RNA M6 A 리더 YTHDF2는 NK 세포의 항종양 및 항바이러스 면역을 제어합니다 파트 2

NK 세포의 항바이러스 기능에는 YTHDF2가 필요합니다.

Ythdf2 결핍이 NK 세포의 항바이러스 활성에 영향을 미치는지 확인하기 위해 Ythdf2WT 마우스와 Ythdf2ΔNK 마우스에 2.5 x 104 PFU의 MCMV를 주입했습니다.

항바이러스 활동과 면역은 분리될 수 없으며 밀접한 관계가 있습니다. 바이러스는 매우 작은 미생물이지만 많은 질병을 일으키고 심한 경우 사망까지 초래할 수 있습니다.

항바이러스 활동은 바이러스와 싸우는 신체의 능력을 말합니다. 항바이러스 활동 수준이 높은 사람들은 바이러스를 더 빨리 제거하고 질병 발병에 효과적으로 저항할 수 있습니다. 면역력이란 적응기간 이후 체내에서 생성되는 방어물질을 말하며, 이는 체내의 유해물질을 제거할 수 있다.

충분한 수면을 취하고, 건강한 식단을 섭취하고, 운동하는 것은 건강을 유지하는 데 매우 중요합니다. 이러한 요인은 인간의 면역력을 향상시켜 신체의 항바이러스 활동을 향상시킬 수 있습니다. 특히 코로나-19 대유행 기간에는 건강을 유지하는 것이 중요합니다.

또한, 안정된 기분도 면역력에 큰 영향을 미칩니다. 낙관적인 태도는 사람들을 육체적, 정신적으로 편안하게 만들어 면역력과 항바이러스 활동을 향상시킬 수 있습니다. 반대로 비관적인 감정은 신체의 면역력을 감소시키고 신체를 바이러스 공격에 더욱 취약하게 만듭니다.

즉, 항바이러스 작용과 면역력은 상호 연관되어 있으며, 신체 건강과 건강한 생활습관을 확보하기 위해서는 다양한 방법으로 신체의 면역력과 항바이러스 작용을 향상시키는 데 관심을 기울여야 합니다. 기억력 향상이 필요하다는 것을 알 수 있는데, 시스탄체 데저티콜라에는 항산화, 항염증, 항노화 효과가 있어 뇌의 산화 및 염증 반응을 감소시켜 뇌를 보호할 수 있기 때문에 기억력을 크게 향상시킬 수 있습니다. 신경계의 건강. 또한 Cistanche Deserticola는 신경 세포의 성장과 복구를 촉진하여 신경 네트워크의 연결성과 기능을 향상시킬 수 있습니다. 이러한 효과는 기억력, 학습 및 사고 속도를 향상시키는 데 도움이 될 수 있으며 인지 기능 장애 및 신경퇴행성 질환의 발병을 예방할 수도 있습니다.

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결과는 Ythdf2ΔNK 마우스가 Ythdf2WT 마우스에 비해 상당한 체중 감소와 혈액, 비장 및 간에서 바이러스 역가의 증가로 인해 MCMV 감염에 더 취약하다는 것을 보여주었습니다(그림 3, A 및 B, 그림 S2, A 및 B). .

우리는 또한 감염 후 Ythdf2WT 마우스의 세포와 비교하여 Ythdf2ΔNK 마우스의 비장과 혈액에서 총 NK 세포의 비율과 절대 수가 유의하게 감소하는 것을 관찰했습니다(그림 3, C 및 D, 그림 S2, C 및 D). 추가 분석에 따르면 Ythdf2ΔNK 마우스의 NK 세포는 Ythdf2WT 마우스보다 Ki67의 발현이 현저히 낮았습니다 (그림 3, E-G).

그러나 Annexin V 염색에서 볼 수 있듯이 Ythdf2WT 마우스와 Ythdf2ΔNK 마우스 사이의 NK 세포 생존율은 유사했습니다 (그림 S2 E). 이러한 데이터는 NK 세포에서 YTHDF2의 결핍이 바이러스 감염 동안 세포 생존보다는 세포 증식에 ​​결함을 초래한다는 것을 나타냅니다.

NK세포는 활성화 수용체인 Ly49H 및 Ly49D를 통해 MCMV 감염을 억제하며 이 과정은 퍼포린 또는 IFN 매개 항바이러스 반응을 특징으로 합니다(Arase et al., 2002; Lee et al., 2009; Loh et al., 2005; Orr et al. al., 2010; Sumaria et al., 2009). 우리는 Ythdf2ΔNK 마우스가 감염 후 Ythdf2WT 마우스와 비교하여 비장과 혈액에서 Ly49H+ 및 Ly49D+ NK 세포를 유의하게 감소시켰다는 것을 발견했습니다(그림 3, H–J 및 그림 S2, F–K).

추가 분석에 따르면 Ly49D+Ly49H+ 세포만이 Ythdf2WT 마우스와 비교하여 Ythdf2ΔNK 마우스에서 차이를 보였지만 Ly49D-Ly49H+ NK 세포, Ly49D+Ly49H- NK 세포 및 Ly49D+Ly49H+ NK 세포의 절대 세포 수는 감염 후 Ythdf2WTmice에 비해 Ythdf2ΔNK 생쥐에서 비장과 혈액이 모두 유의하게 감소했습니다 (그림 S2, L-W).

우리의 데이터는 YTHDF2에 의한 MCMV 감염 제어가 주로 Ly49D+Ly49H+ NK 세포에 의해 매개되는 것으로 보인다는 것을 시사합니다. Ythdf2ΔNK 마우스에서 NK 세포에 의한 그랜자임 B 및 IFN-생산은 Ythdf2WT 마우스의 생산과 유사했습니다(그림 S2, X 및 Y).

우리는 감염 7일 후 비장과 혈액 모두에서 Ythdf2ΔNK 마우스와 비교하여 Ythdf2ΔNK 마우스의 퍼포린 생산이 현저히 감소한 것을 발견했으며(그림 3, K-M), 이는 YTHDF2가 주로 NK 세포에서 MCMV에 대한 퍼포린 매개 항바이러스 활성에 영향을 미친다는 것을 나타냅니다. YTHDF2는 MCMV 감염 동안 NK 세포 확장 및 이펙터 기능에 중요하다고 제안합니다.

YTHDF2는 정상 상태에서 NK 세포 항상성과 최종 성숙을 제어합니다

NK 세포의 Ythdf2 결핍으로 인해 종양 전이가 강화되고 NK 세포의 MCMV 감염 조절 능력이 손상된다는 위의 발견은 YTHDF2가 정상 상태에서 NK 세포 유지에 필요한지 여부를 조사하도록 장려했습니다.

도 4A에 도시된 바와 같이, Ythdf2WT 마우스와 비교하여 Ythdf2ΔNK 마우스의 말초 혈액, 비장, 간 및 폐에서는 NK 세포의 빈도 및 절대 수가 크게 감소했지만 골수(BM)에서는 감소하지 않았습니다.

그러나 Ythdf2WT와 Ythdf2ΔNK 마우스 사이의 BM(Fathman et al., 2011)에서 일반 림프구 전구세포, 전-NK 세포 전구세포 및 정제된 NK 세포 전구세포(NKP) 사이에는 유의미한 변화가 없었습니다(그림 S3 A). YTHDF2는 우리 모델의 NK 세포 초기 발달에 영향을 미치지 않을 수 있습니다. Ythdf2ΔNK 마우스에서 NK 세포의 감소를 담당하는 잠재적 메커니즘을 탐색하기 위해 우리는 정상 상태에서 Ythdf2 결실 후 NK 세포의 세포 증식, 생존력 및 수송 능력을 조사했습니다.

증식하는 NK 세포의 비율은 Ki67 염색으로 입증된 바와 같이 Ythdf2WT와 Ythdf2ΔNK 마우스 사이에서 비슷했습니다(그림 S3 B). NKcells의 생존력은 Annexin V 염색에서 볼 수 있듯이 Ythdf2WT와 Ythdf2ΔNK 마우스 사이에서도 동일했습니다(그림 S3 C).

YTHDF2가 BM에서 말초로의 NK 세포 유출에 영향을 미치는지 확인하기 위해 Ythdf2WT 및 Ythdf2ΔNK 마우스에 항CD45 항체를 정맥 주사하여 면역 세포를 표시하고 2분 후에 희생시킨 후 BM 세포를 분석했습니다. 이를 통해 우리는 정상 상태에서 BM에서 말초 혈액으로 NK 세포가 이동하는 지표인 BM의 정현파 대 실질 영역에 있는 NK 세포의 수를 정량화할 수 있었습니다(Leong et al., 2015).

결과는 정현파에서 Ythdf2WT 마우스와 비교하여 Ythdf2ΔNK 마우스에서 CD{0}} NK 세포의 빈도가 크게 감소한 것으로 나타났습니다(그림 4B). 이는 Ythdf2 결핍이 BM에서 생체 내 순환 시스템으로의 NK 세포 유출을 손상시킨다는 것을 나타냅니다. .면역 세포는 특정 바이러스 감염이나 화학요법에 의해 유발된 림프감소증 동안 항상성 증식을 겪습니다(Sun et al., 2011).

우리는 YTHDF2가 정상 상태에서 NK 세포 증식에 ​​필요하지 않다는 것을 발견했지만 MCMV 감염 동안 세포 증식이 크게 감소하는 것을 관찰했습니다 (그림 3, E-G). 따라서 우리는 생체 내 림프구 감소 환경에서 NK 세포 항상성 증식을 조절하는 데 있어 YTHDF2의 역할을 조사했습니다. 우리는 CD45.2 Ythdf2ΔNK 마우스 또는 CD45.1 동질 마우스로부터 동일한 수의 비장 NK 세포를 림프구가 결핍된 Rag2-/-Il2rg-/-마우스로 공동 전달했습니다.

결과는 세포 전달 후 3일째에 CD45.2 Ythdf2ΔNK 마우스보다 CD45.1WT 대조 마우스에서 더 많은 비율의 NK 세포가 유래되었음을 보여주었습니다(그림 S3 D). 추가 분석에 따르면 Ythdf2ΔNK 마우스의 NK 세포 감소는 세포 증식 장애(그림 S3 E)로 인한 것이지 세포 사멸(그림 S3 F) 때문이 아닌 것으로 나타났습니다. 이는 YTHDF2가 림프구 감소 조건 하에서 생체 내에서 NK 세포 항상성 증식을 유도함을 시사합니다.

쥐 NK 세포의 추가 분화는 CD11b 및 CD27 수준에 따라 미성숙(CD11b−CD27+), 중간 성숙(CD11b+CD{4}}) 및 말기 성숙(CD11b+CD27−) 단계로 분류될 수 있습니다( Chiossone 외, 2009; Geiger 및 Sun, 2016).

우리는 Ythdf2 발현이 성숙함에 따라 증가하고 CD11b-CD27+, CD11b+CD27+ 및 CD11b+CD27-가 각각 Ythdf2의 최저, 중간 및 최고 발현 수준을 나타냄을 발견했습니다(그림 S3 G). ), 이는 YTHDF2가 NK 세포 성숙에 관여할 수 있음을 나타냅니다. 따라서 우리는 세포 표면 마커 CD11b 및 CD27에 의해 정의된 NK 세포 성숙에서 YTHDF2의 역할을 조사했습니다.

우리는 NK 세포에서 Ythdf2의 손실로 인해 말단 성숙 NK 세포의 빈도가 크게 감소하고/또는 비장, 간, 폐 및 혈액에서 미성숙 및 중간 성숙 NK 세포가 증가하지만 BM에서는 그렇지 않음을 발견했습니다(그림 4C 및 그림 S3 H), 이는 YTHDF2가 말단 NK 세포 성숙을 적극적으로 조절한다는 것을 나타냅니다. 이러한 데이터와 일치하여, 말단 NK 세포 성숙 마커인 KLRG1의 수준은 비장, 간 및 폐에서 Ythdf2ΔNK 마우스에서 유의하게 낮았지만 BM과 비교하면 그렇지 않았습니다. 상응하는 기관 또는 조직 구획에 있는 Ythdf2WT 마우스의 것(그림 4D).

Ythdf2 결핍에 의해 감소된 성숙한 NK 세포 수가 세포 내재성인지 확인하기 위해 CD45.1 WT 및 CD45.2 Ythdf2ΔNK 마우스의 BM 세포를 1:1로 혼합하여 Rag2-/-Il2rg-/- 마우스에 키메라를 만들었습니다. 비율.

이식 후 8주째 유세포 분석에서 볼 수 있듯이, 말단 성숙 NK 세포의 비율은 CD45.1 WT 대조 세포의 것보다 CD45.2 Ythdf2ΔNK BM 세포에서 유래되었으며(그림 4E), 이는 NK 세포 말단 성숙이 YTHDF2에 의해 제어됨을 시사합니다. T-box 전사 인자인 Eomes와 Tbet은 NKcell 성숙에 중요합니다(Daussy et al., 2014; Gordon et al., 2012).

세포 내 염색은 Ythdf2WT 마우스와 비교하여 Ythdf2ΔNK 마우스의 NK 세포에서 Eomes의 단백질 수준이 크게 감소한 것으로 나타났습니다 (그림 S3 I). 또한, 우리는 Eomes의 단백질 및 mRNA 수준의 감소가 말기 성숙(CD11b+CD27-) NK 세포에서 특이적으로 발생한다는 것을 발견했습니다(그림 S3,J-L).

그러나 Eomes와 달리 Tbet의 발현은 Ythdf2ΔNK와 Ythdf2WT 마우스 사이의 NK 세포에서 동일했으며(그림 S3, I 및 K), 이는 YTHDF2가 Eomes를 표적으로 삼아 NK세포 말단 성숙을 조절할 수 있음을 나타냅니다.

YTHDF2는 NK 세포 이펙터 기능을 촉진합니다

Ythdf2 결핍이 NK 세포의 항상성과 성숙을 방해한다는 우리의 발견은 YTHDF2가 NK 세포 이펙터 기능도 억제하는지 결정하도록 동기를 부여했습니다. NK 세포 기능을 조절하는 주요 메커니즘은 억제 수용체와 활성화 수용체의 상대적 기여입니다(Chan et al., 2014).

그런 다음 NKcell 활성화 또는 억제와 관련된 분자의 발현 수준을 확인했습니다. 우리는 활성화 수용체 CD226 및 NKG2D의 발현 수준이 Ythdf2WT 마우스의 비장 NK 세포와 비교하여 Ythdf2ΔNK 마우스의 비장 NK 세포에서 감소한 반면(그림 5A), 억제 수용체 NKG2A, TIGIT 및 PD{{ 7}}은 Ythdf2ΔNK 마우스와 Ythdf2WT 마우스 사이에서 유사했습니다(그림 5A 및 그림 S3M).

또한, Ythdf2ΔNK NK 세포는 IL-12+IL-18 또는 YAC-1 마우스 림프종 세포로 자극했을 때 Ythdf2WT NK 세포보다 훨씬 적은 IFN-를 생성했습니다(그림 5, B 및 C). ).

그런 다음 Ythdf2ΔNK NK 세포의 세포 독성 능력을 테스트했습니다. 우리는 Ythdf2ΔNK NK 세포가 MHC 클래스 I 결핍 마우스 림프종 세포주 RMA-S에 대해 세포 독성을 유의하게 감소시켰으나(그림 5D), 51Crassay에서 볼 수 있듯이 MHC 클래스 I 충분한 RMA 세포(그림 S3 N)에 대해서는 유사한 세포 독성을 나타냈습니다. . 종합적으로 말하자면, 이러한 발견은 YTHDF2가 NK 세포 이펙터 기능에 필수적이라는 것을 보여줍니다.

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