cistanche 총 배당체는 후각에 영향을 줍니까?
Mar 12, 2022
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쥐의 후각 피복 세포에 대한 시스탄체 총 배당체의 효과 및 신경영양 인자의 분비
Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan
척수 손상(SCI)은 중추의 심각한 손상입니다.신경계, {{0}}.2% - 전체 외상의 0.5%를 차지합니다. 척추 골절의 경우 16~40%가 척수 손상으로 인해 합병증이 발생하여 종종 심각한 장애가 발생하여 일상 생활의 어려움으로 이어지며 환자의 삶의 질에 영향을 미치고 가족과 사회에 큰 부담을 줍니다.후각OEC(ensheathing cell)는 특별한 유형의 신경 접착제입니다. 형질 세포는 다음을 통해 뇌로 이동할 수 있습니다.후각신경 축삭은 NGF, GDNF, BDNF, NT{0}}, neuropeptide-Y 및 S{2}}와 같은 많은 성장 인자를 분비할 수 있습니다. 이러한 특성으로 인해후각세포를 감싸는 OEC는 SCI를 복구하기 위한 세포 이식을 위한 유망한 종자 세포 중 하나로 간주됩니다. 현재 재활의학 분야에서 척수손상의 치료는 주로 종합적 재활에 기반을 두고 있다. 보다 효과적인 방법을 찾기 위해 다음과 같은 효과에 대한 연구가 진행되었다.시스탄체총배당체OEC:
1 재료 및 방법
1.1 실험 재료
위스타쥐(내몽골대학교 동물센터 제공);시스탄체총배당체, DMEM/F12 배지, 소태아혈청(FCS), 폴리-D-라이신, 아라비노사이드(Ara-C), 트립신, D-행크스 용액, 토끼 항-p75NGFR(Santa Cruz), ELISA 키트(Promega), 세포 배양기 (Thermo-HEPA Class 100), 역위상차현미경(Olympus CKX41, Japan), 초청정 작업대(Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) SW-CJ{13}}FD사, 효소 라벨 분석기(Wellscan MKH), 유세포 분석기 등
1.2 연구 방법
1.2.1 OECs 배양, 정제 및 식별: Wistar 쥐를 참수로 희생시키고 5분 동안 포도주에 담가 놓았습니다. 앞머리를 열어서 노출시켰습니다후각구근. 둘후각전구는 해부 현미경으로 완전히 제거되었습니다. D-Hanks 용액으로 씻으십시오. ~ 자르다후각미세외과용 가위로 전구에 0.25% 판크레아틴 2ml를 추가하고 37도에서 20분 동안 배양합니다. 10% 송아지 혈청을 포함하는 D MEM/F12 배양 배지를 2ml 원심분리 튜브에 첨가합니다. 소화는 중간에 종료되었습니다. 버스 피펫은 불완전하게 소화된 조직을 800rpm에서 흡인하고 5분 동안 원심분리하고 상층액을 버렸다. 마지막으로 조건 배지(20% FCS + 20|i, mol/LForskolin + 20|ig/mlBPE + DMEM /F12)를 사용하여 1x 107ml 단일 세포 현탁액으로 만들고 폴리리신 코팅된 세포 배양 플라스크에 접종하고 37도, 5% CO2 인큐베이터에서 Arac을 첨가한 다음 36시간에 정제를 수행했습니다. 면역 조직 화학 세포 식별 및 형광 현미경 관찰을 위해 토끼 항p75E 및 FITC 표지된 염소 항토끼 IgG 이차 항체를 사용합니다.
1.2.2 MTT 및 유세포 분석을 사용하여cistanche 총 배당체~에후각ensheathing 세포: 배양 및 정제된 접종후각1X106의 {{0}웰 플레이트에 세포를 감싼 다음cistanche 총 배당체(작용 농도는 Ijig/ml, 10mg/ml, 100mg/ml임), OD 값을 측정하고 작용 24시간 후 세포 유세포 분석을 측정합니다. 제어 그룹을 설정하고Cistanche 총 배당체다른 농도 그룹: 그룹 A(대조군): 혈청 함유 배양 배지를 음성 대조군으로 사용합니다. 그룹 B(cistanche 총 배당체저농도 그룹: llig/ml); 그룹 C(시스탠치 총 배당체 중간 농도 그룹: L10jxg/MK); 그룹 D(cistanche 총 배당체고농도 그룹: 100|xg/mlo): 각 그룹에 15마리의 쥐.
1.2.3 ELISA에 의한 상청액의 신경영양 인자 함량 측정: 배양 및 정제된 접종후각1x106에서 {{0}웰 플레이트에 세포를 감싸고cistanche 총 배당체(상기와 동일한 농도) 24시간 후 24시간 동안 작용하고 상층액을 따로 모아 -80에 보관함. 유체의 신경 성장 인자 함량은 ELISA 방법에 의해 결정되었습니다.
1.3 통계 분석
본 연구의 데이터는 측정 데이터로 취급되며, 얻어진 데이터는 평균±표준편차로 표현되며, 통계분석은 SPSS 11.{1}} 통계 소프트웨어를 사용한다. 얻은 데이터를 분산 분석으로 분석하고 P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">
2 결과
2.1 효과시스탄체총 배당체후각세포를 감싸는
2.1.1 메틸 옥사졸릴 테트라졸 방법(MT) 측정 결과: 그룹 A: 0.617±0.149; 그룹 B: 0.589±0.147; 그룹 C: 0.761±0.138; 그룹 D: 0.732±0.234. 비교Cistanche 총 배당체 group (B) and Control group (A), P>0.05, 차이가 크지 않았습니다.Cistanche 총 배당체10mg/ml, 100mg/ml 농도군(C, D)과 대조군(A) P<0.05, the="" difference="" is="">
2.1.2 유세포 분석 측정 결과는 그림 1에 나와 있습니다. 대조군과 비교하여,cistanche 총 배당체대조군은 대조군보다 높았고, 세포사멸 세포의 비율은 대조군보다 낮았다.
2.2 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA) 결과
시험 결과, 신경교 세포주 유래 신경영양 인자(GDNF) 함량: 투여 전: 302.1±16.6pg/ml, 그룹 A: 340.5±13.2pg/ml; 그룹 B: 333.2±23.6pg/ml; 그룹 C: 355.2±17.6pg/ml; 그룹 D; 379.2±15.3pg/ml. 투여 전과 비교하여 GDNF 함량이 크게 증가했습니다. 대조군(A)에 비해 GDNF 함량은Cistanche 총 배당체100mg/ml 농도군(D)은 유의하게 증가하였다.
3 토론
축삭 재생의 어려움은 척수 손상 후 회복이 어려운 주요 원인 중 하나입니다. OEC는 다른 유형의 세포가 대체하기 어려운 중심 뉴런 축삭의 재생에 역할을 합니다. 최근 몇 년 동안 연구후각세포를 감싸는 핫스팟이되었습니다.후각ensheathing 세포는 Schwann 세포와 성상 세포의 특성을 가진 특별한 유형의 신경교 세포입니다. 그들은후각기저막과 표면에 널리 분포후각점막,후각신경, 그리고후각구근. 평생 동안 분열하고 재생하는 능력이 있으며 동반할 수 있습니다.후각신경 축삭이 뇌로 이동합니다. 축색돌기후각신경은 30-60일마다 말초 신경계와 중추 신경계 사이의 접합부를 통과하여 신경으로 다시 자랄 수 있습니다.후각칼집 및 시냅스 연결 설정4.후각외피 세포는 NGF, BDNF, GDNF, NT{0}}, neuropeptide-Y 및 S{2}}와 같은 많은 성장 인자를 분비할 수 있습니다. 연구에 따르면 신경 성장 인자(NGF)는 척수 적핵 뉴런의 위축을 예방하고 피질척수관을 강화하며 적핵 척수 신경 경로의 재생을 촉진할 수 있습니다. 뇌 유래 신경영양 인자(BDNF)와 뉴로트로핀-3(NT-3)은 축삭 절단 손상이 있는 성체 쥐의 적혈구 척수 세포 사멸을 예방하고 죽어가는 뉴런을 구출하고 축삭 재생을 촉진할 수 있습니다. 게다가,후각ensheathing 세포는 또한 세포 접착 및 축삭 성장에 관여하는 신경 세포 접착 인자(N-CAM)와 같은 세포막의 다른 요소를 발현합니다. 이러한 특성으로 인해후각세포를 감싸는 OEC는 SCI를 복구하기 위한 세포 이식을 위한 유망한 종자 세포 중 하나로 간주됩니다.
의 화학 성분시스탄체주로 페닐에타노이드 배당체, 이리도이드, 휘발성 성분, 리그난, 다당류 및 알칼로이드를 포함합니다. 연구에 따르면시스탄체그리고 그 화학 성분은 신경 보호 효과가 있습니다. Deng et al. 은 종양 괴사 인자(TNF)에 의해 유도된 SH-SY5Y 뉴런의 세포자멸사에 대한 tubulosa B의 효과를 연구했습니다. 그 결과, 100ug/L에 의한 TNF 처리 36시간 후 SH-SY5Y 뉴런은 전형적인 세포사멸 특성을 보인 반면, 튜불린 B를 2시간 처리하면 TNF에 의해 유도된 세포사멸을 유의하게 감소시킬 수 있음을 보여주었다. 또한 연구에 따르면 페닐에타노이드 배당체가 caspase-3 및 caspase{8}}를 억제하고 메틸 페닐 테트라히드로피리딘(MPTP)에 의해 유발되는 C57 마우스 블랙에 대해 쥐 소뇌 과립 세포의 세포자멸사를 억제할 수 있음이 밝혀졌습니다. 양질의 도파민성 뉴런의 손상은 보호 효과가 있습니다. 뿐만 아니라,시스탄체또한 신경계의 허혈 재관류와 같은 다양한 손상을 완화할 수 있습니다. 마우스 뇌허혈 손상 실험에서 뇌허혈-재관류군에서 허혈 후 24시간과 48시간의 경색 범위는 평균 72.98%와 60.45%였다. 이에 반해,시스탄체총 배당체 대, 중 및 저용량 그룹(250.{3}}mg·kg/d, 125.0mg·kg/d, 62.5mg·kg/d)은 각각 쥐의 뇌를 만들 수 있습니다. 뇌허혈-재관류 24시간 후 경색 크기는 25.94%, 25.81%, 31.13%로 감소하였고, 뇌경색 크기는 48시간 후 22.14%, 20.06%, 22.27%로 감소하였다. 둘 사이에는 유의한 차이가 있어 신경 세포 사멸에 대한 유의한 억제 효과를 보였다.
이 연구에서는 다양한 농도의cistanche 총 배당체OEC에 적용되었습니다. MTT 방법 및 유세포 분석 측정에서 10mg/ml100mg/ml임을 확인했습니다.cistanche 총 배당체의 확산을 촉진할 수 있다.후각세포를 감싸고 있습니다. 유세포 분석의 결과는cistanche 총 배당체의 확산을 촉진할 수 있다.후각ensheathing 세포 주로 G1주기의 증식을 촉진합니다.후각정자 세포를 감소시키고 세포 사멸 세포를 현저하게 감소시킵니다. 그러므로,Cistanche 총 배당체의 확산을 촉진할 수 있을 뿐만 아니라후각세포를 보호할 뿐만 아니라 세포 활성을 증가시키고 세포자멸사를 억제합니다. 효소 결합 면역흡착 분석법은 다음을 증명합니다.Cistanche 총 배당체GDNF의 분비를 크게 촉진할 수 있습니다.후각세포를 감싸고 있습니다. 위의 결과는 임상 적용을 위한 실험적 근거를 제공합니다.Cistanche 총 배당체.
참고문헌
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