 것을 방지하기 위해 본능적으로 물체를 움켜잡습니다. 쥐가 악력을 잃으면 전치 증폭기는 자동으로 최대 악력을 기록할 수 있습니다.

혈청 내 T, CRH, ACTH, CORT 및 Cortisol의 수준 측정: 마지막 투여 후 1시간 후에 우레탄 용액(20g/100mL)을 복강내 주사하여 쥐를 마취시켰다. /ko, 혈액 샘플을 수집하고 3500 r에서 15 분 동안 원심 분리하여 혈청을 얻은 다음 -20도에서 보관했습니다. T, CRH, ACTH, CORT 및 코티솔의 농도는 제조업체의 지침에 따라 쥐 ELISA 키트로 측정되었습니다.

현미경 관찰: 부신 조직의 형태학적 구조를 H염색으로 관찰하였다. 부신 조직을 10% 파라포름알데히드로 고정하고 에탄올 탈수하고 자일렌 용액으로 투명하게 만들고 기존 방법으로 포매한 후 4μm 두께로 잘라 자일렌 용액으로 탈납하고 에탄올 구배로 수화한 후 헤마톡실린과 에오신으로 염색 염색 용액. 크실렌으로 투명하게 만든 후, 플레이트를 중성검으로 밀봉하고 현미경으로 관찰하였다.

부신에서 Bax, Bcl{0}}, Caspase{1}}, Fas 및 FasL 단백질 발현의 면역조직화학 염색

포르말린으로 고정된 파라핀이 포매된 쥐의 부신 절편을 4 μm 두께로 자른 후 탈파라핀화하고 재수화시켰다. 내인성 과산화효소 활성을 차단하기 위해 섹션을 10분 동안 과산화수소 차단에서 사전 배양했습니다. 섹션을 0.01M 시트르산염(pH 6.0)에 담그고 끓을 때까지 가열했습니다. /e 과정은 5-10분 후에 반복되었습니다. 냉각 후 절편을 PBS(pH 7.2~7.6)로 1~2회 세척하고 상온에서 약 5분간 방치한 후 PBS(pH 7.2~7.6)로 2~3회 세척하였다. /e 5% BSA 차단 용액을 실온에서 첨가하고 섹션의 과량 액체를 20분 후에 흔들어 제거했습니다. Fas/FasL, Bcl{25}}/Bax 및 caspase{26}}에 특이적인 희석된 1차 항체(PBS로 1:100 희석)를 첨가하고 37도에서 1시간 또는 4도에서 밤새 인큐베이션했습니다. /e 절편을 PBS(pH 7.2-7.6)로 2-3회 세척했습니다. /en, biotinylated goat anti-mouse IgG를 첨가하고 절편을 20~37도에서 20분간 건조시킨 후 PBS(pH 7.2~7.6)로 5분간 4회 세척하였다. PBS에서 철저히 세척한 후, 섹션을 시약 A와 B의 혼합물과 함께 30분 동안 배양하고, PBS로 45분 동안 배양하고, 마지막으로 DAB 기질(DAKO)로 30분 동안 현상한 후 헤마톡실린으로 약간 대조염색하고, 탈수하고, 그리고 장착.

면역 기능의 결정

면역 기관 지수 계산:마지막 투여 1시간 후에 우레탄 용액(20g/100mL)을 복강내 주사하여 쥐를 마취시킨 후, 비장과 흉선을 제거하고 멸균 후드에서 즉시 무게를 쟀다. 비장 또는 흉선(%) 비장 또는 흉선 중량(mg)/체중(g)의 중량 계수.

실험 결과

UPLC-QqQ-MS분석:최상의 분리, 피크 모양 및 짧은 분석 시간을 달성하기 위해 예비 실험에서 컬럼, 이동상 및 기울기 프로그램을 포함한 크로마토그래피 조건을 연구했습니다. /e MRM 모드의 일반적인 크로마토그램이 그림에 나와 있습니다.Table 4로부터 WCD의 phenyl ethanol glycosides 함량은 CD에 비해 증가하였으며 특히 echinacoside와 acteoside의 경우 Iridoids 함량이 감소한 반면 WCD의 phenyl ethanol glycosides 함량은 감소하였다.

HPA 축 기능 조절: MC 그룹과 실험 그룹의 쥐는 코르티코스테론을 투여한 후 점차적으로 신장-양 결핍 증상을 나타냈다. /체중 감소, 저체온증, 모발 광택 상실, 축 처진 정신, 반응 지연, 물 소비 및 활동의 현저한 감소와 같은 증상은 CD 및 WCD 그룹에서 크게 개선되었습니다. 그림 2(a)는 무게 변화를 보여줍니다. 각 약물 그룹의 중량은 특히 CD-HD 및 WCD-HD 그룹에서 증가했습니다. MC 그룹의 체중 증가가 가장 낮았습니다. 그림 2(b)는 MC군이 가장 낮았고 WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD군에서 온도가 상승한 온도 변화를 보여주고 있다.

T, CRH, ACTH, CORT 및 Cortisol 수치: 그림 3은 BC군에 비해 쥐 혈청 내 T, CRH, ACTH, CORT 수치가 감소했음을 보여줍니다(P < 0.="" 01)="" mc="" 그룹에서="" 코티솔="" 수치가="" 감소했습니다(p="">< 0.05).="" mc="" 그룹에="" 비해="" wcd-hd="" 및="" wcd-md="" 그룹의="" t="" 수준이="" 증가했으며(p="">< 0.{21}}1),="" wcd-ld의="" crh="" 수준,="" wcd-md,="" wc="" 그룹="" 개선(p="">< 0.01),="" acth="" 함량="" 증가="" cd-hd,="" wcd-md="" 및="" wcd-hd="" 그룹(p="">< 0.01),="" cort="" 수준="" 업그레이드="" cd-md,="" wcd-md="" 및="" wcd-hd="" 그룹(p="">< 0.01)="" 및="" cd="" hd="" 및="" wcd-ld="" 그룹(p="">< 0.05)에서="" 향상되었으며,="" 코르티솔="" 수준은="" 각="" 약물="" 그룹에서="">

현미경 관찰 결과: 부신 조직은 피질층과 수질층으로 나눌 수 있습니다. 피질층에는 구상층, 다발층, 망상층이 있습니다. 세포는 더 많은 지질을 포함하고 수질층은 대부분 갈색세포종 세포와 소량의 섬유 조직으로 구성됩니다. 그림 4에서 볼 수 있듯이 BC군에서는 모두 정상인 반면 MC군에서는 부신피질에 명백한 증식, 세포 위축 및 밀도 증가가 있음을 발견했습니다. 구근 띠가 두꺼워지고 반투명한 다발대, 좁은 망상대, 작은 세포는 불균일한 색과 모세혈관 울혈을 보였다. PC군에서는 피질과 수질 경계가 보였다. 구상띠와 속띠의 세포가 고르게 배열되어 있고 형태학적 구조가 회복되었다. WCD군에서도 동일한 수복이 관찰되었고, WCD-MD군이 WCD-HD 및 WCD-LD군보다 효과가 더 좋았다. CD 그룹에서 부신의 형태는 WCD 그룹만큼 좋지 않았습니다.

면역조직화학: 신경세포의 세포사멸은 많은 세포사멸 및 항세포사멸 유전자, 주로 세포사멸 촉진 유전자 Bax 및 Bcl{2}} 유전자 패밀리의 항세포사멸 유전자에 의해 제어됩니다. Bcl-2은 미토콘드리아, 소포체 및 핵막과 같은 활성 산소 생성 소기관에 국한되어 있습니다. Bcl-2은 활성산소에 거의 영향을 미치지 않지만 세포의 산화적 손상을 예방할 수 있습니다. Bax는 세포질에서 미토콘드리아 막으로 수송하고 미토콘드리아 막 구조를 변화시키며 사이토크롬 c의 방출과 세포자멸사 유도를 촉진합니다.

Bax 및 Bcl{0}} 단백질의 부신 세포질에서 발현이 있었다. /염색은 모든 노란색 입자를 보여주었습니다. BC군에 비해 Bax 단백질의 평균 광학밀도는 MC군에서 유의하게 증가하였다(P < 0.01).="" mc="" 그룹과="" 비교하여="" cd-ld="" 및="" wcd-ld="" 그룹의="" 평균="" 광학="" 밀도는="" 유의하게="" 감소했습니다(p="">< 0.01)(그림="">결과는 CD와 WCD가 FasL 단백질의 발현을 촉진하고 Fas 단백질에 결합하여 caspase{0}} 단백질을 활성화하고 caspase cascade를 촉발함으로써 염증 세포에서 세포자멸사를 유도하고 부신 손상을 감소시킬 수 있음을 보여주었습니다. WCD-HD 그룹의 효과가 가장 좋았습니다.

면역 기능의 결정

면역 기관 지수

BC군에 비해 흉선계수와 비장지수는 MC군에서 유의하게 감소하였다(P < {0}}.01).="" mc군에="" 비해="" wcd-md군이="" 가장="" 큰="" 차이를="" 보였다(p="">< 0.05).="" 선="" 계수는="" 거의="" 정상="" 수준으로="" 돌아왔습니다.="" 비장="" 지수는="" wcd="" md,="" wcd-ld,="" cd-md="" 그룹이="" mc="" 그룹과="" 유의한="" 차이를="" 보였다(p="">< 0.01)(그림="" 6="" 참조).="" 따라서="" wcd와="" cd="" 치료는="" 면역="" 기관을="" 보호할="" 수="" 있고="" wcd의="" 효과는="" 더="">

말초 혈액에서 T 림프구 하위 집합의 검출

BC 및 각 약물 그룹의 왼쪽 상단 사분면에 있는 CD4 플러스 세포와 오른쪽 하단 사분면에 있는 CD8 플러스 세포의 비율은 MC 그룹보다 높았습니다. CD4+/CD8+의 비율은 BC 그룹에 비해 MC 그룹에서 유의하게 감소했습니다(P < 0.01).="" mc="" 그룹과="" 비교하여="" cd4="" +="" d8="" +="" 비율은="" pc="" 그룹,="" wcd="" 그룹="" 및="" cd-hd="" 그룹에서="" 유의하게="" 증가했습니다(p="">< 0.01)(그림="" 7).="" il="" 수준의="" 결정{="" 혈청="" 내="" {12}},="" il{13}},="" il{14}},="" tnf-="" 및="">

그림 8은 BC군과 비교하여 IL-6, TNF- 및 IFN-c의 수준이 유의하게 증가함을 보여줍니다(P < 0.01).="" il-10="" 및="" il-2의="" 수준은="" mc="" 그룹에서="" 감소했습니다.="" mc="" 그룹과="" 비교하여="" 각="" 약물="" 그룹에서="" 혈청="" 내="" il-6,="" tnf-="" 및="" ifn-c의="" 수준은="" 감소하고="" il{11}}="" 및="" il{12}}="" 수준은="" 증가했습니다.="" wcd의="" 효과는="" cd의="" 효과보다="" 더="" 좋았으며,="" 특히="" wcd-md군에서="" pc군에="" 가까운="" 효과를="">

흉선 조직 현미경 관찰 실험 결과

그림 9는 BC 그룹에서 많은 수의 림프구가 존재함을 보여줍니다. 림프구와 망상적혈구는 원형 또는 타원형의 흉선세포가 흩어져 중앙에 느슨하게 배열되어 있습니다. 괴사, 염증 세포 침윤 및 비정상적인 변화가 없었습니다.

MC군은 중심에 림프구와 망상적혈구의 무질서한 배열과 함께 다량의 림프괴사 조직을 보였다. 원형 또는 타원형의 흉선세포는 소실되었고, 대량의 세포 변성 또는 괴사가 명백하였고, 비정상적인 병리학적 변화와 함께 염증성 세포 침윤이 있었다.

CD군에서는 림프구의 형태적 특성이 정상으로 회복되었고 중심림프구와 망상적혈구의 배열도 거의 정상이었다. 원형 또는 타원형 흉선 세포는 회복되었지만 소수의 퇴행성 또는 괴사성 림프구와 침윤성 염증 세포가 남아 있었습니다.

WCD 그룹과 PC 그룹에서 림프구의 형태학적 특성이 더 잘 복구되었습니다. /e 중앙의 림프구와 망상적혈구는 잘 정렬되어 있었고, 원형 또는 타원형 흉선세포는 거의 정상이나 소수의 침윤성 및 퇴행성 림프구가 남아 있었다.

CAM 단백질 유전자 발현

RQ 값(CaM mRNA/-액틴 mRNA)은 CaM mRNA의 발현을 조사하기 위해 고려되었다. BC군의 RQ는 1이었다. MC군의 시상하부에서 CaM mRNA의 발현은 유의하게 증가한 반면(P < 0.01),="" wcd-hd에서는="" 값이="" 감소한="" 반면,="" wcd-md,="" wcd="" ld="" 및="" cd-hd="" 그룹(p="">< {{1{17}}}}.05)(그림="" 10).="" 뇌하수체에서="" cam="" mrna의="" 발현은="" mc군이="" bc군보다="" 낮았다(p="">< 0.01).="" 발현은="" wcd-hd,="" wcd-md,="" wcd-ld,="" cd-hd,="" cd-ld="" 군에서="" 증가하였고(p="">< 0.05),="" wcd="" 군에서="" cd="" 군보다="" 효과가="" 더="">

논의

중국 약전[2]에는 CD와 WCD가 달인의 주요 유형으로 임상에서 사용될 수 있다고 기록되어 있습니다. 청주와 함께 찐 후에는 항노화 및 강장제 신장양 효과가 향상되었습니다. UPLC-QqQ-MS를 통해 청주 찜 과정에서 화학물질 기반의 정량적 변화를 감지했습니다. Iridoid 배당체는 불안정했고 이러한 배당체의 함량이 감소하여 감지할 수 없게 되었습니다. 페닐 에탄올 배당체의 함량도 변화하여 약력학 및 임상 효과의 변화를 유발할 수 있습니다.

고전적인 신장-양 결핍 모델은 코르티코스테론의 피하 주사에 의해 복제되었습니다[19]. 과다 복용 코르티코스테론은 시상 하부에서 CRH의 비밀을 억제할 수 있습니다. 한편 ACTH의 비밀도 억제되었다. /부신피질호르몬 수치가 감소하여 HPA축의 기능이 저하되었다. HPA 축의 기능저하가 신장양결핍의 일반적인 특징이다[20]. 그러자 쥐는 '고갈' 현상이 나타나며 임상에서 신장양결핍증과 같은 증상을 보인다.

MC군에서 쥐의 혈청 내 CRH, ACTH, T, CORT 수치는 유의하게 감소하였다(P < 0.01).="" cd와="" wcd로="" 치료한="" 후="" crh,="" acth,="" t,="" cort,="" cortisol의="" 함량이="" 모두="" 어느="" 정도="" 증가하였고="" wcd-md의="" 효과가="" 가장="" 우수하여="" pc군과="" 거의="" 대등하였다.="" 이러한="" 결과는="" mc="" 그룹에서="" hpa="" 축의="" 상대적인="" 호르몬="" 균형이="" 파괴되었으며="" cd와="" wcd가="" 비정상적인="" 부신축="" 호르몬="" 수치의="" 기능="" 회복을="" 향상시킬="" 수="" 있지만="" wcd의="" 효과가="" 더="" 우수함을="">

Bcl{0}} 계열 구성원의 비율을 조절하는 것은 Fas/FasL이 사멸 수용체 경로를 매개하고 Bcl{1}} 계열이 미토콘드리아 경로를 조절하는 핵심 메커니즘 중 하나입니다[21]. Bax와 같은 Apoptosis-inhibiting factor Bcl-2과 apoptosis-inducing factor는 모두 Bcl-2 family[22]에 속한다. 세포 사멸은 세포 사멸 억제 인자와 세포 사멸 유도 인자의 상대적 비율에 의해 결정될 수 있다[23]. 미토콘드리아는 많은 형태의 세포자멸사에 대한 중앙 체크포인트의 기능을 가지고 있습니다[24]. 본 연구에서는 CD-MD와 WCD가 Bax의 발현을 추론하고 Bcl{13}}을 증가시켜 신장-양 결핍을 개선할 수 있음을 보여주었습니다. Fas는 Fas 리간드(FasL)와의 결찰에 의해 세포자멸사를 유도하는 주요 사멸 수용체이다[25]. Fas와 FasL의 발현은 MC군에서 증가하였고, 이 발현은 MC군에 비해 WCD-MD군에서 유의하게 증가하였다(P < 0.01).="" fas/fasl="" 및="" bax/bcl{19}}="" 시스템은="" 모두="" caspase="" 계열에="" 세포자멸사="" 신호를="" 변환합니다[26].="" caspase{21}}는="" 세포="" 사멸을="" 시작하는="" 중추적인="" 단백질분해효소="" 중="" 하나입니다.="" caspase{22}}의="" 활성화는="" apoptosis가="" 비가역적인="" 단계에="" 들어간다는="" 것을="" 의미합니다[27].="" mc군에서="" caspase{24}}의="" 발현은="" wcd-hd군과="" wcd-md군에서="" 유의하게="" 증가하였다(p=""><>

의 결핍면역 기능신장양 결핍증의 중요한 징후 중 하나입니다[28]. 이 연구에서 우리는 WCD-MD 그룹의 비장과 흉선 지수가 유의하게 회복되었음을 발견했습니다(P < 0.01,="" p="">< 0.{{3{="" {32}}}}5).="" 면역="" 체계의="" 면역="" 반응은="" 주로="" 하위="" 그룹에="" 의해="" 조절됩니다[29].="" il-2은="" t="" 세포="" 및="" 대식세포에서="" 분비되는="" t="" 세포의="" 성장="" 인자로="" 염증="" 조절에="" 참여하고="" 면역을="" 조절하며="" 감염="" 저항을="" 증가시킵니다[30].="" mc군의="" il{10}}="" 수치가="" 감소하였고(p="">< 0.01),="" cd와="" wcd="" 치료="" 후="" il{13}}="" 수치가="" 회복되었습니다.="" il{14}}="" 및="" tnf-는="" 전염증성="" 사이토카인입니다.="" il{16}}="" 및="" tnf-사이토카인의="" 증가된="" 수준은="" 사이토카인="" 불균형을="" 유발하고="" 염증을="" 악화시킵니다.="" il{19}}="" 및="" tnf-="" 수치는="" mc="" 그룹에서="" 증가했지만="" 치료="" 후="" il{21}}="" 및="" tnf-="" 수치는="" 감소했습니다.="" t="" 세포는="" cd4="" 세포와="" cd8="" 세포로="" 구분되며,="" cd4="" plus="" d8="" plus="" 비율은="" 면역="" 조절의="" 중요한="" 지표로="" 사용될="" 수="" 있다[31].="" mc="" 그룹에서="" cd4="" +="" d8="" +는="" 분명히="" 감소한="" 반면(p="">< 0.01),="" wcd="" 및="" cd="" hd="" 그룹에서는="" 증가했습니다(p=""><>

HPA 축은 당질코르티코이드 분비와 내분비계를 조절하여 부신피질의 분비 기능을 유지하기 때문에 가장 중요한 조절계이다[32]. 시상하부 조직에서 CaM mRNA의 과발현은 신장양 결핍과 관련이 있었다. CD와 WCD는 칼슘 채널을 차단하고, 시상하부에서 CaM mRNA 발현을 억제하고, 칼슘 유입을 감소시켜 Ca2 + CaM 복합 활성을 감소시킬 수 있습니다.

신양 결핍의 형성은 만성 질환의 발달 과정을 가지고 있습니다. 신장은 더 이상 순전히 해부학적인 개념이 아니며 신경내분비-면역 및 비뇨생식기 계통의 총칭입니다. 신경내분비-면역(NEI) 네트워크는 중요한 통합 조절 시스템입니다[33]. CD와 WCD는 HPAT 축의 기능을 조절하고 신장-양 결핍의 회복을 개선할 수 있습니다. /is 결과는 신장양결핍증의 임상적 예방 및 치료를 위한 실험적 근거를 제공합니다.

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