시험관 내 스타틴 유발 근독성에 대한 Herba Cistanches의 보호 효과
Mar 24, 2022
연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com
Elaine Wat a,b,1, Chun Fai Ng a,b,1, Chi Man Koon a,b, Eric Chun Wai Wong a,b, Brian Tomlinson c, Clara Bik San Lau a,b,n
홍콩 중문대학교 중국의학연구소, 샤틴, 신계, 홍콩
b 중국 서부의 식물화학 및 식물 자원의 국가 핵심 연구소, 홍콩 중문 대학, 샤틴, 홍콩, 신계
c 홍콩중문대학교 의과대학 임상약리학부, 홍콩 신계지 샤틴
추상적인:
민족약리학적 관련성: 허바시스탄체스(HC,시스탄체데저티콜라, 또는시스탄체세뇨관) 전통적으로 근육 문제에 사용되는 한약재입니다. 이전 연구에서는 HC 추출물이 운동 후 쥐의 근육 손상을 줄이고 ATP 저장을 개선할 수 있음을 보여주었습니다. 그러나 스타틴 유발 근육 독성에 대한 효과는 조사된 적이 없습니다.
겨냥하다:이 연구의 목적은 HC(HCE)의 수성 추출물이 L6 쥐 골격근 세포에서 심바스타틴 유발 독성을 예방할 수 있는지와 버바스코사이드가 효과에 기여하는 주요 생리 활성 성분인지 여부를 확인하는 것이었습니다.
재료 및 방법:MTT는 심바스타틴(10mM) 처리된 L6 세포에 대한 HCE({0}}–2000 mg/ml) 또는 verbascoside(0–160 mM)의 효과를 결정하기 위해 수행되었습니다. Annexin V-FITC/PI apoptosis assay와 Caspase 3 assay를 통해 심바스타틴에 의한 세포사멸에 대한 HCE의 보호역할을 확인하고, HCE가 caspase 경로를 통해 보호효과를 발휘하는지 평가하였다. ATP 생산은 HCE가 시험관 내에서 심바스타틴에 의한 ATP 생산 감소를 예방할 수 있는지 조사하기 위해 측정되었습니다.
결과:Simvastatin은 L6 세포에서 apoptotic cell death를 유의하게 증가시켰다. HCE는 아마도 caspase-3 경로를 통해 심바스타틴에 의해 유도된 세포자멸사 세포에서 용량 의존적 감소를 유의하게 나타냈습니다. Simvastatin은 L6 세포에서 ATP 생산을 감소시켰는데, 이는 HCE에 의해 용량 의존적으로 예방되었습니다. 심바스타틴으로 유발된 근육 독성의 보호에 대한 버바스코사이드의 경향이 있었지만 유의미한 효과는 없었습니다(고용량 제외).
결론:결론적으로, 우리는 HCE가 시험관 내에서 심바스타틴 유발 독성에 대해 용량 의존적 보호 효과를 발휘할 수 있음을 처음으로 입증했는데, 이는 버바스코사이드의 존재로 인해 있을 수 없었습니다. 우리의 연구는 심바스타틴 유발 근육 독성 상황에서 HC의 잠재적인 사용을 제안했습니다.
키워드:허바시스탄체스, 스타틴 콜레스테롤, 고지혈증, 근육 독성, 버바스코사이드, 카스파제{0}}
1. 소개
HMG-CoA 환원효소 억제제(스타틴)는 역사상 세계에서 가장 많이 팔린 처방 의약품 계열로 심혈관 질환(CVD) 위험이 중등도 및 고위험인 연령대가 다른 남녀 모두에게 유익한 것으로 잘 알려져 있습니다(Golomb 및 에반스, 2008). 그런 다음 프라바스타틴, 아토르바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 로수바스타틴 및 심바스타틴을 비롯한 다양한 스타틴이 개발되고 임상적으로 승인되었습니다. 일반적으로 모든 스타틴은 메발로네이트 경로의 초기 단계에서 HMG-CoA가 메발론산으로 환원되는 것을 억제하여 콜레스테롤 생성을 감소시키는 작용을 합니다(Kromer and Moosmann, 2009; Thompson et al., 2003). 스타틴은 일반적으로 내약성이 높지만 가장 중요하고 잘 알려진 임상 부작용 중 하나는 골격근 독성(횡문근 융해증)입니다(Kobayashi et al., 2008). 골격근 이상은 양성 근육통에서 중증 근육병증까지 다양합니다. 여러 메커니즘이 제안되고 스타틴의 근육 부작용에 대한 책임이 있을 수 있지만 미토콘드리아 메커니즘이 중요한 역할을 하는 것으로 믿어집니다(Golomb and Evans, 2008). 메발로네이트는 콜레스테롤의 전구체일 뿐만 아니라 셀레노단백질, 돌리콜 및 유비퀴논을 포함한 다른 화합물의 전구체이기도 합니다(Kaufmann et al., 2006; Vaklavas et al., 2009). 따라서 메발로네이트를 억제하는 스타틴의 능력은 항산화 방어 기전을 유지하는 데 중요한 효소인 글루타티온 퍼옥시다제(GPx)와 같은 셀레노단백질의 생산도 억제합니다(Kromer and Moosmann, 2009). 스타틴은 또한 유비퀴논 고갈로 이어져 산소 소비와 ATP 합성을 감소시킬 수 있습니다(Beltowski et al., 2009). 또한 증가하는 시험관 내 및 생체 내 연구에서 스타틴이 조직 미토콘드리아에 직접 작용하여 용량 의존적 방식으로 Ca2-의존성 막 투과성 전이(MPT)를 유도할 수 있음이 입증되었습니다(Beltowski et al., 2009; Velho et al., 2006). ). 또한 증가된 활성 산소종(ROS) 및 미토콘드리아 산화 스트레스와 관련되어 세포 사멸을 초래하여 간 및 근육 손상에 기여합니다(Beltowski et al., 2009; Velho et al., 2006).
허바시스탄체스, Cistanche Deserticola YC Ma 또는 Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight (Orobanchaceae과)의 전체 건조 식물은 중국 북부와 북동부의 사막 지역에서 주로 자라는 기생 식물입니다(Siu and Ko, 2010).허바시스탄체스발기 부전, 불임, 조루와 같은 증상이 있는 신장 결핍증을 치료하는 데 주로 사용되는 양 기운을 돋우는 중국 강장제입니다. 허브의 무겁고 칙칙한 성질은 또한 장을 촉촉하게 하고 변비를 완화하는 데 도움이 됩니다. 또한 전통적으로 허리와 무릎의 통증 환자에게 처방되는 한약재이며 근육 문제 치료를 위한 중국 제제에서 일반적으로 사용되는 한약재입니다(Siu and Ko, 2010; Xiong et al., 1998). 흥미롭게도 이것은 다당류가 풍부하고 페닐에타노이드가 풍부한 추출물의 피로 방지 활성을 입증한 현대 과학 연구와도 일치합니다.허바시스탄체스근육 손상을 감소시키고 ATP 저장을 개선함으로써 운동 후 쥐에서 (Cai et al., 2010). 최근 연구는 Herba Cistanches의 메탄올 추출물이 미토콘드리아 ATP 생성을 향상시킬 수 있음을 보여주었습니다(Leung and Ko, 2008). Siu and Ko(2010)은 다음을 증명했습니다.허바시스탄체스또한 글루타티온 합성 및 GPx 수준을 매개하여 미토콘드리아 글루타티온 상태를 향상시켜 쥐 심장의 산화 스트레스로부터 조직을 보호할 수 있습니다. Siu and Ko(2010)도 다음을 보여주었다.허바시스탄체스미토콘드리아 Ca2þ 함량을 감소시켜 Ca2þ 의존성 MPT를 감소시킬 수 있습니다. 뿐만 아니라,허바시스탄체스또한 생체 내 연구에서 산화 스트레스와 ROS 활성을 감소시켜 다양한 기관에서 강력한 항산화제 및 자유 라디칼 제거제인 것으로 입증되었습니다(Lu et al., 1995; Sui et al., 2011). 더 흥미롭게도, 항피로 활성에 기여하는 활성 분획을 결정하려는 시도에서허바시스탄체스, 버바스코사이드가 활성 분획의 주요 성분인 것으로 밝혀졌습니다(Cai et al., 2010). Verbascoside는 또한 항산화 활성으로 인해 두꺼비의 근육 피로를 줄이는 것으로 입증되었으며(Liao et al., 1999), 이는 verbascoside가 Herba Cistanches의 유익한 효과에 기여하는 생리 활성 성분일 수 있음을 시사합니다.
이 연구의 목적은 허브 Cistanches water extract(HCE)의 사용이 시험관 내에서 simvastatin에 의해 유발된 근육 독성을 감소시킬 수 있는지 여부를 확인하는 것이었습니다. HCE의 사용이 심바스타틴으로 인한 근육 독성의 부작용을 교정할 수 있다는 가설을 세웠습니다. 유익한 효과가 있는지 알아보려는 시도도 있었습니다.허바시스탄체스verbascoside의 존재에 기인합니다.
2. 재료 및 방법
2.1. 한약재 인증 및 준비
의 원료 한약재허바시스탄체스중국 광저우의 유명 공급업체로부터 구입했습니다.허바시스탄체스중국 약전(CP), 2010에 따라 박층 크로마토그래피(TLC)를 사용하여 화학적으로 인증되었으며 화학적 마커로 버바스코사이드 및 에키나코사이드를 사용했습니다(데이터는 표시되지 않음). 화학물질 인증시 식물표본표본 표본허바시스탄체스바우처 표본 번호 2014–3434로 홍콩 중문 대학교(CUHK)의 한의학 연구소 박물관에 기탁되었습니다.
간단히 말해서, 생약초 1kg을 1시간 동안 불린 후, 각 추출마다 10개의 증류수를 사용하여 100도에서 환류하에 1시간 동안 가열하여 2회 추출하였다. 수성 추출물(HCE)을 합하고 여과하였다. 여액을 60도에서 감압 농축하였다. 농축된 추출물을 동결건조하여 건조시켰다. 수율의 백분율은 50.1% w/w였다. 초고성능 액체크로마토그래피(UPLC)를 이용하여 버바스코사이드와 에키나코사이드의 양을 측정하기 위해 소량을 사용하였다. 추출된 모든 분말은 진공 포장되어 사용할 때까지 보관되었습니다.
2.2. 수성 추출물의 UPLC 분석
UPLC 분석은 Waters Acquity Ultra Performance LC System(Waters, USA)을 사용하여 수행되었습니다. UPLC 분석에 필요한 모든 용매는 홍콩 중문대학교 화학과에서 구입했습니다. Verbascoside와 echinacoside는 중국 국립 제약 및 생물 제품 통제 연구소에서 구입했습니다. 샘플 용액을 Waters ACQUITY UPLC BEH C18 VanGuard Pre-Column( 5-2.1 mm2 id, 입자 크기 1.7 mm). 모든 용매를 0.45mm Millipore 필터 디스크(Millipore)로 사전 여과하고 탈기했습니다. 다음 용매 시스템을 사용하여 구배 용출을 수행했습니다. 이동상 A - 아세토니트릴; 이동상 B - 이중 증류수/포름산(99.9/0.1; v/v). 용출은 다음과 같은 구배 절차로 수행되었습니다. 0–5분, 88% B; 5-10분, 88% B에서 83% B로. 사용된 유속은 0.4ml/min이고 CP(2010)에 따라 331nm에서 검출을 수행했습니다. 0.2mm 필터 디스크를 통해 여과한 후 각 샘플(5ul)을 컬럼에 주입했습니다. 미지의 피크의 머무름 시간과 UV 흡광도를 표준물질과 비교하여 화학적 마커의 식별을 수행했습니다. 보정 곡선은 정량화를 위해 일련의 버바스코사이드 및 에키나코사이드 농도(40, 20, 10, 5, 2.5 및 1.25mg/ml)로 플롯되었습니다. 허브 추출물 내 버바스코사이드 및 에키나코사이드의 정량화를 3회 수행했습니다. 시스템은 데이터 수집, 통합 및 분석을 위해 Waters MassLynx 소프트웨어가 장착된 컴퓨터로 모니터링되었습니다.
2.3. 세포 배양
L6 쥐 골격근 세포주는 American Type Culture Collection(ATCC, Manassa, VA, USA)에서 구입했습니다. 세포는 10% v/v 소태아혈청(FBS) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신(P/S)이 보충된 Dulbecco'sModified Eagle's Medium(DMEM, ATCC, Manassas, VA, USA)에서 서브컨플루언트 밀도로 유지되었고, 5% CO2와 95% 공기를 포함하는 가습된 대기에서 37도에서 배양됩니다.
스타틴 유발 근육 독성에 대한 HCE의 효과를 확인하기 위해 L6 세포에 10 μM의 simvastatin을 48시간 동안 처리하여 독성을 유도했습니다. HCE(농도 0, 250, 500, 1000 및 2000ug/ml에서) 또는 버바스코사이드(농도 0, 20, 40, 80 및 160μM에서)를 스타틴과의 공동 치료로 추가하여 한방 추출물은 골격근 세포에서 유도된 스타틴의 독성을 예방할 수 있으며, 버바스코사이드가 한방 수성 추출물과 유사한 보호 효과를 발휘할 수 있습니다.
시험관 내 심바스타틴 유발 독성에 대한 한방 추출물 보호 효과
2.4. 시험관내 세포독성
L6 세포(1x105/well)을 {{0}}웰 평평한 바닥 배양 플레이트(Iwaki, Japan)에 밤새 파종한 다음 다양한 용량의 HCE와 함께 또는 없이 10 μM의 심바스타틴 처리( 0–2000ug/ml) 또는 verbascoside(0–160μM), 48시간 동안 대조군 웰에 일반 배지(DMEM)를 첨가하였다. 본초 추출물 및 화합물을 DMEM에 용해시켰다.
48시간 처리 후, 모든 세포의 배지를 버리고 5 mg/ml 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,{{ 8}}디페닐-테트라졸륨 브로마이드(MTT; Sigma, USA)의 인산완충식염수(PBS)를 각 웰에 첨가하고 플레이트를 37도에서 3시간 동안 추가로 인큐베이션하였다. 그런 다음 상층액을 제거하고 100 ul의 DMSO를 각 웰에 첨가하여 보라색 포르마잔 결정(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO USA)을 용해시켰다. 각 샘플의 흡광도는 마이크로플레이트 리더(Biotek μ-Quant, USA)를 사용하여 540 nm에서 판독하였다. 결과는 대조군 세포에 대한 MTT 흡광도의 백분율로 표현되었습니다.
2.5. Annexin-V FITC/PI 염색 분석
L6 셀(3 x105/well)은 다양한 용량의 HCE 또는 버바스코사이드와 함께 또는 없이 심바스타틴으로 치료되었습니다. 그런 다음 세포를 수집하고 세척하고 제조업체의 프로토콜(Trevigen, MD, USA)에 따라 annexin-V FITC 키트로 염색했습니다. 간단히 말해서, 세포를 1 x 결합 완충액으로 2회 세척하고 실온에서 15분 동안 암실에서 1 ul 아넥신-V FITC 접합체 및 10 ul PI를 함유하는 100 ul 표지 용액에서 인큐베이션하였다. 시료의 형광은 유세포분석기(Becton Dickinson FACSCanto II, USA)로 검출하였다.
2.6. 카스파제 3 활성 분석
카스파제 3 활성은 제조사의 지침에 따라 형광측정, 면역흡착 효소 분석(Sigma)을 사용하여 결정되었습니다. 간략하게, 다양한 용량의 HCE 버바스코사이드와 함께 또는 없이 심바스타틴으로 처리된 L6 세포(3×105/웰)를 용해 완충액을 사용하여 용해시켰다. Caspase 3에 의한 기질의 단백질 분해 절단을 통해 생성된 유리 7-아미노-4-메틸쿠마린(AMC)을 BMG FLUOstarOptimamicroplate를 사용하여 여기 파장 360nm 및 방출 파장 460nm로 형광 측정 및 정량화했습니다. 리더(BMG LABTECH GmbH, 독일).
2.7. 세포 ATP 분석
L6 세포(3x105/well)은 다양한 용량의 HCE 또는 버바스코사이드와 함께 또는 없이 심바스타틴으로 치료되었습니다. 처리 후, 세포를 수집하고, 용해된 세포의 글리세롤 포스페이트 함량을 측정하고 마이크로플레이트 판독기(Biotek μ-Quant, USA)를 사용하여 570 nm에서 판독함으로써 시판되는 비색 키트(Abcam, UK)를 사용하여 ATP 함량을 측정하였다 ). ATP 생산의 측정은 대조군에 대한 백분율로 표시되었습니다.
2.8. 통계 분석
데이터는 통계 분석을 위해 7SD, Prism 5 for Window(version 5.{3}}c, GraphPad Software, Inc., USA)를 수단으로 사용했습니다. 모든 그룹 간의 유의한 차이는 일원 분산 분석에 의해 평가된 후 Bonferroni의 다중 비교 테스트에 의해 평가되었습니다. po{5}}.05의 확률은 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.
3. 결과
3.1. Herba Cistanches 수성 추출물의 UPLC 분석
그림 S1A는 에키나코사이드와 버바스코사이드를 포함하는 표준 혼합물의 UPLC 프로파일을 보여줍니다. 이들 각각의 마커의 머무름 시점을 UPLC 프로파일과 비교했습니다.허바시스탄체스수성 추출물(그림 S1B). 에키나코사이드 및 버바스코사이드의 양허바시스탄체스수성 추출물은 각각 {{0}}.45% w/w 및 0.085% w/w인 것으로 나타났습니다.
3.2. L6 골격근 세포에서 심바스타틴의 시험관내 세포독성에 대한 HCE 및 버바스코사이드의 효과
도 1A에 도시된 바와 같이, 심바스타틴은 10mM 심바스타틴에서 L6 세포 생존율의 유의한 감소에 의해 반영되는 바와 같이 L6 세포에 유의한 세포독성을 야기하였다. HCE 처리는 500, 1000 및 2000 mg/ml에서 용량 의존적으로 및 유의하게 심바스타틴 유도 세포독성을 예방하였다. Verbascoside는 simvastatin과 함께 치료한 L6 세포의 생존력을 향상시키는 경향을 보였습니다. 그러나 어떤 농도도 통계적 유의성에 도달하지 못했습니다(그림 1B).
그림 1. (a) HCE의 보호 효과; 및 (b) L6 세포에서 심바스타틴에 의해 유도된 세포독성에 대한 버바스코사이드. 값은 평균7SD(n=3)를 나타냅니다. 심바스타틴 단독 치료와 학생 t-검정을 사용한 대조군 간의 유의한 차이: ### po0.{{1{12}}}}01. 일원 ANOVA를 사용한 HCE 버바스코사이드 공동 치료 유무에 관계없이 모든 심바스타틴 치료 그룹 간의 유의한 차이: ** p0.01,*** p0.001.
3.3. L6 골격근 세포에서 심바스타틴 유도 세포 사멸에 대한 HCE 및 버바스코사이드의 효과
심바스타틴에 의해 유도된 세포 사멸 방식을 조사하고 심바스타틴에 의해 유도된 세포 사멸에 대한 HCE 또는 버바스코사이드의 보호 역할을 결정하기 위해 프로피디움 요오드화물(PI) 염색을 통해 세포 사멸 세포의 비율을 검출하였다. 결과는 심바스타틴이 초기 세포사멸 세포(Annexin V-FITC 양성 및 PI 음성, Q4–2)와 후기 세포사멸/사멸 세포(Annexin V-FITC 양성 및 PI 양성, Q2– 2) 대조군과 비교하여. HCE와 함께 치료하면 초기 세포사멸과 후기 세포사멸/사멸 세포의 비율이 최대 1000 mg/ml까지 용량 의존적으로 감소했습니다(그림 2A). 이 보호 효과는 버바스코사이드 병용 치료 그룹에서도 관찰되었습니다. 그러나 테스트된 농도 중 어느 것도 통계적 유의성에 도달하지 못했습니다(그림 2B).
그림 2. L6 세포의 포스파티딜세린 외부화에 대한 심바스타틴의 HCE 또는 버바스코사이드 병용 치료의 효과. 세포를 Annexin-V FITC 및 I로 염색하고 유세포 분석으로 검출했습니다.
3.4. 심바스타틴으로 처리된 L6 골격근 세포에서 카스파제 3 활성에 대한 HCE 및 버바스코사이드의 효과
도 3A에 나타난 바와 같이, 10mM 심바스타틴은 L6 세포에서 caspase 3 활성을 유의하게 유도하였고, 이는 caspase cascade를 통해 심바스타틴이 L6 세포로의 세포자멸사를 유도함을 시사한다. 그러나 심바스타틴과 HCE를 함께 처리한 L6 세포에서 HCE는 용량 의존적으로 caspase 3 활성을 유의하게 감소시켰으며, 이는 HCE가 caspase cascade를 통해 simvastatin에 의한 세포자멸사를 예방하는 능력을 시사합니다. 한편, verbascoside도 simvastatin에 의한 caspase 3 효소 활성 증가를 감소시키는 경향을 나타내었지만, 160mM 농도에서만 통계적 유의성에 도달하였다(Fig. 3B).
그림 3. (a) HCE의 보호 효과; 및 (b) L6 세포에서 심바스타틴 유도 카스파제 3 효소 활성에 대한 버바스코사이드. 값은 평균 7SD(n=3–5)를 나타냅니다. 심바스타틴 단독 치료와 학생 t-검정을 사용한 대조군 간의 상당한 차이: ###po0.{12}}01. 일원 분산 분석을 사용한 HCE 또는 버바스코사이드 공동 치료 유무에 관계없이 모든 심바스타틴 처리군 간의 유의한 차이: *po{16}}.05, **p o0.01, ***po0.001.
3.5. L6 골격근 세포에서 ATP 생산의 심바스타틴 유도 감소에 대한 HCE의 효과
Simvastatin(10mM)은 대조군과 비교하여 L6 세포에서 ATP 생산을 약 60%까지 유의하게 감소시켰습니다(그림 4A). HCE 동시 처리는 심바스타틴 처리 세포에서 ATP 생산 감소를 용량 의존적으로 약화시켰으며, 그 중 500, 1000 및 2000 mg/ml 농도에서만 통계적 유의성에 도달했습니다. 한편, verbascoside는 50 mg/ml에서 ATP 생산을 회복시키는 경향을 나타내었지만 통계적 유의성에 도달하지 않았다(Fig. 4B).
그림 4. L6 세포에서 심바스타틴에 의해 유도된 ATP 생산 감소에 대한 (a) HCE 및 (b) 버바스코사이드의 보호 효과. 값은 평균 7SD(n=3–5)를 나타냅니다. 심바스타틴 단독 치료와 학생 t-검정을 사용한 대조군 간의 상당한 차이: ###po0.{11}}01. 일원 ANOVA를 사용한 HCE 또는 버바스코사이드 공동 치료 유무에 관계없이 모든 심바스타틴 치료 그룹 간의 유의한 차이: *po0.05, **po0.01.
4. 토론
전 세계적으로 심혈관 질환(CVD)의 유병률이 증가하고 고콜레스테롤혈증 진단을 받은 환자가 증가함에 따라 스타틴의 사용이 더욱 보편화되었습니다. 스타틴은 일반적으로 내약성이 매우 우수하지만 근육 손상은 스타틴 사용과 관련하여 자주 보고되는 부작용으로, 약물 시작 후 몇 주 또는 몇 달에 급성으로 발생할 수 있습니다(Fine, 2003). 근육 증상은 크레아틴 키나아제(CK) 상승이 있거나 없는 통증, 압통 또는 쇠약과 같은 경미한 문제부터 횡문근 융해증의 가장 심각한 상태까지 다양할 수 있습니다(Armitage, 2007; Hu et al., 2012). 이러한 부작용이 발생하고, 스타틴에 의한 근육독성에 대한 효과적인 치료제가 없기 때문에 스타틴의 활용도가 낮은 실정이다. 전화 인터뷰를 통해 프랑스인 10,409명을 대상으로 한 광범위한 조사에서 스타틴 치료를 받은 환자의 10%가 근육 증상을 보고했으며 이 중 30%가 증상이 있는 환자의 치료를 중단했습니다(Rosenbaum et al., 2013).
의 물 추출물이 처음으로 입증되었습니다.허바시스탄체스일반적으로 사용되는 전통 중국 허브인 L6 골격근 세포에서 시험관 내 심바스타틴 유발 독성에 대한 보호 효과를 발휘할 수 있으며, 이는 다음의 가능성을 시사합니다.허바시스탄체스수성 추출물(HCE)은 스타틴을 복용하는 환자에서 흔히 볼 수 있는 부작용으로 알려진 스타틴 유발 근육 독성에 대한 보호 역할을 합니다. 따라서 스타틴 유발 근육 독성으로부터 보호하는 HCE의 강력한 능력은 큰 잠재력을 가질 것입니다.
한의학의 전통적 이론에 따르면 양은 신체의 미토콘드리아 에너지 대사와 관련이 있으며 양 기운을 북돋우는 약초의 처방은 미토콘드리아 ATP 생성을 향상시키는 것으로 밝혀졌습니다(Ko and Leung, 2007). 흥미롭게도, 우리는 심바스타틴 처리된 L6 골격근 세포에서 ATP 생성 감소를 관찰했으며, 이러한 ATP 생성 감소는 HCE 공동 처리로 상당히 개선되었습니다. 우리 연구에서 L6 쥐 골격근 세포를 사용하여 심바스타틴으로 인한 세포 생존력 감소를 입증했습니다. 이 세포 생존율의 감소는허바시스탄체스용량 의존적 방식으로. 스타틴에 의한 근육 독성의 정확한 기전은 완전히 밝혀지지 않았지만, 스타틴에 의해 유발된 건강한 골격근 세포의 세포자멸사는 스타틴 사용자가 경험하는 가장 흔한 부작용인 근병증을 유발하는 기여 요인으로 제안되었습니다(Dirks and Jones, 2006). . 우리의 연구에서 우리는 caspase 3 활성이 크게 증가한 것과 관련이 있는 simvastatin에 의해 유도된 apoptotic 세포의 상당한 증가를 관찰했습니다. 이러한 데이터는 또한 다양한 스타틴이 caspase-9 및 caspase{6}} 활성의 활성화를 통해 골격근모세포, 근관 및 분화된 1차 인간 골격근 세포에서 세포자멸사를 유도할 수 있음을 입증한 이전 연구와 일치합니다(Dirks 및 Jones, 2006). 우리의 HCE는 용량 의존적 방식으로 caspase{9}} 활성화된 세포자살의 심바스타틴 유도 증가를 방지할 수 있었습니다.
허바시스탄체스
게다가, 이전 문헌은 verbascoside가 내에서 주요 활성 성분 중 하나라고 제안했습니다.허바시스탄체스. 악테오사이드(acteoside)라고도 알려진 버바스코사이드(Verbascoside)는 물에 용해되는 폴리페놀 화합물의 자연 발생 그룹인 페닐에타노이드 배당체의 구성원에 속합니다(Liao et al., 1999). 이전에는 버바스코사이드가 강력한 ROS 소거 및 항산화 활성을 나타낼 수 있는 강력한 항산화제인 것으로 나타났습니다(Liao et al., 1999). 우리 연구에서 verbascoside가 관찰된 유익한 효과에 기여하는 HCE 내의 주요 구성 요소인지 확인하기 위해 0–160 mM 농도에서 verbascoside의 효과를 테스트했습니다. HCE가 0.085중량% 농도의 버바스코사이드를 함유하고 있음을 시사하는 HPLC 결과를 기반으로 HCE가 25{9}}–2{13}}00mg/ml의 농도 범위에서 활성임을 입증했기 때문에 /wt, verbascoside의 활성 농도는 0.2125–1.7 mg/ml(즉, 0.34–2.72 mM) 범위여야 하며, verbascoside가 활성 성분이어야 합니까? 그럼에도 불구하고, 우리는 L6 골격근 세포에 대한 verbascoside의 유익한 효과에 대한 용량 의존적 경향을 관찰했지만, 테스트된 농도 범위에서 verbascoside의 유의미한 유익한 효과를 관찰하지 못했습니다. 이러한 데이터는 L6 골격 세포에서 관찰된 HCE의 유익한 효과가 verbascoside 단독의 효과에 기인하지 않을 가능성이 있음을 시사하며, verbascoside 이외의 성분이 관찰된 유익한 효과의 원인이 될 수 있음을 시사합니다. Verbascoside가 추출물 내의 다른 생리 활성 화합물과 상호 작용하여 유익한 효과에 기여할 수도 있습니다. 생물 검정 유도 분획을 사용한 추가 실험은 심바스타틴 유도 근육 독성에 대한 HCE의 관찰된 보호 효과에 기여하는 생리 활성 성분을 발견하는 데 추가 통찰력을 제공하는 데 유용할 것입니다.
결론적으로, 본 연구는 HCE가 시험관 내에서 근육 세포 생존력의 심바스타틴 유도 감소에 강력한 보호 효과를 발휘할 수 있음을 나타냅니다. 이러한 결과는 당사의 HC 수성 추출물이 스타틴 유발 근독성으로 인해 스타틴 치료를 중단해야 하는 고지혈증 환자에게 기능성 식품 또는 기능식품으로서 치료적 가치가 있을 수 있음을 시사하는 예비 증거를 제공합니다.
감사의 말이 연구는 식품 보건국 HKSAR, 건강 및 의학 연구 기금 no. 11120831.
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