Cistanche의 새로운 적용을 위한 과학적 기초
Mar 09, 2022
연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com
Sun Weidong1, Chen Fei2, Sun Yun2
(1. Yangzhou 중국 전통 의학 병원, Yangzhou 225009, Jiangsu; 2. Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu)
초록: beg nin prostatic hyperplasia (BPH) 쥐 모델을 정립하고, 3가지 용량 그룹의 악티오시드를 4주간 경구 투여하여 증류된 악티오시드의 효과를 연구했습니다.시스탄체 튜불로사BPH가 있는 쥐의 세포자살 및 미세구조 전립선에 대한 연구. 투과전자현미경으로 전립선의 미세구조 변화를 관찰하였다. 결과는 정상적인 쥐의 전립선의 세포자살은 명백하지 않았음을 보여주었습니다.
모델 그룹의 전립선 아폽토시스 비율, 고용량 악테오사이드시스탄체 튜불로사처리, 쥐 전립선 apoptosis는 모델의 그것보다 유의하게 더 높았다.
키워드:시스탄체, 시스탄체 튜불로사, 악티오사이드; 쥐; 전립선 비대증 시작; 아폽토시스; 초미세구조
양성 전립선 비대증(BPH) 과정에서 세포 사멸은 현재 주목받고 있는 기전 중 하나이다. 유전자 코딩은 그것을 결정하고 세포가 특정 신호에 반응하여 프로그램된 세포 사멸을 제어할 수 있도록 합니다.
전립선이 성체 크기로 발달한 후, 평균 세포자살률의 균형을 통해 전립선 세포의 증식률은 1~2%로 유지됩니다. 균형이 깨지면 BPH의 원인으로 간주됩니다. 정상적인 조건에서 에스트로겐과 안드로겐의 수치와 전립선의 정상적인 순환은 증식과 세포사멸의 과정에서 존재하는 일종의 자기 균형 상태입니다. 증식과 아폽토시스의 균형이 어긋나면 샘의 추가 성장과 확장이 일어나며, 이는 주로 상피 세포 구획의 확장을 유발합니다[1].
이 실험에서는 쥐의 전립선 비대증 모델을 구축하여 의 화학 성분 중 하나인 acteoside(coaction-like glycoside)의 효과를 관찰하고 분석했습니다.시스탄체쥐 전립선 세포의 세포 사멸 및 미세 구조 변화에 대한 acteoside의 효과를 평가하기 위해 전립선 증식 억제 효과는 한약 Cistanche의 개발 및 활용을 위한 과학적 기초를 제공합니다.
시스탄체발췌
1 재료 및 방법
1. 1 실험동물
6-7주된 50마리의 수컷 SD 쥐, 무게 80-100g, 깨끗한 등급은 Yangzhou University의 비교 의학 센터에서 제공합니다.
1. 2 시약 및 의약품
테스토스테론 프로피오네이트 주사는 Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd.에서, 사양은 25 mg·mL{1}}이고, 배치 번호는 060708입니다. PI 염료 용액은 Yangzhou University Testing Center에서 제공합니다. 악티사이드 함량은 945g·kg-1, 중국 약학 대학교 한의학 분석학과에서 작성했습니다.
1. 3 실험장비
Philips Tecnai 12 투과 전자 현미경은 네덜란드 Philips의 제품입니다. FACSAria 유세포 분석기는 미국의 BD 제품입니다.
1. 4 그룹화 및 모델링
문헌[3]의 방법에 따라 거세 후, 쥐에게 5 mg·(kg·d)을 주사하였다.-1전립선 비대증 모델을 확립하기 위해 4주 동안 쥐의 등에 테스토스테론 프로피오네이트를 투여했습니다. 모델 래트를 모델 그룹으로 무작위로 나누었습니다: 모델 플러스 악테오사이드 고용량 그룹, 모델 플러스 악테오사이드 중간 용량 그룹, 모델 플러스 악테오사이드 저용량 그룹, 각 그룹에 10마리의 래트; 다른 10마리의 정상 쥐를 대조군으로 하였다.
1. 5 투여방법
모델링 1주일 후, 고, 중, 저용량 그룹에 각각 60, 30, 15 mg·(kg·d)-1 위관 영양법이 제공되었습니다. 모델군과 대조군은 4주간 1일 1회 동량의 생리식염수를 투여하고, 1주일에 1회 칭량하여 체중에 따라 투여량을 조절하였다.
1. 6 시료 채취 및 처리
1) 재료 및 샘플 준비: 마지막 투여 24시간 후, 공복 래트의 무게를 측정하고 래트를 경추 탈구로 희생시킨다. 즉시 하복부를 열고 전립선 주변의 조직을 벗겨내고 전립선을 풀어주고 전립선의 일부를 얼음욕조에 사용합니다. 조직 균질화기를 균질화하고, 전립선 단세포 현탁액을 제조하고, 요오드화 프로피디움 1단계 방법으로 염색한다[4]; 전립선 조직의 다른 부분을 25g·L-1 glutaraldehyde에 고정하여 초박형 절편을 제작했습니다.
2) 단세포 현탁액 준비: 무균 상태에서 쥐의 전립선을 완전히 제거하여 페트리 접시에 옮기고 전립선 조직 표면의 혈병과 혈전을 PBS로 세척하고 주변 지방, 과잉 섬유질, 및 세포막. 동일한 쥐의 전립선에서 약 0.5cm 크기의 신선한 전립선 조직3취하여 조각으로 잘라 전립선 세포 현탁액을 제조하였다[5]. 페트리 접시에 전립선 조직 블록을 놓고 소량의 PBS를 추가합니다. 안과 가위를 사용하여 얼음 욕조에서 조직을 절단하고 균질기를 현탁액으로 분쇄하고 10 mL PBS를 추가하고 조직 균질액을 피펫으로 사용하고 0.074 mm 공극 크기 나일론 메쉬를 사용하여 시험관에 여과하고 원심분리 1 500 분-13분 동안 침전물을 PBS로 500 r min에서 3회 세척했습니다.-1세포 파편을 제거하기 위한 단기 저속 원심분리, 0.037 mm 공극 크기 나일론 메쉬 필터로 세포 덩어리를 제거합니다. 세포 수를 세고 세포 농도를 2×109 cells·L로 조정합니다.-1. 1mL PI 염색 용액으로 염색하고 4도에서 10분 동안 빛으로부터 보호합니다.
3) 극박 절편 준비: 초박 조직 절편 준비에 대해서는 문헌[6]을 참조하십시오.
2 결과 및 분석
그림 1 BPH 쥐 모델의 세포사멸 및 액테오사이드의 유도 작용
ㅏ. 일반 그룹; 비. 모델 그룹; 씨. Acteoside 고용량 그룹; 디. Acteoside 저용량 그룹
2. 1 쥐의 전립선 세포자살에 대한 악테오사이드의 효과
그림 1은 유세포분석에 의해 검출된 세포자멸사의 피크를 보여주며, 이는 액테오사이드가 세포자멸사 촉진 효과가 있음을 보여줍니다. 세포 사멸 결과의 통계적 분석에 따르면 쥐의 세포 사멸 비율은 고용량, 중간 및 저용량으로 처리한 후 (24.7±1.85)% 및 (16.1±1.{12}}4)% 증가했습니다. 악티오사이드. , (14.5±0.68) 퍼센트 및 정상 그룹(1.1±{{20}}.06) 퍼센트, 모델 그룹(9.5±0.5) 퍼센트, 양성 그룹(9.83±) 0.76) 백분율 비교의 차이가 중요합니다(P<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="" apoptosis,="" the="" effect="" is="" stronger="" than="" that="" of="" the="" positive="" control="" drug="" qianliekang="" (figure="">
그림 2 BPH 쥐 모델에서 세포자살의 전파와 악테오사이드의 효과
2.2 전립선 비대증 세포의 미세구조에 대한 악테오사이드의 효과.
전자 현미경 관찰은 정상적인 쥐의 전립선이 완전한 핵, 분명히 핵소체 및 균일한 핵 염색질 분포를 가지고 있음을 보여줍니다. 조면 소포체는 크기가 같고 가지런히 배열되어 있으며 공포가 없다. 상피 표면에 손가락 모양의 미세 융모가 없고, 미토콘드리아의 부종이 없고, 공동 내 분비물이 거의 없다. 모델군의 전립선 세포의 핵은 변형 및 수축되었으며, 세포질은 풍부하였다. 거친 소포체는 낭종 모양으로 확장되었고 낭종은 고밀도 단백질 입자로 채워졌습니다. 미토콘드리아는 약간 부어올랐고(액포도 있음), 공동에 중간 밀도의 분비물이 있었고, 일부 세포에서 조밀한 원형 분비 과립이 발견되었습니다. Acteoside로 처리된 쥐에서 핵은 모델 그룹과 비교하여 손상되지 않았습니다. 핵이 농축되고 핵 밀도가 증가하고 이질염색질이 축적되며 세포질에 액포가 있으며 거친 소포체 액포가 감소했습니다. 저용량의 악테오사이드 그룹은 약간 주름진 핵 수축, 불규칙하고 풍부한 세포질, 감소된 거친 소포체를 가졌다(그림 3).
cistanche의 이점: 반대로아폽토시스
3 토론
아폽토시스는 신체의 발달을 조절하고 내부 환경의 안정성을 유지하는 다세포 유기체에서 프로그램된 세포 사멸의 과정이며, 유전 코드가 이를 결정합니다.
세포 사멸 세포는 핵 염색질 수축, DNA 광범위한 분해 및 단편화, 세포의 전면적 수축, 세포 소기관을 덮는 세포막 및 외부 돌출부의 수축(예: 미토콘드리아 및 리보솜) 및 특징적인 핵 형성과 같은 독특한 형태학적 및 생물학적 특성을 가지고 있습니다. fragments Apoptotic body, apoptotic cell은 완전한 세포막 구조와 기능을 유지할 뿐만 아니라 세포 괴사와 다른 완전한 세포 소기관 구조를 가지고 있습니다.
세포 사멸의 분자적 메커니즘은 지금까지 완전히 밝혀지지 않았다. 연구[7]는 세포 사멸의 유전자 조절에 관여하는 많은 유전자가 있음을 보여주었다.
Apoptosis는 BPH의 과정이며 현재 더 많은 관심을 끌고 있습니다. 이는 유전자 코딩에 의해 결정되며 세포가 특정 신호에 반응하여 세포 사멸을 제어할 수 있도록 합니다[1]. 전립선이 성체 크기로 발달한 후에는 세포자멸사 비율의 균형을 통해 전립선 세포의 증식률이 1~2%로 유지됩니다. 이 균형의 파괴는 항상 BPH의 원인으로 간주되어 왔습니다[8]. 정상적인 조건에서 에스트로겐과 안드로겐의 수치와 전립선의 규칙적인 순환은 증식과 세포사멸의 과정에서 존재하는 일종의 자기 균형 상태입니다. 증식과 세포 사멸의 균형이 맞지 않으면 주로 상피 세포 구획의 확장으로 인해 땀샘이 성장하고 더 확장됩니다 [9]. 이 균형의 중단은 안드로겐 수준 또는 기능의 변화로 인한 것일 수 있습니다. 또한 DHT의 AR 자극 또는 DHT 매개 성장 인자 수준의 변화에 의해 생성된 반응 때문일 수도 있습니다[2]. 이 연구에서 FCM은 세포 사멸을 감지하고 고용량의 악테오사이드를 투여한 쥐에서 전립선 세포의 사멸 비율이 유의하게 증가한다는 것을 발견했습니다. 전자현미경 검사 결과 모델군의 전립선 세포의 핵이 변형되었고 거친 소포체가 낭종 모양으로 크게 팽창되어 있었으며 낭종은 고밀도 단백질 입자로 채워져 공포가 관찰되었다. 미토콘드리아는 약간 부어 있었고 관련 연구[ 10-11 ] 보고서는 일관적입니다.
Acteoside 중재 후 쥐의 전립선 비대증 정도가 더 낮았습니다. 고용량 그룹은 또한 apoptosis의 초기 징후를 보였습니다. 전립선 세포의 핵은 손상되지 않고 소포체 액포가 유의하게 낮았습니다. 핵의 응축, 증가된 핵 밀도, 이질염색질의 축적, 거세 후 쥐의 전립선 조직 세포 특성과 유사 [12-13]. 그것은 acteoside에서시스탄체전립선 비대증이 있는 쥐에서 세포 사멸을 유도하고 전립선 세포 사멸과 증식의 균형을 조절 및 회복하며 전립선 세포 증식을 억제하는 역할을 합니다. 본 연구와 선행연구[14]의 결과는 의 화학성분인 acteoside의 억제효과를 나타내고 있다[14].시스탄체 튜불로사, 전립선 비대증은 세포 사멸 촉진, AR 감소 및 TGF-UR1 과발현과 관련이 있을 수 있습니다. 자세한 작용 메커니즘은 아직 더 연구해야 합니다.
Cistanche 혜택: 면역력 향상
참조:
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