RNA M6 A 리더 YTHDF2는 NK 세포의 항종양 및 항바이러스 면역을 제어합니다 4부
Feb 22, 2024
YTHDF2는 m6A 함유 RNA를 인식하고 결합하며 m6A 전사체의 분해를 조절하는 m6A 판독기 역할을 한다는 것이 잘 알려져 있습니다.
그런 다음 NK 세포에서 YTHDF2에 의해 결합된 표적 전사체를 매핑하기 위해 YTHDF2 항체를 사용하여 RNA 면역침전(RIP)-seq을 수행했습니다. YTHDF2- 결합 부위는 단백질 코딩 서열 영역과 39UTR에 풍부했습니다(그림 S5, E 및 F).
독자와 기억 사이의 연결은 매우 가깝습니다. 독서는 기억력을 향상시키는 가장 좋은 방법 중 하나입니다.
우리가 책을 읽을 때 우리의 두뇌는 복잡한 과정을 거칩니다. 우리가 단어를 스캔하여 의미로 변환할 때 우리의 뇌는 끊임없이 새로운 신경 연결을 생성합니다. 이러한 신경 연결은 우리의 기억 시스템을 구성하고 장기 기억에 정보를 저장하는 데 도움이 됩니다.
또한, 독서는 상상력과 창의력을 자극하여 기억력 향상에도 도움이 됩니다. 우리가 마음 속에 이미지와 장면을 구성할 때 우리의 뇌는 활발하게 활동하므로 더 많은 신경 연결이 형성되어 기억 능력이 강화됩니다.
마지막으로, 독서는 집중력과 집중력도 향상시킵니다. 우리가 독서에 집중하면 우리의 뇌는 끊임없이 계속해서 운동을 하게 되어 기억력이 더욱 강해집니다.
전반적으로 독서는 우리의 기억력에 매우 긍정적인 영향을 미칠 수 있습니다. 독서 습관을 기르고, 독서를 통해 뇌를 자극함으로써 우리는 기억력을 향상시키고, 더욱 풍요롭고 흥미로운 삶을 누릴 수 있습니다. 기억력 향상이 필요하다고 볼 수 있는데, 시스탄체 데저티콜라는 기억력 향상이라는 독특한 효능이 많은 중국 전통 약재이기 때문에 기억력을 크게 향상시킬 수 있습니다. Cistanche Deserticola의 효능은 탄닌산, 다당류, 플라보노이드 글리코사이드 등 포함된 다양한 활성 성분에서 비롯됩니다. 이러한 성분은 다양한 경로를 통해 뇌 건강을 촉진할 수 있습니다.
우리는 1,290개의 전사체에서 3,951개의 잠재적 YTHDF2 결합 피크를 식별했으며, 그 중 426개(33%)가 상당한 m6A 농축으로 검출되었습니다. GO 농축 분석에 따르면 1,290개의 YTHDF2 표적 전사체가 단백질 번역, RNA 결합 및 RNA 스플라이싱이 농축된 것으로 나타났습니다(그림 S5G).
그런 다음 RNA-seq, m6A-seq 및 RIP-seq을 통해 중복되는 전사체로부터 잠재적인 표적 전사체를 식별하고 YTHDF2에 의해 결합되고 m6A로 표시된 29개의 전사체 세트(Ythdf2WT 및 Ythdf2ΔNK NK 세포 모두에서)가 NK 세포 간에 차등적으로 발현된다는 것을 발견했습니다. Ythdf2WT 및 Ythdf2ΔNK 마우스에서 유래되었습니다(그림 7G). 그 중 Ythdf2WT NK 세포의 전사물과 비교하여 Ythdf2ΔNK 마우스의 NK 세포에서는 12개의 전사체가 상향 조절되었고 17개의 전사체가 하향 조절되었습니다(그림 7G).
YTHDF2의 기능적 특성화와 RNA-seq 데이터의 GO 분석을 바탕으로 Ythdf2 결핍은 NK 세포 분열 및 증식에 영향을 미치며, 아마도 세포 분열 중 세포 주기 체크포인트 또는 음성 조절자의 mRNA 분해를 촉진함으로써 가능합니다.
12개의 상향 조절된 전사체 중 3개는 Mdm2(쥐 이중 분 2[MDM2]; Frum et al., 2009; Giono and Manfredi, 2007; Giono et al., 2017), Tardbp( TAR DNA 결합 단백질 43[TDP43]; Ayala et al., 2008; Sanna et al., 2020) 및 Crebzf(CREB/ATFBZIP 전사 인자; Hu et al., 2020; López-Mateo et al., 2012) 이는 이들이 NK 세포의 YTHDF2의 잠재적 표적임을 시사합니다.
참고로 m6A 피크는 Integrative Genomics Viewer에서 볼 수 있듯이 Mdm2 및 Tardbp의 39UTR에 있는 YTHDF2-결합 사이트와 Crebzf 유전자의 59UTR에 잘 맞습니다(그림 7H).
qPCR에 이어 m6A 또는 YTHDF2 항체를 사용한 RIP는 Mdm2, Tardbp 및 Crebzf가 실제로 m6A 메틸화되었으며 NK 세포에서 주로 YTHDF2에 의해 농축되었음을 확인했으며(그림 7, I 및 J), m6A-seq 및 RIP-seq 데이터를 지원합니다. 세 가지 유전자는 YTHDF2 inNK 세포의 잠재적 표적입니다.
YTHDF2가 mRNA 안정성을 조절하여 Mdm2, Tardbp 및 Crebzf 발현을 조절하는지 여부를 조사하기 위해 Ythdf2ΔNK 및 Ythdf2WT 마우스의 NK 세포에서 actinomycin D를 사용한 전사 억제를 통해 세 가지 표적의 mRNA 분해를 측정했습니다.
결과는 Crebzf가 아닌 Mdm2와 Tardbp가 Ythdf2WT 마우스의 NK 세포와 비교하여 Ythdf2ΔNK 마우스의 NK 세포에서 더 긴 반감기를 보였으며(그림 7, K-M), 이는 Mdm2와 Tardbpare가 NK 세포에서 YTHDF2에 의해 직접 조절된다는 것을 나타냅니다.
면역블롯팅을 사용하여 우리는 Ythdf2ΔNK 마우스의 NK 세포에서 MDM2와 TDP43의 단백질 수준이 상향 조절되었음을 확인했습니다(그림 S5 H). 이 두 유전자가 YTHDF2의 기능적 표적임을 추가로 확인하기 위해 Mdm2- 또는 Tardbp를 사용했습니다. - 시험관 내에서 두 유전자의 발현을 녹다운시키는 특정 siRNA(그림 S5, I 및 J).
그런 다음 IL-15 존재 하에서 Mdm2 또는 Tardbp를 녹다운하지 않은 경우와 Ythdf2ΔNKNK 세포의 세포 증식 및 생존을 비교했습니다. 결과는 Tardbp의 녹다운이 Ythdf2ΔNK 마우스의 NK 세포에서 세포 증식 및 세포 생존의 결함을 적어도 부분적으로 구제할 수 있음을 보여주었습니다(그림 7, N 및 O).
그러나 Mdm2의 녹다운은 구조 효과가 없었습니다(그림 S5, K 및 L). 이러한 결과는 YTHDF2가 Tardbp의 mRNA 안정성을 적어도 부분적으로 억제함으로써 NK 세포 증식 및 분열을 조절한다는 것을 나타냅니다.
논의
본 연구에서는 NK 세포 면역에서 YTHDF2-매개 m6A 메틸화의 다각적인 역할을 보고합니다. 우리는 m6A 변형의 가장 중요한 판독기 중 하나인 YTHDF2가 NK 세포 항상성, 성숙, IL-15 매개 생존, 항종양 및 항바이러스 활성을 유지하는 데 중요하다는 사실을 발견했습니다.
우리는 또한 마우스 NK 세포의 효과기 기능과 생존에 기여하는 IL-15 하류의 STAT5와 YTHDF2 사이의 새로운 긍정적인 피드백 루프를 확인했습니다. 우리의 연구는 일반적으로 NK 세포 선천 면역에서 YTHDF2 또는 m6A 메틸화의 생물학적 역할을 설명합니다. YTHDF2가 악성 변형 및 바이러스 감염에 대한 타고난 면역 반응을 어떻게 조절하는지에 대한 지식의 격차를 메웁니다.
우리의 연구 결과는 NK 세포 항종양 면역을 활용하는 동시에 선천성 면역 형성에 있어 m6A 변형에 대한 이해를 발전시키는 새로운 방향을 제시합니다. m6A 리더 단백질 YTHDF2는 표적 mRNA의 안정성을 조절합니다(Du et al., 2016; Wang et al., 2014). 수많은 연구에서 YTHDF2가 다양한 생물학적 과정에 미치는 광범위한 영향을 뒷받침했습니다.
YTHDF2는 정상적인 조혈줄기 세포 확장과 자가 재생을 억제하지만 장기적인 조혈 줄기 세포 유지에도 필요합니다(Li et al., 2018; Mapperley et al., 2021 Paris et al., 2019; Wang et al., 2018a). 최근 이 유전자는 박테리아 감염 중 염증을 억제하는 데 관여합니다(Wu et al., 2020a). 종양 발달에서 YTHDF2의 역할과 메커니즘은 잘 연구되었습니다.
YTHDF2는 백혈병 줄기 세포 발달과 급성 골수성 백혈병 개시를 촉진합니다(Paris et al., 2019). 백혈병 외에도 YTHDF2는 전립선암(Liet al., 2020), 교모세포종(Dixit et al., 2021), 간세포암종(Chen et al., 2018; Hou et al., 2019; Zhang et al., 2020), 종양 억제 인자 LHPP 및 NKX3-1(Li et al., 2020), IGFBP3(Dixit et al., 2021), OCT4( Zhang et al., 2020) 및 SOCS2(Chenet al., 2018).
YTHDF2가 종양 진행을 촉진하는 역할을 하지만, 본 연구에서는 종양 세포, 특히 바이러스 감염 및 악성 형질전환에 대한 선천적 면역의 핵심 구성 요소인 NK 세포에 대한 면역 반응에서 YTHDF2의 유익한 역할을 밝혀냈습니다.
따라서 암 치료를 위해 종양 세포를 표적으로 삼는 YTHDF2 억제제의 향후 개발은 YTHDF2의 억제가 NK 세포에 의한 숙주의 항종양 반응을 손상시킬 수 있으므로 주의해서 추진해야 합니다. 반면, NK 세포나 다른 면역 세포에서 YTHDF2의 항종양 활성을 활용하려면 종양 세포에 직접 작용하는 잠재적인 효과를 고려해야 합니다. 종양 세포와 면역 세포에서 YTHDF2의 차별적 표적화는 항종양 활성을 극대화해야 합니다.
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