네오헤스페리딘의 노화 방지 잠재력과 그 시너지 효과 1부
May 26, 2022
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추상적인:많은 식물 플라보노이드의 노화 방지 활동과 그 작용 기전이 현재 문헌에서 조사되었습니다. 그러나 다른 플라보노이드 화합물 간의 시너지 효과에 대한 연구는 이전 보고서에서 상당히 제한적이었습니다. 이 연구에서 우리는 높은 처리량 분석을 사용하여 효모의 연대기적 수명(CLS) 전반에 걸쳐 서로 다른 감귤류 플라보노이드 간의 시너지 효과를 테스트했습니다. 우리는 naringin, hesperidin, hesperidin, neohesperidin을 포함한 4가지 플라보노이드 화합물과 효모 균주 BY4742의 CLS에 대한 다양한 조합의 효과를 연구했습니다. 그들의 ROS 소거 능력, 시험관 내 항산화 활성 및 세포 외 pH에 대한 영향도 테스트되었습니다. 결과는 네오헤스페리딘이 농도 의존적 방식으로 효모의 CLS를 확장함을 보여주었다. 특히, 네오헤스페리딘은 신진효모의 CLS를 개별적으로 또는 헤스페레틴과 상승적으로 확장하는데 큰 잠재력을 보여주었다. Neohesperidin은 효모에서 활성산소종(ROS) 축적을 감소시키는 가장 강력한 기능을 나타냈다.청교도 비타민 C이러한 발견은 네오헤스페리딘이 잠재적으로 항노화 감귤 플라보노이드임을 분명히 나타내며, 효모의 CLS에 대한 다른 플라보노이드와의 시너지 효과는 감귤류의 항노화 기능에 대한 향후 연구에서 흥미로운 주제가 될 것입니다.
키워드:감귤류 플라보노이드; 네오헤스페리딘; 노화 방지 활동; 연대기 수명; 시너지 효과
1. 소개
복잡하고 다인적인 생물학적 과정인 노화는 생리적, 심리적 완전성의 점진적인 상실로 정의될 수 있으며, 이는 거의 모든 기능의 점진적인 악화와 죽음에 대한 취약성의 증가로 이어집니다[1]. 노화 과정 내의 여러 요인 및/또는 경로를 표적으로 하는 치료법은 연구에 적합한 후보입니다. 현재 인구 고령화 추세는 점차 증가하고 있습니다. 이러한 인구 추세로 인해 노화를 늦추거나 건강한 노화 상태를 개선할 수 있는 효과적인 방법을 찾는 것이 실질적으로 매우 중요합니다. 파이토케미칼의 노화 방지 활성은 다양한 분야의 연구자에 의해 연구되었습니다. 기존 문헌[2-5]에서 다양한 식물 화합물이 직접적/잠재적 노화 방지 활성을 갖는 것으로 제안되었습니다.
신진 효모 Saccharomyces cerevisiae는 인간 노화 및 노화 관련 질병과 관련된 진화적으로 보존된 메커니즘을 연구하기 위한 모델 유기체로서 선도적인 역할을 해왔습니다[6]. 효모의 수명에는 복제 수명(RLS)[7]과 연대기 수명(CLS)[8]의 두 가지 유형이 있습니다. RLS는 세포 출아가 중단되기 전에 모세포가 생산할 수 있는 딸세포의 수로 정의되며[9], CLS는 신진 효모 세포가 정지기에서 영양 고갈로 인한 세포 주기 정지를 겪은 후 생존하는 시간의 길이입니다[9]. 10]. RLS와 CLS는 각각 고등 진핵생물에서 증식하는 조직과 비증식하는 조직에 대한 모델 역할을 할 수 있습니다[6].
전통 의학에서 한약의 조합을 오랫동안 성공적으로 사용함으로써 우리는 건강한 기능을 가진 파이토케미칼의 시너지 효과를 연구하게 되었습니다.시스탄체최근 시너지 평가는 치료의 효율성을 높이고 하나의 단일 대상뿐만 아니라 여러 대상에 영향을 미치기 위해 의료 연구의 핵심 영역이 되었습니다[11]. 이전 조사에서는 감귤류에 널리 분포되어 있는 나린진, 헤스페리딘, 헤스페레틴, 네오헤스페리딘이 노화방지와 관련된 여러 생물학적 활성을 갖고 있음을 보여주었고, 이들 파이토케미칼에 대한 자세한 정보는 문헌[12-21]에 나와 있습니다. 그러나 파이토케미칼은 조합으로 덜 평가되었습니다. 적어도 이들의 삼항 조합은 거의 보고되지 않았습니다. 한편, 신진효모 BY4742의 CLS에 대한 네오헤스페리딘의 효과는 이전에 밝혀지지 않았다.
신진 효모 BY4742의 CLS 연장에 대한 플라보노이드 조합 기능을 밝히기 위해 4가지 플라보노이드 화합물, 효모 BY4742의 CLS에 대한 2원 및 3원 조합 효과, 이들의 ROS 소거능 및 시험관 내 항산화 활성도 또한 현재 테스트되었습니다. 일하다. 한편, 4가지 화합물을 처리한 효모의 세포외 pH 값은 배양 배지의 세포외 산성화가 시간순으로 노령화되는 인구에서 세포내 손상을 유발할 수 있기 때문에 검출되었다[22].
2. 결과
2.1. 농도 의존 방식으로 네오헤스페리딘의 효모 수명 연장
DMSO는 수불용성 약물의 용매로 보편적으로 사용되었으며 DMSO의 농도에 따라 효모의 성장에 다양한 영향을 미쳤습니다[23]. 따라서 먼저 적절한 DMSO 농도를 스크리닝했습니다. 그림 1(A)에서 볼 수 있듯이, 배양 배지에서 0.2% 및 0.4% DMSO에서 대조군과 비교했을 때 효모 수명에는 유의한 차이가 없었지만, 0.6% 및 0.8% DMSO가 크게 감소했습니다. 실험에서 용매의 영향을 제거하기 위해 다음 실험을 수행하기 위해 DMSO의 최종 배지 농도를 0.2%로 설정했습니다.
Cistanche 캔 안티 에이징
광대한 연대기적 노화 모델의 장점에 대한 CLS의 신속한 정량화를 위해 고처리량 분석이 사용되었습니다[24,25]. 따라서 우리는 이 방법을 사용하여 4가지 감귤 플라보노이드(나린진, 헤스페리딘, 헤스페레틴 및 네오헤스페리딘)의 노화 방지 활성을 스크리닝했습니다. 우리는 0 μM에서 100 μM 범위의 용량에서 4가지 식물화학물질의 장수 효능을 확인했습니다. 그 결과, 네오헤스페리딘은 0.1μM에서 BY4742의 CLS를 연장할 수 있는 가능성을 보인 반면, 다른 세 화합물은 설정된 농도에서 세포 생존을 증가시킬 수 없었습니다(그림 1B)편의를 위해 조합 실험의 경우 A, B, C 및 D의 농도가 각각 100, {{2{22}}}}.1,0.1 및 0.1μM으로 선택되었습니다. 즉, 다음 조합 분석을 위해 A(100μM naringin), B(0.1μM 헤스페리딘), C(0.1μM 헤스페레틴) 및 D(0.1μM 네오헤스페리딘)가 사용되었습니다.
처리의 누적 시간은 세포 성장에 영향을 미치는 중요한 요소로 생각됩니다. 이 가설에 따르면, 우리의 데이터는 4가지 플라보노이드 화합물이 다른 처리 시간에서 24시간을 추가한 후 즉시 세포 성장에 영향을 미치지 않는다는 것을 암시했습니다(그림 2). A, B, C, D를 처리한 효모의 생장곡선이 대조군과 거의 같았기 때문이다.시스탄체란 무엇인가이것은 또한 4가지 화합물이 효모 세포 성장을 억제하지 않는다는 것을 보여주었다. 그러나 처리가 2일째에 시작되면 성장 생존율/CLS가 오래 지속되는 기간 동안 변경될 수 있습니다(그림 3).
그림 3. (A) 2일째부터 2일째0까지 다양한 화합물 및 이들의 조합을 처리한 효모 BY4742의 생존율을 2일마다 측정했습니다. 생존율은 다음과 같이 계산하였다. 여기서 tOD= 0.3,2day는 성장 곡선에서 2일째 연령 포인트의 OD 값이 0.3에 도달하는 시간입니다. 초기 연령 포인트(2일째)는 100% 생존율로 정의되며 각 연속 연령 포인트의 상대 생존 백분율은 다음과 같이 계산할 수 있습니다. =,—×100n =일, Dt는 평균 배가 시간을 나타냅니다. 각 웰의 생존 적분(S)은 생존 곡선 아래의 면적(AUC)으로 정의되며 다음 공식으로 추정할 수 있습니다. SI=E(L plus )(day-day-1), 여기서 daym은 2일, 4,6,8,10, 12,14,16,18 및 20일과 같은 연령 포인트입니다. (B) 4가지 플라보노이드 화합물과 이들의 이원 및 삼원 조합이 연대기 수명에 미치는 영향 효모 BY4742의 유익한 농도. AUC는 곡선 아래 면적을 의미합니다. 일원 분산 분석 다중 비교. 데이터는 평균값±평균의 표준 오차(SEM), n=4으로 표시되었습니다.*p<><0.0001.a（100um naringin）,="" b（0.1="" μm="" hesperidin）,="" c（0.1="" μm="" hesperetin）,="" d="" （0.1="" μum="">
2.2.네오헤스페리딘은 효모 BY4742의 CLS를 확장하기 위해 헤스페레틴과 긍정적으로 상호작용합니다
병용 요법은 당뇨병[26], 암[27], 심혈관 질환[28], 비만 및 골다공증[29]과 같은 많은 질병을 관리하는 새롭고 매우 효과적인 치료 전략으로 입증되었습니다. 여기에서 우리는 신진 효모 BY4742의 CLS에 대한 나린진, 헤스페리딘, 헤스페레틴 및 네오헤스페리딘의 이원 및 삼원 조합의 효과를 연구했습니다. 그림 3A는 다양한 플라보노이드 처리에서 효모의 생존율을 보여줍니다. 각 처리에 대해 10개의 노화 지점이 감지되었습니다. 일부 치료의 생존율이 대조군에 비해 더 높은 것으로 나타났습니다.안티에이징 시스탄체그림 3B에서 결과는 D, BD 및 ABD의 처리가 유의한 차이를 나타냄을 분명히 보여주었습니다(p<0.05), just="" weaker="" than="" cd="" and="" bcd=""><0.0001). we="" can="" see="" that="" d(neohesperidin)showed="" an="" important="" function="" in="" the="" individual="" or="" synergistically="" treatments.="" therefore,="" we="" could="" conclude="" that="" neohesperidin="" had="" great="" potential="" in="" increasing="" cls="" of="" budding="" yeast="" by4742="" individually="" or="" synergistically="" with="">
2.3. 네오헤스페리딘은 세포 내 반응성 산소 종(ROS) 함량을 현저히 감소시켰습니다.
Harman에 따르면 미토콘드리아에서 생성된 ROS에 의한 세포 구성 요소 손상은 유기체의 노화 과정을 가속화하는 주요 요인입니다[30,31]. 도 4A에 도시된 바와 같이, 4개의 플라보노이드는 모두 현저한 ROS 소거능을 나타냈다. 4가지 단일 치료 중 네오헤스페리딘이 가장 두드러진 효과를 보였다.시스탄체 혜택결합된 다른 치료, 모든 삼원 결합 및 BD 역시 세포내 ROS를 감소시키지 않았습니다. AB, AC, AD 및 BC와 같은 이원 조합의 경우 해당 단일 물질보다 높은 ROS 소거 활성을 보였다. 이진 조합 BD의 ROS 소거 능력은 B와 D 사이에 있는 반면 CD의 기능은 D와 거의 동일합니다.
그림 4. (A) A(100 μM 나린진), B(0.1 μM 헤스페리딘), C(0.1 μM 헤스페레틴), D(0.1 μM 네오헤스페리딘)의 효과 ), 2일 동안 처리한 후 표준 SD 배지에서 성장한 효모(BY4742)의 세포내 ROS 수준에 대한 이진 및 삼원 조합(n{10}}). ROS 프로브 H2DCFDA를 사용했습니다. 디클로로디히드로플루오레세인(DCF). 일원 분산 분석 다중 비교. 데이터는 평균값 ± 평균(SEM)의 표준 오차, n=12으로 표현되었습니다. * 피<0.0001;(b)the antioxidant="" capacity="" （y="" m="" trolox="" equivalents/μm="" phytochemical）="" of="" a="" （naringin）,="" b（hesperidin）,="" c="" （hesperetin）,="" d="" (neohesperidin)="" and="" their="" binary="" and="" ternary="" combinations="" evaluated="" by="" 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl="" (dpph,="" frap="" and="" abts="" assays.="" apci="" (antioxidant="" potency="" composite="" index)="Z(the" sample="" data="" of="" each="" method/the="" highest="" sample="" data="" of="" every="" method)/the="" number="" of="" methods="" ·100.="" the="" higher="" the="" apci="" is="" the="" lower="" the="" rank="" number="">
이 기사는 Molecules 2019, 24, 4093에서 발췌했습니다. doi:10.3390/molecules24224093 www.mdpi.com/journal/molecules
