성기능에 대한 Cistanche Deserticola의 촉진 효과

Li Gu, Wen Ting Xiong, Yan Lei Zhuang, Jian Shuang Zhang, Xin Liu*

중국 광저우 쑨원대학교 국가교육부 식품위생공학연구센터

추상적인:시스탄체데저티콜라(CD)는 수천 년 동안 생식 기능에 대한 강장제로 간주되었습니다. 의 효과CD음경 발기 반응에 대한 추출물이 본 연구에서 조사되었습니다. 거세 수술 후 쥐는 위내 치료를 받았다.CD4주 동안 매일 추출물({0}}.45, 0.90, 1.8g/kg). 음경 발기 반응을 측정하고 혈청호르몬실험이 끝날 때 분석되었습니다. sham-operated 대조군에 비해 거세된 쥐에서 발기 잠복기가 길어지고 발기 기간이 유의하게 짧은 것으로 평가되었습니다. 하지만,CD추출물은 발기 잠복기를 단축하고 발기 기간을 연장하여 거세의 부정적인 영향을 최소화했습니다. 0.9g/kg의 투여량에서,CD추출물은 혈청 황체화 조절호르몬거세된 쥐에서 정상 수준으로의 농도 접근. 이러한 결과는CD음경 발기 반응을 촉진하고 혈청 호르몬 수치를 어느 정도 조절했습니다.

키워드:시스탄체데저티콜라; 발기 반응; 거세;호르몬.

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소개

시스탄체호프. 오로바치아과의 속 중 하나인 Et Link는 주로 내몽골, 신장, 중국의 닝샤 자치구, 이란, 인도, 몽골 등 북반구의 건조한 땅과 사막에 분포한다.시스탄체종은 Haloxylox ammodendron, H. persicum, Kalidium foliated 및 Tamarix 식물 등과 같은 모래 고정 식물의 뿌리에 일반적으로 부착되는 다년생 기생충 허브에 속합니다(Jiang and Tu 2009).

허바시스탄체, 의 줄기시스탄체종은 우수한 강장제로 간주되어 "사막의 인삼"의 영예를 얻었습니다. 의 사이에시스탄체종,시스탄체Deserticola YC MA는 Cistanche의 주요 원료로 지정되었습니다(Stefanova et al. 2011). 그러나 최근 몇 년간 과도한 수확으로 인해 중국에서 보호가 필요한 Class II 식물 중 하나로 수집된 야생 C. Deserticola(CD)의 천연 자원이 부족하여 다음과 같은 이 속의 다른 종들이 있습니다. C. salsa와 C. Sinensis도 일부 지역에서 대용품으로 사용됩니다. Shen Nong의 Chinese Material Medica(고대 약리학 개론)에 처음 기록된 이래 CD는 생식, 발달에 효과적이라고 주장되는 중국 전통 의학 이론에 따라 임상 실습에서 신장을 강화하고 "양"을 활성화하는 것으로 생각되었습니다. 및 생식 기능. 한편, CD는 수백년 동안 양고기, 감자 또는 쌀과 함께 끓여서 과긴장 유발 장애를 치료하는 강장제 식품을 생산하여 구두로 복용하는 것이 안전함을 시사합니다(Xiong et al. 2013). 그러나 이러한 일화적 사용은 주로 중국 인쿠나불라에 존재하며 현대 약리학적 개념의 관점에서 논의되는 과학적 정보는 제한적입니다.

발기 부전(ED)은 음경의 부적절한 발기 또는 성인 남성에서 충분히 오래 지속되지 않는 발기를 특징으로 하는 상태입니다(Cohan and Korenman 2000). 현대적이고 정교한 화학 작용제에 대응하여 발기부전 치료를 위해 식물에서 효과적이고 안전한 약물을 찾는 데 새로운 관심이 생겼습니다(Adimoelja 2000). 이전 연구(Liu et al. 2009)에 따르면 CD 전기는 정상 쥐의 음경 발기를 촉진했지만 발기 부전에 대한 CD의 영향과 관련된 데이터는 없었습니다.

동물에서 양측 고환 절제술을 사용한 외과적 거세는 ED를 조사하기 위한 거세의 표준으로 간주되었습니다(Tombal 2005). 따라서 본 연구는 거세된 쥐의 발기 잠복기와 지속 시간을 조사하여 발기부전에 대한 CD의 잠재적 효과를 평가하기 위해 수행되었습니다.

재료 및 방법

화학물질 및 재료

Echinacoside (purity >98%) and acteoside (purity >98% )는 National Institutes for Food and Drug Control(중국 베이징)에서 구입했습니다. HPLC 등급 메탄올은 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)에서 구입했습니다. Millipore Milli-Q Integral 3 System 및 Q-POD Milli-Q System(Bedford, MA, USA)을 사용하여 정제수를 생산했습니다. C. Deserticola의 줄기는 Shenzhen GURU Biology Co., Ltd (Guangdong, China)에서 구입하여 60mesh 체를 통과한 분쇄기로 미세한 분말로 분쇄하였다.

HPLC 분석 및 식물 재료 준비 CD 분말의 Echinacoside 및 acteoside 함량은 이전 방법에 따라 결정되었습니다(Zhao et al. 2011). 그런 다음, 100g의 건조 분말을 1.5L 물에 1.5시간 동안 끓였습니다. 상온으로 식힌 후 혼합액을 2000rpm에서 10분간 원심분리(Eppendorf 5810R, Germany)하고 동일한 조건에서 침전물을 2회 재추출하였다. 합한 상층액을 진공 회전 증발기(Heidolph Laborota 4001-efficiency, Germany)로 60도에서 농축한 다음 동결 건조하여 약 42%의 건조 추출물 분말을 얻었다. 후속 동물 실험을 할 때 건조 추출물을 상온에서 정제수에 녹였다.

실험 동물

성체 수컷 Sprague-Dawley 쥐(200-220g)를 광동성 의학 실험 동물 센터(중국 광저우)에서 얻었으며, 실내에서 12-시간의 명암 주기로 온도 조절 구역에서 유지되었습니다. 온도(22-24도) 및 일정한 습도(40-70퍼센트) SPF(특정 병원체 무함유) 실험실 및 사료 공급. 실험 절차는 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 국립 보건원 지침을 준수했습니다.

실험적 절차

투여 1주일 전에 50마리의 수컷 SD 쥐를 나트륨 펜토바르비탈로 복강 내(40 mg/kg) 마취하고(Jung et al. 1999) 무작위로 5개 그룹으로 할당했습니다: 가짜 수술 그룹(Sham)의 쥐 제외 , 나머지는 음낭 접근법을 통해 양측 거세되었습니다(Anderes 2{8}}03, Schlatt et al. 2002). 한편, CD 처리군에는 0.45g/kg(저용량의 CD 추출물, LCD + Cas), 0.9g/kg(CD 추출물의 중앙값, MCD + Cas) 및 1.8g/kg(높은 용량의 CD 추출물)을 위내 투여하였다. CD 추출물, HCD + Cas) CD 추출물의 용량을 각각 투여한 반면, 가짜 그룹과 거세 그룹은 상응하는 양의 물만 투여했습니다. 체중 측정은 시술 초기에 측정한 다음 매주 측정했습니다. 모든 쥐는 다음 기관의 제거 및 후방 칭량을 위해 사망 직후 개복술을 받았습니다: 포피샘, 정낭, 전립선 및 항문거근.

남근 발기 반응 측정

각 그룹에서 쥐의 발기 기능은 이전 방법에 따라 평가되었습니다(Ji et al. 2{5}}09, Luo et al. 2006). 간단히 말해서, 스테인레스 스틸 양극성 전극(BL- 420F Data Acquisition & Analysis System, Time Technology Co., Ltd, Chengdu, PR China)을 전기 펄스로 발기될 때까지 음경에 조심스럽게 위치시켰습니다. 자극(5V) 0.2초. 자극에서 발기까지의 시간을 음경 발기 잠복기로 기록했습니다. 음경 발기반응이 관찰되면 전극을 음경에서 빼낼 수 있으며, 음경이 발기를 유지한 시간을 발기시간으로 기록하였다.

혈액 샘플링 및 혈청 호르몬 분석.

쥐를 나트륨 펜토바르비탈로 복강내 마취했습니다(4{27}}mg/kg)(Jung et al. 1999). 혈액 샘플을 채취하여 4도에서 4시간 동안 응고시킨 후, 4도에서 5분 동안 4000rpm으로 원심분리하여 혈청을 수집하고(Eppendorf 5810 R, Germany) 추가 분석이 있을 때까지 즉시 -20도 냉동고에 보관했습니다. . 총 LH 및 FSH 수준은 제조업체의 지침(Matsumoto et al. 1986)을 참조하여 상업용 RIA(Radioimmunoassay) 키트(Beijing North Institute of Biological Technology, Beijing, China)를 사용하여 측정되었습니다. 경쟁적인 방사성 면역 기술을 기반으로 하여{10}LH(또는 FSH)로 라벨링된 것을 분석에 사용했습니다. 간단히 말해서, 100μl I{12}}표지된 LH(또는 FSH) 제제를 100μl 혈청 샘플에 첨가하고 100μl 정제된 토끼 항체와 함께 4도(또는 37도)에서 밤새 인큐베이션했습니다. 그 다음 항원-항체 복합체에 당나귀-항-토끼 면역 분리제를 첨가하고 원심분리(3500rpm, 15분)하여 유리 및 항체 결합 125I-LH(또는 FSH)를 분리하였다. 그 후, 방사성 면역 분석 카운터(DMF{25}}, Zhongcheng electric technology development Co., Ltd., Hefei, China)에서 침전물의 방사능을 측정했습니다. LH 및 FSH 분석의 민감도 한계는 모두 1.0mIU/ml였습니다.

통계 분석

데이터 분석은 SPSS 버전 16.{1}} 소프트웨어를 사용하여 수행되었습니다. 값은 평균 ± 표준 편차(SD)로 표시되었습니다. 모수 데이터는 일원 분산 분석(ANOVA)에 이어 사후 LSD 테스트를 사용하여 분석되었습니다. 비모수 데이터는 Kruskal-Wallis 테스트로 분석했습니다. 편차 확률이 0.05 미만이면 차이가 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.

결과

CD 분말의 echinacoside 및 acteoside 함량의 정량적 측정

CD 분말의 echinacoside 및 acteoside 함량은 1.27±{2}}.{4}}1% 및 0.52±0.003%로 중국 약전의 요구 사항에 부합했습니다. CD 분말의 HPLC 크로마토그램은 그림 1에 나와 있습니다. 1.

그림 1의 HPLC 크로마토그래피 프로필시스탄체데저티콜라 가루. 피크 1, 에키나코사이드; 피크 2, 악테오사이드. X축, 체류 시간; Y축, 흡광도 단위. HPLC 조건: Waters HPLC 시스템(Binary HPLC Pump1525, 굴절률 검출기 2414, 포토다이오드 어레이 검출기 2996); 고정상: Symmetry C18(4.6mm×25{{1{12}}}} mm, 5 µm, Waters, Milford, MA, USA); 이동상: 0.5%(V/V) 아세트산 수용액(A) 및 메탄올(B) 성분(0min, A: B{13}}:75; 10- 30 min, A: B{16 }}: 60, 30분, A: B{19}}: 100); 유속: 1ml/분; 검출 파장: 330 nm; 온도: 30℃.

체중 및 상대적 부속 장기 무게 표 1에 표시된 대로 모든 쥐는 1일에서 28일까지 증가하면서 유사한 초기 체중을 보였습니다. 그러나 거세된 그룹의 평균 값은 216.8±9.2g에서 251.4±12.7, 283.3으로 증가했습니다. ±15.1, 306.8±15.4, 322.2±18.4g으로 가짜 수술에 비해 무게가 더 적습니다(p<0.05). there="" was="" no="" statistical="" difference="" between="" the="" sham="" group="" and="" cd="" treated="">

또한, 거세된 쥐에서 포피샘, 전립선 및 정낭, 항문거근의 평균 상대 중량이 유의하게 낮았습니다(p<0.05) than="" those="" of="" normal="" controls,="" respectively.="" compared="" with="" the="" rats="" castrated="" only,="" the="" relative="" values="" of="" these="" organs'="" weight="" tended="" to="" be="" higher="" under="" the="" treatment="" of="" cd="">

발기 반응 평가

sham 그룹과 대조적으로, 거세는 쥐가 전기 자극 하에서 음경 발기를 얻는 데 더 많은 시간을 소비하게 했습니다(p<0.01). however,="" the="" erectile="" latency="" was="" shortened="" by="" cd="" extract,="" exhibiting="" a="" significant="" decrease="" of="" 52.7%="" in="" the="" lcd="" +cas="" group=""><0.01), 73.5%="" in="">

플러스 Cas 그룹(p<0.01) and="" 74.5%="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01), respectively.="" furthermore,="" castration="" shortened="" the="" erectile="" duration="" with="" the="" mean="" value="" of="" 37.2±17.3="" s="" compared="" to="" the="" sham-operated="" group=""><0.01). however,="" the="" erectile="" duration="" in="" rats="" was="" significantly="" prolonged="" approximately="" by="" 2.6-fold="" in="" the="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 2.1-fold="" in="" the="" hcd="" +cas="" group=""><0.01). it="" showed="" no="" strict="" dose-related="" correlation.="" (fig.="">

혈청 호르몬 수치

RIA 분석으로 분석한 결과, 거세된 쥐에서 LH의 평균 혈청 농도는 2.5{2}}±0.34mIU/ml로 가짜 수술 대조군에 비해 증가를 나타냈습니다(p<0.05). however,="" the="" value="" descended="" about="" 49.2%="" in="" mcd="" +cas="" group="" relative="" to="" that="" in="" castrated="" control=""><0.05) (fig.="" 3).="" as="" shown="" in="" fig.="" 4,="" no="" statistical="" differences="" were="" observed="" among="" all="" groups="" on="" fsh="">

논의

우리의 결과는 거세가 남근 발기 잠복기를 상당히 연장하고 발기 기간을 단축시켰으며 현저한 부속 기관 위축이 있음을 보여주었습니다. 그러나 CD 추출물은 음경 발기 반응을 촉진하고 거세된 쥐에서 혈청 LH 수준을 어느 정도 조절했습니다.

자발적 발기는 주로 해면체 평활근의 이완을 포함하는 세포, 분자 및 생리학적 메커니즘을 통해 안드로겐에 의해 자극되고 유지됩니다(Traish et al. 2007, Talha et al. 2007). . 테스토스테론 수치가 충분하지 않으면 이완이 감소하고(McClure 1988), 이에 따라 남성의 발기부전이 발생합니다(Bivalacqua et al. 2000). 특히 쥐에서 이것은 10-12%의 광범위한 전신 테스토스테론 농도에 의해 유지되며, 그 이하에서는 용량 의존적 방식으로 발기 반응이 약화됩니다(Armagan et al. 2006). 현재 연구에서 순환 테스토스테론 농도는 모든 거세 쥐에서 민감도 한계(0.02ng/ml)를 충족시키기에 너무 낮았습니다(데이터는 결과에 표시되지 않음). 그러나 CD 추출물은 0.90g/kg 및 1.8g/kg에서 3회 투여에서 음경 발기 잠복기를 유의하게 단축시키고 발기 기간을 연장시켰다. 이것은 아마도 일부 이전 연구에서 언급된 CD의 안드로겐 유사 효과의 결과일 것입니다(He et al. 1996a, He et al. 1996b).

전립선 및 정낭과 같은 일부 부속 기관은 안드로겐 의존적이므로 체중 변화는 내분비 상태의 변화를 반영할 수 있습니다(Trisomboon et al. 2007, Jang et al. 2011). 테스토스테론의 역치 수준이 존재했으며 그 이하에서는 이들 기관의 대사가 억제되었습니다(Trachtenberg 1985). 우리 연구에서 거세가 테스토스테론 결핍으로 인해 보조 생식기의 체중 감소를 유도함을 확인했습니다.

테스토스테론은 주로 고환 라이디히 세포에서 분비되며 황체 형성 호르몬(LH) 및 난포 자극 호르몬(FSH)과 같은 하체 호르몬에 의해 조절되며, 이는 거세된 동물의 음경 기능을 유지하는 데 중요한 역할을 합니다(Robert et al. 2004). 시상하부-뇌하수체-생식샘(HPG) 축은 폐쇄 루프 피드백 제어 메커니즘이므로 낮은 생식선 호르몬 수치는 차례로 LH와 FSH의 분비를 조절할 수 있습니다(Morales et al. 2004). 우리의 연구는 혈청 LH 수준이 거세된 쥐에서 유의하게 증가된 다음 0.90g/kg의 CD 추출물에 의해 정상 수준으로 감소했음을 조사했으며, 이는 LH 수준이 증가하면 발기 위험이 더 높다는 이전 결론에 동의했습니다. 기능 장애(Kupelian et al. 2006). 고환에서 LH는 피드백 제어가 비교적 일관된 테스토스테론의 합성 및 방출을 자극하는 반면, FSH는 피드백 제어 복합체와 함께 영양을 위해 Sertoli 세포에 직접 작용합니다(Hellqvist et al. 2008). 이러한 발견은 CD가 FSH보다 혈청 LH 감소에 주로 책임이 있을 수 있는 안드로겐 유사 효과를 표현했다는 추측에 대한 더 많은 지지를 제공했습니다.

현재 관찰에서 수컷 쥐의 체중 발달에 대한 거세의 영향은 이전 연구(Christoffersen et al. 2006)의 결과와 유사했지만 암컷 쥐의 결과(Pantaleão et al. 2010)와 반대였습니다. CD 추출물은 체중을 크게 개선할 수 없었습니다. 이는 치료 기간이 충분하지 않거나 전반적인 건강 상태에 대한 복합적인 영향 때문일 수 있습니다.

결론적으로, 거세는 음경 발기 잠복기를 연장하고 기간을 유의하게 단축시켰으며, 혈청 LH 증가 및 부속 성기 위축으로 나타났다. 그러나 CD 추출물은 거세된 쥐의 발기 잠복기를 단축하고 발기 기간을 연장하여 음경 발기 반응을 촉진했습니다. 이러한 효과는 아마도 CD 추출물이 특히 0.90g/kg의 투여량에서 혈청 LH 농도를 정상화한다는 관찰에 의해 뒷받침되는 안드로겐 유사 효과 때문일 것입니다. 그러나 시상하부 및 변연계 수준에서 ED에 대한 CD 추출물의 효과를 입증하기 위해서는 추가 증거가 필요하며 현대 세계에서 이 가치 있는 전통 의학에 더 많은 관심을 기울일 수 있습니다.

감사의 말

이 작업은 Xinjiang Uygur Autonomous Region(PR China)(200840102-15)의 프로젝트에 의한 과학 기술 지원의 교부금으로 지원되었습니다.

참조

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