Cistanche Tubulosa 추출물이 Echinacoside(ECH) 및 Acteoside(ACT)의 낮은 장 투과성 개선에 미치는 유익한 효과.
Mar 25, 2022
연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com
타니노아 타다토시, 나가이브 노리아키, 후나카밉 요시노리
* Tokushima Bunri University, Tokushima, b 약학부, Kinki University, 오사카, 일본
추상적인
목표이 연구의 목적은 유익한 효과를 다루는 것이었습니다.시스탄체세뇨관발췌에키나코사이드(ECH) 및 액테오사이드(ACT)의 낮은 장 투과성을 개선합니다.행동 양식C. tubulosa 추출물에서 ECH 및 ACT의 흡수는 손상되지 않은 화합물이 있는 인간 장 Caco{0}} 세포 단층을 사용하여 특성화되었습니다. ECH 및 ACT의 포도당 수송체 의존적 흡수는 제자리 장 관류 기술에 의해 확인되었습니다.중요한 발견들겉보기 투과성(Papp)은 온전한 ECH와 온전한 ACT 간에 크게 다르지 않았습니다. 플로리진이 있는 경우 고용량에서 ECH 및 ACT의 Papp은 각각의 비치료의 20%로 감소했지만 플로레틴과 베라파밀에 의해 변경되지는 않았습니다. C. tubulosa 추출물은 저용량 및 고용량에서 ECH 및 ACT의 Papp을 향상시켜(둘 다 3배) 나트륨 의존성 포도당 수송체-비의존적 흡수에 크게 참여했습니다. 낮은 농도에서 문맥 혈액의 동시 ECH 및 ACT 수준은 플로리진에 의해 유의하게 억제되었습니다.결론식이 및 약용 C.세뇨관발췌ECH와 ACT의 장 흡수를 높이는 것은 플로리진에 민감한 수송의 관여를 줄여야 하지만 인간의 건강을 더 잘 관리하는 데 도움이 될 수 있습니다.
키워드악티오사이드; Caco{0}} 세포 단층;시스탄체세뇨관발췌; 에키나코사이드; 플로리진에 민감한 포도당 수송체
소개
의 뿌리시스탄체세뇨관전통적으로 약과 음식에 사용되었습니다. C. tubulosa 추출물은 다양한 뇌 질환, 노화 방지 기능, 지방 대사 및 모발 성장에 약리 효과가 있는 것으로 알려져 있습니다.[1-4] 최근 C. tubulosa에서 iridoids, monoterpenoids, phenylethanoid glycosides 및 lignans가 분리되었습니다. . [5,6] 폴리페놀계 화합물의 한 종류인 페닐에타노이드 배당체는시스탄체종,[7] 비록 그 양은 종에 따라 다릅니다. Echinacoside(ECH; 그림 1)는 Herba Cistanchis의 주요 페닐에타노이드 배당체 중 하나입니다. 대장에서 박테리아 기원의 효소에 의해 악테오사이드(ACT; verbascoside라고도 함)로 가수분해됩니다.[8,9] ECH와 ACT는 설치류 동물에서 간 보호[10] 및 항염[11]의 유익한 활성을 가지고 있습니다. 놀랍게도, 높은 수용성 ECH는 파킨슨병 마우스 모델에서 행동 및 신경화학적 결과를 개선하고 소뇌 과립 뉴런에서 caspase-3 및 caspase{9}} 활성화를 억제합니다.[9] 혈액뇌장벽은 생체이물이 혈액에서 뇌로 들어가는 것과 분포를 엄격하게 제한하는 것으로 잘 알려져 있습니다. Wu et al. [12] 또한 수용성 ACT가 쥐의 뇌 조직에 빠르게 분포한다는 것을 보여주었다. 따라서 ECH와 ACT는 특정 시스템에 의해 뇌, 장 및 간으로 수송될 수 있습니다.
그림 1 echinacoside와 acteoside의 화학 구조.
C. tubulosa 추출물의 섭취가 인간의 건강에 이롭다는 강력한 증거가 있지만, 8.4 ± 1.6 ug/ml의 정점 농도에서 Caco{0}} 세포 단층을 가로지르는 순수한 ECH의 투과성은 세포주위 수송 마커인 만니톨과 같거나 그 이하입니다.[13] 순수한 ECH를 쥐에게 경구 투여하면(용량, 1{{1{13}}}}0 mg/kg), 흡수가 매우 빠르고(Tmax, 15분), 최대 혈청 농도는 매우 높습니다. 낮음(Cmax, 0.61 ± 0.32ug/ml).[14] ECH의 절대 생체이용률은 0.83%에 불과합니다. 유사하게, Caco{15}} 세포가 올리브 밀 폐수에서 부분적으로 정제된 페놀성 분획과 함께 배양될 때 순수한 ACT 흡수는 3분 후에 발생하는 피크 축적과 0.1%의 총 축적 효율로 빠르게 이루어집니다. 130pmol/mg 세포 단백질의 세포내 수준.[15] 쥐에서 순수 ACT의 최대 농도(0.13 ± 0.03 ug/ml)는 100 mg/kg을 경구 투여한 후 30분 이내에 도달했으며[12] 이는 빠른 장 흡수를 의미합니다. ACT와 ECH의 경구 생체이용률은 상당히 낮아(0.12 ± 0.04%) 장관과 간에서 초회통과 효과의 가능성을 시사합니다. 쥐의 담즙에서 ECH의 메틸화 및 글루쿠로나이드화 접합체가 주요 대사산물이지만[16], 간 대사의 정도는 아직 불분명합니다. 우리는 사전에 ECH와 ACT가 쥐의 장 점막과 인공 위산의 균질액에서 상당히 안정하다는 것을 발견했습니다(데이터는 표시되지 않음). Najar et al. [17]은 ACT가 베라파밀(대표적인 P-gp 억제제)과 유사한 방식으로 P-당단백질(P-GP)-ATPase 활성을 억제한다는 것을 입증했으며, 이는 P-gp 조절제를 암시합니다. 그러나 ACT가 P-gp 기질로 사용 가능한지는 확실하지 않습니다. 흥미롭게도 식이성 플라보노이드-D-글루코사이드의 최근 발견은 다제내성 단백질(MRP2)이 나트륨 의존성 포도당 수송체(SGLT){45}} 매개된 케르세틴 4'-O{48}}포도당 흡수를 가리고, [18,19] 흡수율이 매우 낮습니다. 그러나 포도당 수송체를 포함한 흡수성 수송체에 대한 폴리페놀 글루코사이드의 민감도에 대해서는 알려진 바가 거의 없습니다. 퀘르세틴 4'-글루코시드 및 빠르게 혈액뇌장벽 투과성 ECH의 흡수 특성에 대한 정보는 식이 C. tubulosa 추출물에서 페닐에타노이드 배당체의 수송체에 민감한 흡수를 조사하게 했습니다.
이 연구에서 우리는 인간 장 Caco{1}} 세포 단층을 사용하여 온전한 ECH와 ACT의 포도당 수송체 매개 흡수를 조사했습니다. 동시에, 식이 C. tubulosa 추출물에서 ECH 및 ACT 수반되는 흡수 수송은 간 우선 흡수의 정도와 회피를 쉽게 구별할 수 있는 포털 혈액 샘플링을 사용한 체외 모델 및 제자리 장 관류 시스템을 특징으로 합니다. - 패스 처리.
재료 및 방법
재료
Intact ECH와 ACT는 Eishin Trading Co., Ltd(일본 오사카)로부터 관대한 선물이었습니다. 플로리진과 플로레틴은 Tokyo Kasei Co., Ltd.(Tokyo, Japan)에서 구입했습니다. 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 분석의 내부 표준으로 사용되는 Verapamil 및 p-coumaric acid는 Sigma-Aldrich(St Louis, MO, USA)에서 입수했습니다. 사용된 다른 모든 화학 물질은 분석 등급이었고 상업적으로 이용 가능했습니다.
식물 재료 및 메탄올 추출물의 제조
C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)는 Salvadora 또는 Calotropis 종의 뿌리에서 자라는 다년생 기생 식물로 북아프리카, 아라비아 및 아시아 국가에 분포합니다. C. tubulosa의 말린 줄기를 분말화하고 3시간 동안 환류하에 메탄올로 3회 추출하였다. 감압하에 용매를 증발시켜 메탄올성 추출물을 제공하였다. 메탄올 추출물(상업용 등급, 배치 번호 20070130;
등록 상표명, Sabaku Ninnjinn Kanka)는 Eishin Trading Co., Ltd에서 Muraoka and Morikawa(Kinki University, 일본)를 통해 아낌없이 선물했으며, 식물 식별은 Xinjiang Institute of Chinese Institute의 Jia Xiaoguang 교수에 의해 수행되었습니다. 민족 의학.
식물 추출물 분석: 크로마토그래피
C. tubulosa 추출물(Batch No. 20070130)에서 ECH 및 ACT 함량을 아래에 설명된 HPLC 분석으로 측정했습니다. 얻어진 데이터를 표 1에 나타내었다.
세포 배양
American Type Culture Collection(ATCC, Rockville, MD, USA)에서 구입한 Caco{0}} 세포를 계대 38-53에서 사용했습니다. 그들은 0.1mM 비필수 아미노산, 10% 열 불활성화 소 태아 혈청, 100U/ml 페니실린 G 및 0.1mg/ml 스트렙토마이신 설페이트.
운송 연구
Caco{0}} 세포는 폴리카보네이트 필터에 6.4 × 103 cells/cm2의 밀도로 도금되었습니다. 단층은 파종 후 21-25일에 수송 실험에 사용되었습니다. 의 내용에 해당하는 온전한 ECH 및 ACT시스탄체세뇨관 발췌(4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (fifinal concentration, 1 mM) and verapamil (fifinal concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (fifinal concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300Ω·cm2.
원위치 장 관류
수컷 Wistar 쥐(23{{20}}-250g)는 SLC Japan(Hamamatsu, Japan)에서 입수했습니다. 동물은 사용 전 1주일 동안 12시간 명암 주기로 에어컨이 설치된 방에 수용되었습니다. 쥐에게 표준 실험 식품(Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Japan)을 임의로 물을 공급하고 시험 전에 밤새 금식시켰다. 현장 재순환 관류 연구는 Mihara et al.에 의해 설명된 수정된 절차에 따라 수행되었습니다. 간단히 말해서, 쥐는 혈압 감소를 피하기 위해 25% 우레탄 용액(1 mg/kg)으로 마취되었습니다. 복부 정중선 절개를 하고 소장을 노출시켰다. 담관은 관류액으로의 담즙 분비를 피하기 위해 결찰되었습니다. 소장 전체(십이지장에서 회장까지)를 37도의 생리 식염수로 10분 동안 세척액이 깨끗해질 때까지 세척했습니다. 그런 다음 실리콘 튜브에 연결된 유리 튜브를 소장의 양쪽 끝에 캐뉼러로 삽입하고 봉합사로 고정했습니다. 그런 다음 복부에서 소장을 교체하고 캐뉼러를 연동 펌프에 연결했습니다. 문맥은 폴리에틸렌 튜빙(PE10)으로 삽관되었습니다. 시판되는 C. tubulosa 추출물을 Krebs-Henseleit bicarbonate 완충액(pH 7.4)에 현탁하여 최종 농도가 4.5mg/ml가 되도록 하고 8000rpm에서 10분 동안 원심분리하여 불용성 성분을 제거했습니다. 플로리진(1mM)이 없거나 존재하지 않는 상청액은 실험 내내 37 ± 0.5도의 온도로 유지된 저장소에 회수되었습니다. 표시된 시간에 문맥 캐뉼러를 통해 혈액을 채취했습니다. 혈액 샘플을 원심분리한 후 생성된 혈장을 내부 표준물질을 함유하는 아세토니트릴로 탈단백화하고 3000rpm에서 원심분리하였다. 상층액을 증발시키고 잔류물을 아세토니트릴과 0.5% 아세트산으로 구성된 이동상으로 분리했습니다. 혼합 용액을 HPLC 컬럼에 로딩하였다. 쥐는 일본 정부와 Kinki University에서 발행한 실험 동물의 관리 및 사용 지침에 따라 윤리적 절차에 따라 사용되었습니다.
HPLC 분석
HPLC 분석은 Shimadzu SPD{0}}A, UV 검출기, Shimadzu LC{1}}A 펌프 및 Shimadzu C-R4A 크로노토픽 통합기(Kyoto, Japan)가 장착된 시스템에서 수행되었습니다. ECH와 ACT는 Inertsil ODS 컬럼(5 μm, 4.6 × 15{13}} mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japan)을 사용하여 분리되었습니다. 15:85(v/v) 비율의 아세토니트릴과 0.5% 아세트산의 이동상을 1.0ml/min의 유속으로 사용했습니다. 334 nm에서 검출을 수행하였다.
운동 분석
겉보기 투과 계수(Papp)는 다음과 같이 Caco{0}} 세포 단층을 가로지르는 화합물 수송의 시간 과정의 선형 부분의 기울기로부터 추정되었습니다.
팝{{0}} （dQ/dt）/ A1C0)
여기서 dQ/dt는 투과율, C{0}}는 도너 챔버 내 용질의 초기 농도, A는 멤브레인의 표면적(4.7cm2)입니다.
쥐의 제자리 장관류 연구에서 시간 0부터 마지막 측정까지 문맥의 혈장 농도-시간 곡선 아래 면적(AUC0-90)은 선형 사다리꼴 규칙에 따라 계산되었습니다.
물리화학적 성질
화합물의 극성 표면적 및 비극성 표면적은 프로그램 SAS(버전 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997–2001, AstraZeneca, Cary , 노스캐롤라이나, 미국). 실험적으로 결정된 log P 및 pKa 값은 문헌에서 얻었습니다.
통계 분석
데이터는 Tukey의 사후 검정이 뒤따르는 분산의 일원 분석으로 분석되었습니다. 5% 미만의 확률 값은 유의미한 것으로 간주되었습니다.
결과
Caco{0}} 세포 단층을 통한 에키나코사이드 및 악테오사이드의 흡수 수송
생쥐와 쥐에서 온전한 ECH[1{{20}},14]와 ACT[12,21]는 100-1{{ 39}}00mg/kg. 사용된 C. tubulosa 추출물은 용량당 약 3{47}}%의 ECH와 15%의 ACT를 함유했습니다. 추출물은 배양 배지에서 삼투압과 pH를 변화시키기 때문에 경구 투여량을 기준으로 4.5 및 13.5 mg/ml의 농도를 결정했습니다(온전한 화합물: 2–2{49}} mg/2{51}} g body 체중) 마우스에서. 저용량(4.5mg/ml) 및 고용량(13.5mg/ml) 추출물은 각각 ECH의 경우 2.0 및 6.1mg, ACT의 경우 1.0 및 3.0mg을 함유했습니다. 우리는 인간에서 보고된 ECH 및 ACT의 경구 투여량보다 훨씬 적은 C. tubulosa 추출물 양을 적용했습니다(추출물의 권장식이 허용량: ECH의 경우 약 45mg 및 ACT의 경우 22.5mg을 포함하는 150mg). 온전한 화합물의 저용량 및 고용량에서 흡수 프로파일(그림 2)과 Papp은 ECH 등가물로서 ECH와 ACT 간에 크게 다르지 않았습니다(표 2). 13.5 mg/ml의 고용량 C. tubulosa 추출물이 배지에 로딩되었을 때, ECH 및 ACT 병용의 Papp 값(각각 1.27 ± 0.13 및 0.34 ± 0.03 × 10-6 cm/s)은 이들보다 3배 높았다. 손상되지 않은 ECH 및 ACT(표 2)의 (각각 0.38 ± 0.09 및 0.10 ± 0.03 × 10-6 cm/s). 추출물은 온전한 화합물과 달리 ECH와 ACT의 흡수 수송을 크게 향상시켰습니다.
그림 2 트랜스웰 시스템에서 Caco{1}} 세포 단층을 가로지르는 에키나코사이드 및 악테오사이드의 흡수 수송. 근단에서 기저외측으로의 수송을 모니터링하였다. 닫힌 기호는 echinacoside(원) 및 acteoside(사각형)입니다.시스탄체세뇨관4.5(a) 및 13.5 mg/ml(b)의 저농도 및 고농도로 투여된 추출물. 열린 기호는 에키나코사이드 및 액테오사이드 함량에 해당하는 온전한 에키나코사이드(원) 및 온전한 액테오사이드(사각형)입니다.시스탄체세뇨관발췌각각 투여합니다. 온전한 액테오사이드(열린 삼각형)도 온전한 에키나코사이드(열린 원)와 동일한 용량으로 배지에 로딩되었습니다. 결과는 표준 편차(n=3)와 함께 제공됩니다.
플로리진, 플로레틴 및 베라파밀의 억제 효과
To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3mM)의 플로레틴은 눈에 띄는 세포 독성 때문에 사용할 수 없습니다. 또한, P-gp는 약초와 임상적으로 중요한 P-gp 기질 사이의 상호 작용을 담당하는 중요한 역할을 하는 것으로 확인되었습니다. Verapamil은 손상되지 않은 화합물의 흡수성 수송을 향상시키지 않았습니다(그림 3).
추출물(저용량)에서 ECH와 ACT의 흡수 수송은 플로리진에 의해 유의하게 억제되었습니다(표 2 및 그림 4). 온전한 ECH와 ACT의 수송은 플로리진에 더 민감했지만 고용량의 추출물은 플로리진에 민감한 억제를 억제했습니다(표 2).
그림 3 온전한 에키나코사이드와 악테오사이드의 흡수 수송에 대한 플로레틴과 베라파밀의 효과. 정점 측에서 13.5 mg/ml 추출물의 에키나코시드 함량에 해당하는 온전한 에키나코시드를 적용한 후 정점에서 기저외측으로의 수송을 모니터링했습니다(n=3). Acteoside(닫힌 사각형)는 억제제의 부재(n=3)에서 온전한 echinacoside(닫힌 원)와 용량이 동일했습니다. 열린 다이아몬드와 닫힌 다이아몬드는 각각 0.2mM 베라파밀과 0.3mM 플로레틴의 존재하에서 수송을 보여줍니다. 억제 실험은 이중으로 수행되었습니다.
현장 장 관류 연구
현장 연구에서 우리는 C. tubulosa 추출물의 ECH와 ACT가 소장의 정점 측에 위치한 SGLT1에 의해 수송되는지 여부를 테스트했습니다. 저용량(4.5mg/ml)의 식이 추출물을 관류하면 ECH와 ACT가 문맥 혈액에 빠르게 나타납니다(그림 5). AUC는 ECH의 경우 2702.8 ± 384.1 μm·min, ACT의 경우 698.3 ± 197.2 μm·min으로 결정되었습니다. C. tubulosa 추출물의 함량으로 AUC를 정규화한 후 흡수량은 ECH와 ACT 간에 유의한 차이가 없었습니다. SGLT{13}}민감한 플로리진은 플로레틴과 달리 수반되는 ECH(AUC, 649.4 ± 248.2μm·min) 및 ACT(검출되지 않음)의 흡수 수송을 유의하게 억제했습니다.
논의
일부 허브 성분은 간, 장, 뇌 및 신장에서 고도로 발현되는 P-gp의 기질입니다. P-gp는 St John's wort, curcumin, echinacea, 인삼, 은행나무 및 생강을 포함한 약초 요법의 생체 내 생체 이용률, 처리 및 분포를 결정하는 요소입니다.[22,23] 제니스테인의 생체 이용률{{5} }플라보노이드 유도체인 글루코사이드는 또한 장내 MRP2 수송체에 의해 제한되었습니다.[24] 따라서 본 연구는 식이 및 의약용 C. tubulosa 추출물에서 ECH 및 ACT 병용의 흡수 특성을 조사하기 위해 고안되었습니다.
Polarized Caco{0}} 세포 단층과 장[25]은 P-gp, MRP 및 유방암 저항성 단백질과 같은 주요 장 약물 유출 수송체를 발현합니다.[26] 케르세틴[27]과 미리세틴[28]의 식이 플라보노이드는 세포주와 동물 모델 모두에서 P-gp 매개 유출을 억제하는 것으로 나타났습니다. P-gp 억제제인 Verapamil은 Caco{9}} 세포 단층에서 ACT 및 ECH의 투과성을 변경하지 않았으며(그림 3), 이는 온전한 ECH 및 ACT가 P-gp 유출 펌프에 의해 제한되지 않음을 나타냅니다. 우리의 이전 연구에서는 MRP2 단백질이 Caco{13}} 세포 단층에서 발현되지 않는 것으로 나타났습니다.[29] P-gp 및 MRP 매개 유출은 ECH 및 ACT 전송에서 제외될 수 있습니다. 친유성이 낮은 케르세틴의 일부 배당체는 케르세틴 자체보다 더 효율적으로 흡수되었습니다.[30] 당 부분이 있는 ACT가 뇌 조직에 빠르게 분포한다는 점도 중요합니다. 우리의 관심은 장세포에서 두 개의 포도당 수송체의 결합된 작용에 집중되었습니다: 브러시 경계 막의 SGLT 및 기저외측 막의 촉진된 확산 포도당 수송(GLUT). Caco{19}} 세포 배양은 플로레틴에 민감한 GLUT2와 플로리진에 민감한 SGLT1 및 2 수송체를 연구하기 위한 모델로 사용할 수 있습니다.[31-34] 포도당은 정점에서 Caco의 기저외측으로 수송됩니다.{27 }} Papp이 36.8 ± 1.1×10−6 cm/s인 높은 속도로 단층.[35] 그것은 세포간 수송 마커인 propranolol보다 더 높은 Papp을 가지고 있습니다(23.4 ± 2.8 × 10-6 cm/s). 표 2에서 볼 수 있듯이, 온전한 ECH와 ACT는 포도당과 수동 프로프라놀롤에서 보고된 것보다 훨씬 낮은 Papp을 보였습니다. 분배 계수(옥탄올-물)의 로그를 계산한 log P는 ECH와 ACT에 대해 각각 -2.32 및 0.077로 계산되었습니다. 극성 또는 친수성 화합물은 세포주위 경로(밀접한 접합을 가로질러)를 통해 운반되는 것으로 믿어집니다. 만니톨과 같은 두 개의 페닐에타노이드 배당체는 세포주위 경로를 통해 운반되는 것으로 보입니다. 그러나 phloridzin은 손상되지 않은 ECH 및 ACT의 흡수 투과성을 극적으로 감소시켰으며(표 2), 이는 정점 SGLT1이 손상되지 않은 ECH 및 ACT의 장 흡수에 중요한 역할을 함을 시사합니다. 등가 용량에서 더 높은 소수성 ACT 투과성은 ECH 투과성에 가깝습니다(그림 2 및 표 2). Yoshikawa et al. [36]은 촉진 수송체(GLUT 1 및 2)와 플로리진에 민감한 SGLT1이 소장에서 집중적으로 발현된다는 것을 입증했습니다. 화합물의 흡수량은 흡수와 제거 사이의 질량 균형을 기반으로 하므로 GLUT2의 참여를 평가했습니다. 포도당은 높은 친화력과 낮은 용량으로 SGLT1에 의해 장세포의 정점 막을 가로질러 낮은 친화력과 높은 용량으로 GLUT2를 통해 기저외측 막을 가로질러 빠져나간다. Phloretin(GLUT2의 특정 억제제)은 온전한 ECH 및 ACT의 수송을 폐지하지 않았습니다(그림 3). Funes et al. [37]은 ACT가 인지질막의 인산염 그룹과 강하게 상호작용함을 보여주었다. ACT 구조에 하이드록실 그룹이 풍부하기 때문에 이러한 그룹과 인지질의 글리세롤 극성 헤드 또는 포스페이트 그룹 사이의 수소 결합이 일어날 가능성이 가장 높은 상호 작용입니다. 온전한 ECH 및 이에 상응하는 ACT를 Caco{62}} 단층과 함께 11시간 동안 배양했을 때 ACT의 세포 축적(0.24 ± 0.04nmol/cm2)은 ECH(0.07 ± 0.01nmol/cm2)의 세포 축적보다 3배 더 컸습니다. 우리는 SGLT{74}}에 민감한 ECH와 ACT가 장세포에서 혈류로 천천히 이동하여 낮은 Papp이 관찰될 수 있다고 생각했습니다. 높은 친수성 ECH와 비교하여 ACT의 낮은 투과성은 세포막으로의 삽입 때문일 수 있습니다.
폴리페놀 화합물은 임상 적용 중에 허브 혼합물로 소비되며 식이 보충제로 상업적으로 이용 가능합니다. 체외 연구에서 페놀릭 에피카테킨의 흡수는 음료 식품 재료의 성분 조성에 영향을 받지 않는 것으로 나타났습니다.[38] 대조적으로, Hypericum perforatum L. 제품 매트릭스는 기질 식물화학적 조성 및 운송 특성의 차이로 인해 Caco{2}} 세포를 통한 케르세틴 글루코시드(루틴 및 이소퀘르시트린) 및 하이퍼로시드의 운송에 영향을 미칩니다. 즉, 세포주위 전달 및 운반체 매개 또는 활성 수송.[39] 이 연구에서 C. tubulosa는 온전한 ECH 및 ACT보다 3배 더 높은 경상피 수송을 제공했습니다(그림 2 및 표 2). 우리는 C. tubulosa 추출물의 성분이 플로리진에 민감한 수송체를 활성화하고 세포내 ECH와 ACT의 제거를 가속화한다고 추측합니다. 고용량의 C. tubulosa 추출물은 플로리진-민감성 수송의 효능을 크게 가리는 것으로 보였습니다(표 2). 식이 탄수화물[40]과 단백질[41]은 위장관에서 일부 폴리페놀과 상호작용합니다. Morikawa et al. [10]은 5개의 이리도이드인 kankanosides AD와 kankanol, monoterpene glycoside, kankanoside E, 2개의 phenylethanoid oligoglycosides, kankanosides F와 G, 그리고 아실화 올리고당인 kankanose가 현재 사용되는 C. tubulosa 추출물에서 분리될 수 있음을 보여주었습니다. C. tubulosa 추출물의 단백질을 포함한 다른 성분은 불분명합니다. 위의 추측과 함께 다른 구성 요소가 SGLT1과 상호 작용하고 ECH 및 ACT의 흡수를 억제하는지 여부를 조사하도록 설계되었습니다.
In-vivo experiments cannot easily distinguish between the extent of absorption and avoidance of first-pass disposition through the liver. The in-situ intestinal perfusion model has an advantage over in-vivo and in-vitro models due to the easy control of experiment parameters exclusion of the impact of other organs and maintenance of an intact intestinal blood supply.[22] The involvement of the phloridzin-sensitive glucose transporter was evaluated in an in-situ intestinal perfusion system. As shown in Figure 5, absorbed amounts of ECH and ACT concomitants in C. tubulosa extract (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10-6 cm/s는 사람에게 완전히 흡수되는 반면, 약과 펩타이드는 잘 흡수되지 않습니다(<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10-6 cm/s(표 2)는 동물과 인간에서 높은 경구 생체이용률을 나타냅니다. Crespy et al. [43]은 in-situ 장 관류 연구에서 유출량이 phloridzin과 phloretin 사이에 유의한 차이가 없음을 입증했습니다. 그들은 또한 SGLT1에 높은 감수성을 가진 플로리진의 경구 생체이용률이 쥐에서 10%에 불과하다는 것을 보여주었습니다. 향후 연구에서는 고용량의 식이 추출물을 경구 투여한 후 ECH 병용물의 생체이용률 및 간 초회통과 효과를 평가할 필요가 있습니다. 현장 결과는 C. tubulosa 추출물의 섭취가 온전한 ECH 및 ACT의 낮은 경구 흡수를 개선할 수 있음을 의미합니다.
그림 4 에키나코사이드와 액테오사이드의 흡수 수송에 대한 플로리진의 억제 효과시스탄체세뇨관발췌. 근단에서 기저외측으로의 수송을 모니터링하였다. 닫힌 원과 사각형은 각각 플로리진이 없는 4.5mg/ml 추출물의 에키나코사이드(a)와 악테오사이드(b)입니다. 닫힌 다이아몬드는 1mM 플로리진을 포함하는 4.5mg/ml 추출물 처리를 보여줍니다. 결과는 표준 편차(n=3)와 함께 제공됩니다.
그림 5 현장 재순환 쥐 장 관류 동안 문맥 혈액에서 에키나코사이드 및 액테오사이드 농도의 시간 경과. 원형 및 사각형 기호는 각각 에키나코사이드 및 악테오사이드입니다.시스탄체세뇨관발췌4.5 mg/ml의 농도에서 37도에서 1mM 플로리진의 부재(닫힌 기호) 또는 존재(열린 기호)에서 관류시켰다. 결과는 표준 편차와 함께 제공됩니다(n=3–4). *P < 0.05="" 대="" 플로리진이="" 있는="" 식이="">
결론
ECH와 ACT의 장 흡수를 향상시키는 식이 및 의약용 C. tubulosa 추출물은 플로리진에 민감한 수송의 관여를 줄여야 하지만 인간의 건강을 더 잘 관리하는 데 도움이 될 수 있습니다.
선언 이해 충돌
저자는 공개할 이해 상충이 없음을 선언합니다.
자금 조달
이 작업은 부분적으로 Kinki 대학의 하이테크 연구 센터의 지원을 받았습니다.
감사의 말
저자는 Osamu Muraoka(Kinki University, 일본 오사카)와 Toshio Morikawa(Kinki University, 일본 오사카)에게 감사를 전합니다.시스탄체세뇨관발췌그리고 순수한 성분. 연구 지원에 대해 Masahiro Iwaki(Kinki University)에게 깊은 감사를 드립니다.
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