Theaflavin에 의해 조절되는 Imd 응축물은 Drosophila 장의 항상성과 노화를 조절합니다

연락주세요oscar.xiao@wecistanche.com자세한 내용은

요약

홍차는 세계에서 가장 널리 소비되는 차 음료이며 지속적으로 노화 방지 효과가 있는 것으로 보고되었습니다. 그러나 홍차 추출물의 특징적인 파이토케미컬 중 하나인 아플라빈이 소비자의 노화 및 수명 조절에 관여하는지 여부는 크게 알려지지 않았습니다. 이 연구에서 우리는 아플라빈이 노화에 따른 장 누출 및 세균 불균형을 예방하는 데 유익한 역할을 하여 초파리의 노화를 지연시킨다는 것을 보여줍니다. 기계적으로, 아플라빈은 초파리 내장에서 Imd 신호의 과활성화를 부정적으로 제어하기 위해 Imd의 응축물 집합을 조절합니다. 또한, 아플라빈은 생쥐에서 DSS로 인한 대장염을 예방하여 아플라빈이 장의 완전성을 조절하는 역할을 함을 시사합니다. 전반적으로, 우리의 연구는 아플라빈이 Imd 유착을 제어함으로써 장의 항상성을 조절하는 분자 메커니즘을 보여줍니다.

자세한 내용을 보려면 여기를 클릭하십시오.

소개

개별 장기 시스템의 생리적 기능 감소와 질병 및 사망 위험 증가를 특징으로 하는 노화는 분자, 세포 및 조직에 대한 손상의 축적을 수반합니다(Alavez et al., 2011; Bartke et al., 2019; Engeet 알., 2017). 노화 과정을 지연시키고 수명을 연장하기 위해 생물학적 열화를 방지하는 기능성 물질 또는 화학 물질의 식별은 의심할 여지 없이 중추적입니다(Bar-ardo et al., 2017; Kapahi et al., 2017). 이전 연구에서는 세계에서 가장 널리 소비되는 차인 홍차가 노화를 지연시키는 상당한 활성을 가지고 있다고 보고했습니다(Cameron et al., 2008; Fei et al., 2017; Kumar and Rizvi, 2017; Naumovski et al., 2019 , Peng et al., 2009, Xiao et al., 2020). 홍차 추출물을 이용한 식이 보충제는 벌레(Feet al., 2017), 초파리(Peng et al., 2009; Site al., 2011), 생쥐(Site al., 2011)와 같은 실험 동물의 수명을 효율적으로 연장합니다. ; Xiao et al., 2020) 및 쥐(Kumar and Rizvi, 2017).

홍차 추출물은 주로 카테킨과 테아플라빈(TF)의 두 종류의 식물성 화학물질을 함유하고 있는 것으로 잘 알려져 있습니다(Cameron et al., 2008; Kondo et al., 2019; Li et al., 2013). 카테킨은 홍차 생산의 산화 과정에서 내인성 폴리페놀 산화효소와 과산화효소에 의해 생성됩니다(Li et al., 2013). 일련의 연구에서 산화 스트레스 및 노화 관련 염증 개선 및 조직 손상 감소를 통한 카테킨의 노화 방지 역할을 확인했습니다(Cameron et al., 2008; Niu et al., 2013; Peng et al., 2009; Si et al., .2011, Waaner et al., 2015). 그러나 노화에 대한 TF의 기여도에 대한 기능적 연구는 카테킨에 대한 연구보다 크게 뒤쳐져 있는데, 그 이유는 의학 연구를 위해 홍차 잎에서 충분한 양의 TF를 추출하기 어렵기 때문입니다(Takemoto and Takemoto, 2018). 최근 TF의 대량 생산을 위한 몇 가지 생합성 방법이 개발되어(Takemoto and Takemoto, 2018), TF의 정확한 생물학적 효과와 기본 조절 메커니즘을 탐색할 수 있게 되었습니다.

최근에 증가하는 데이터 세트가 노화 및 수명 조절에서 장의 중추적인 역할을 강조하고 있습니다(Guo et al., 2014; Jji et al., 2019; Maynard 및 Weinkove, 2018; Rothenberg 및 Zhang, 2019; Salazar et al. ,2018). 선택적 장벽 역할을 하는 장 상피는 영양소, 이온 및 물의 흡수를 허용하고 미생물, 식이 항원 및 환경 독소를 포함한 유해 물질과의 숙주 접촉을 제한합니다(Capo et al., 2019; Nicholson et al. , 2012; Ryu et al., 2010). 개인의 회전율이 높은 조직으로서 장관은 자연적인 혐기성 조건, 풍부한 영양소, 적절한 온도 및 pH를 포함하여 공생 미생물에게 최상의 생활 환경을 제공합니다.

그림 1. 테아플라빈은 초파리의 수명을 연장하고 등반 능력을 향상시킵니다.

(A 및 B) 암컷 초파리는 1 mg/ml 또는 2.5 mg/mL 테아플라빈(TF)이 보충되거나 기본으로 TF가 없는 표준 식품으로 배양되었습니다. 파리는 격일로 새로운 배지가 들어 있는 신선한 바이알로 옮겨졌고, 죽은 파리는 성체 수명 전반에 걸쳐 점수를 매겼으며, 암컷 파리의 생존 곡선(A) 및 평균 수명(B)을 분석하고 표시했습니다.

(Cand D) 암컷 w18에게 표준 Drosophila 식품(Basal이라고 함) 또는 각각 1mg/ml 또는 2.5mg/ETF가 보충된 식품을 먹였습니다. 표시된 연령(각각 10일, 30일, 40일 및 50일)의 6개의 독립적인 파리 그룹에 카페(C) 및 플루오레세인 공급(D) 분석을 실시했습니다. 값, 신체의 특정 박테리아 종에 의해 점유되는 틈새를 형성합니다(Bonfini et al., 2016; Buchon et al., 2013; Nicholson et al., 2012). 한편, 이러한 공생 미생물과 그 대사 산물은 영양 처리에 직간접적으로 영향을 미칩니다. 소화 및 흡수; 에너지 균형; 면역 기능; 위장 발달 및 성숙; 및 기타 많은 중요한 생리 활성(Bonfini et al., 2016; Broderick, 2016; Maynard 및 VVeinkove, 2018; Nicholson et al., 2012). 두 공생체 사이의 상호 유익한 관계는 장내 미세 생태계의 안정성과 동적 균형을 유지할 수 있습니다(Bonfini et al., 2016; Brodeerick, 2016; Broderick et al., 2014; Guo et., 2014; May-nard 및 Weinkove, 2018, Nicholson et al., 2012).

cistanche 캔 노화 방지

일련의 연구에 따르면 선천성 면역 반응은 장내 미생물의 항상성을 유지하는 데 중요하며 무척추 동물에서 척추 동물에 이르기까지 보존됩니다(Guillouet al., 2016; Guo et al., 2014; Ryu et al., 2006, 2010; Vijay- Kumar et al., 2010). 초파리에서 두 가지 주요 신호 경로, 즉 Toll 및 면역 결핍(Imd) 경로가 선천 면역 반응에 관여합니다(Lu et al., 2020; Myllymakiet al.,2014; Valanne et al.,2011). 특히, Drosophila Toll 경로는 포유류의 인터루킨{9}} 수용체(IL{10}}R) 및 MyD{11}}의존성 Toll-like 수용체(TLR) 경로와 유사하지만 Imd 경로는 유사합니다. 포유류의 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 경로 및 TRIF 의존성 TLR 경로에 대한 것입니다(Imler, 2014; Myllymaki et al., 2014; Valanne et al., 2011). 이 두 경로는 NF-KB 전사 인자의 활성화를 통해 항균 펩타이드(AMP)의 발현을 조절합니다(Imler, 2014; Myllymaki et al., 2014; Valanne et al., 2011).바이오플라보노이드Imd 신호 전달 경로는 일반적으로 그람 음성 박테리아 감염에 의해 활성화되며 Attacin, Cecropin 및 Diptericin과 같은 다른 AMP 세트의 발현을 초래합니다(Kleino and Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014). 이러한 AMP의 발현은 Imd 경로의 펩티도글리칸 인식 단백질(PGRP)-LC 수용체와 NF-kB 계열 전사 인자인 Relish의 신호 의존적 절단 및 핵 전위를 필요로 합니다(Kleino and Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014). 최근 연구에 따르면 박테리아 펩티도글리칸의 인식 시 Drosophila Imd 경로의 활성화에 아밀로이드 형성이 필요하다는 것이 밝혀졌습니다(Kleino et al., 2017). 그러나 이 Imd 응축물이 장의 항상성 유지 및 노화 조절과 같은 다른 생물학적 과정에 관여하는지 여부는 크게 알려지지 않았습니다.

현재 연구에서 우리는 장의 완전성과 노화를 제어하는 ​​TF의 역할을 조사하기 위해 초파리와 생쥐를 동물 모델로 활용했습니다. 우리는 TF가 장 줄기 세포의 노화 발병 과잉 증식을 지연시키고, 장내 미생물군유전체의 dysbiosis를 방지하고, Imd 신호 전달 경로의 활성화를 방지하여 초파리의 수명을 연장한다는 것을 보여주었습니다. 추가 기계 연구에 따르면 TF가 Imd 신호 전달에 부정적으로 기여하는 것은 유비퀴틴화보다는 Imd의 응축을 차단하는 것일 수 있습니다. 또한, 우리는 TF가 마우스에서 DSS 유발 대장염을 예방하는 데 매우 효과적이라는 것을 발견했습니다. 종합하면, 우리의 연구 결과는 장의 항상성과 수명 연장에 대한 긍정적인 기여의 핵심 요소가 될 수 있는 Imd 행동을 조절하는 TF의 잠재적인 역할을 보여줍니다.

결과

아플라빈의 식이 보충제는 초파리의 수명을 연장합니다

아플라빈(TF)이 Drosophila의 노화와 수명에 영향을 미치는지 여부를 조사하기 위해 우리는 1mg/mL 또는 2.5mg/ml TF가 보충된 표준 사육 식품으로 암컷 w'118 파리를 키웠고 이전에 설명한 대로 수명 분석을 수행했습니다(Ji et al. .,2019). 동일한 부피의 TF 용매(H2O)가 보충된 사료를 먹인 파리를 대조군으로 간주했습니다. 그림 1A에서 볼 수 있듯이 상대적으로 낮은 농도의 TF(1mg/mL)를 식이에 첨가하면 초파리 수명이 약간 연장되었으며 고농도의 TF(2.5mg/mL)는 수명 연장에 상당히 긍정적인 영향을 미쳤습니다. 특히, 고농도의 TF(2.5 mg/mL)를 장기간 섭취하면 암컷 파리의 평균 수명이 약 8일 증가하여(그림 1B), 초파리의 수명을 조절하는 데 TFsin의 유익한 역할을 시사합니다. 수컷 w'*'''8 파리의 수명에 대한 추가 TF의 잠재적 효과를 테스트했을 때 유사한 결과가 얻어졌습니다(그림 S1A 및 S1B).

그림 2. Theaflavins는 Drosophila에서 노화에 따른 장 기능 장애 및 미생물총의 dysbiosis를 예방합니다.

(A 및 B) 18세 여성 성인의 10일, 30일, 40일 및 50일에 Smurftest에 의해 장 완전성 상실을 분석했습니다. 비 스머프 및 스머프의 예는 (A)에 나와 있습니다. 다른 표시된 그룹에서 Smurf의 백분율을 분석하고 (B)에 표시했습니다.

(C) 다른 표시된 그룹의 여성 w18 파일에서 16S rRNA 유전자의 qPCR에 의해 저장되는 세균량을 분석하고 표시했습니다.

(DF) 공생 박테리아 16S rRNA 유전자의 시퀀싱을 수행했습니다. 박테리아 분류군(D)의 비율, 주요 미생물 분류군(F)의 히트맵 및 감마프로테오박테리아(F)의 상대적 존재비를 분석하고 제시하였다.

그림 2. 계속

(G 및 H) 내장은 10일 및 40일령에 대조군으로서 2.5 mg/ml TF를 먹거나 TF가 없는 표시된 암컷 파리에서 해부되었습니다. 중장 슬라이드의 이미지는 GFP 신호(G)에 대한 형광 현미경으로 캡처되었습니다. GFP 양성 세포의 비율을 보여주는 통계 분석은 (H)에 표시됩니다.

(I) 표시된 암컷 파리의 내장을 수집하고 인산화된 히스톤 3(pH3)에 대한 항체를 사용하는 면역염색 분석을 수행했습니다. 내장당 pH{2}}양성 세포를 정량화하는 통계적 결과를 분석하고 표시했습니다. B, C, H 및, 데이터는 양측 스튜던트 테스트에 의해 분석되며 평균 ± SEM.NS로 표시되며 유의하지 않음,*p<><0.001. see="" also="" figure="">

ETF는 쓴맛이 나는 것으로 알려져 있으며 초파리와 포유류를 포함한 두 소비자 모두 쓴 음식을 피합니다(Yamazaki et al., 2014; Yang et al., 2018). 그런 다음 이전 연구에서 식이 제한이 척추동물과 무척추동물 모두에서 수명 연장으로 이어진다는 것이 입증되었기 때문에 TF가 초파리 음식 섭취에 영향을 미칠 수 있는지 여부를 설명하려고 했습니다(Hudry et al., 2019; Kapahi et al., 2017; Moger-Reischer et al. ., 2020). 이를 위해 앞서 설명한 것처럼 액체 배지를 포함하는 모세관 피더를 사용하여 직접적이고 정확하게 섭식 속도를 측정하는 널리 사용되는 접근 방식인 카페 분석을 먼저 수행했습니다(Ja et al., 2007). 그림 1C 및 S1C에서 볼 수 있듯이 TF(각각 1mg/mL 및 2.5mg/mL)의 식이 보충제는 테스트된 파리의 음식 소비를 거의 변경하지 않았습니다. 이를 추가로 확인하기 위해 Fluorescein을 식품 추적자로 활용하고(Rera et al., 2012; Wang et al., 2005) 자연 섭식 분석(Danilov et al., 2015)을 수행했습니다. 그림 1D와 S1D에서 볼 수 있듯이, 우리는 TF 보충과 음식 섭취 수준 사이의 상관 관계를 관찰하지 못했습니다. 종합하면, 우리의 결과는 수명 연장에서 TF의 유익한 역할이 초파리의 식이 제한으로 인한 것이 아닐 수 있음을 시사했습니다.

추가 TF는 초파리 에너지 항상성에 영향을 미치기 위해 필요합니다.

홍차 폴리페놀은 지질과 당류의 소화, 흡수, 섭취를 억제하여 칼로리 섭취를 줄여 비만 예방에 긍정적인 효과가 있다고 제안되어 왔다(Cameron et al., 2008). 그런 다음 우리는 TF로 조절되는 LDrosophila 수명 연장이 영양소 흡수 및 에너지 저장의 변경으로 인한 것인지 여부를 설명하려고 했습니다. 이를 위해 먼저 이전에 설명한 대로 암컷 파리에서 가장 일반적으로 검출되는 지질 대사산물 중 하나인 트리아실글리세리드(TAG)의 수준을 조사했습니다(Tennessen et al., 2014).시스탄체를 사다그림 1E에 표시된 바와 같이, TF의 처리는 다양한 연령 지점에서 전체 TAG 존재비에 거의 영향을 미치지 않았습니다. 헥소키나제 키트(Li et al., 2018; Ten-nessen et al., 2014)로 글리코겐 함량을 추가로 검출하고 순환 탄수화물(포도당 및 트레할로스)을 정량화했을 때, 결과는 샘플 간에 명백한 변경이 없음을 보여주었습니다. TF 처리 없음(그림 1F-1H). 참고로, 수컷 w118을 동물 모델로 사용하여 대사 표현형을 조사했을 때 일관된 결과를 얻었습니다(그림 S1E-S1H). 종합적으로, 이러한 데이터는 초파리의 수명 전반에 걸쳐 탄수화물 및 에너지 항상성의 조절을 위해 TF의 식이 보충제가 필수적임을 시사했습니다.

우리는 이전에 설명한 대로 RING(Rapid Iterative Negative Geotaxis) 테스트를 수행하여 식이 TF 개입 하에서 Drosophila의 자연 노화 동역학을 추가로 조사했습니다(Dilliane et al., 2017; Staats et al., 2018). 그림 1l, 1J, S1l 및 S1J에서 볼 수 있듯이, TF 보충 그룹에서 연령(40일) w1118(여성 및 남성 모두)의 등반 지수가 현저히 개선되었습니다(여성에서 거의 12% 증가, 남성에서 거의 18% 증가 ) 대조군과 비교하여 TF가 Drosophila 등반 및 운동 활동을 잠재적으로 향상시킬 수 있음을 시사합니다.

aflavins는 노화에 따른 장누수 및 미생물총의 불균형을 예방합니다.

이전 연구에서는 초파리의 운동 활동과 수명이 성별, 식단, 나이, 유전자형과 같은 숙주의 건강 상태와 밀접한 관련이 있음을 보여주었습니다(Caruso et al., 2013; Heintz and Mair, 2014). 최근에, 장의 Imd 신호 항상성을 보존하는 것이 ISC 및 전구 세포의 과증식을 방지하고 노화에 따른 장 상피 기능 장애를 지연시켜 장 무결성을 개선하여 결국 유기체 건강에 긍정적으로 기여한다는 여러 증거가 입증되었습니다(Clark et al. , 2015; Guo et al., 2014). Drosophila에서 수명 단축은 장 상피 장벽의 기능 장애와 밀접한 관련이 있으며 노화 동안 이 장벽의 완전성이 발달하면 수명이 연장됩니다(Clark et al., 2015; Guoet al., 2014; Jet al., 2019). 따라서 우리는 이전에 설명한 방법인 Smurf 분석을 수행하여 TF가 장의 무결성을 변경하는지 여부를 확인하려고 했습니다(Clark et al., 2015; Rera et al., 2011). 도 2A에 도시된 바와 같이, 청색 염료가 소화관에 제한된 시험된 초파리를 비 스머프(도 2A의 좌측 패널)로 지칭하였다. 파란색 염료가 관찰되는 경우

그림 3. 계속

(EG) 내장은 각각 10일, 30일, 40일 및 50일령에 2.5 mg/ml TF가 공급되거나 TF가 없는 암컷 w1118 파일에서 분리되었습니다. 총 RNA를 추출하고 RT-PCR 분석을 수행했습니다. diptericin(F), attacin(F), cecropin A1(G)의 mRNA 발현 수준을 분석하여 나타내었다. EG에서 데이터는 양측 스튜던트 t-검정으로 분석되고 평균 ± SEM.NS로 표시되며 유의하지 않음, *p<><><0.001. see="" also="" figure="">

내장에서 복부로 누출된 호스트는 Smurf로 계산되었습니다(그림 2A의 오른쪽 패널). 이전 연구 결과와 일관되게(Clark et al.,2{23}}15), Smurf의 비율은 노화 동안 점진적으로 증가했습니다(그림 2B). 흥미롭게도, 스머프 성인의 비율은 두 여성 모두에서 같은 연령 대조군에 비해 TF 섭취 그룹에서 크게 감소했습니다(그룹의 경우 8.2%에서 3.7%, 19.4%에서 15.6%, 35.4%에서 27.1%). 각각 3일, 40일 및 50일, 그림 2B) 및 남성 성인(30세에서 2.7%에서 0.9%, 6.9%에서 0.9%, 8.3%에서 2.7%) 일, 40일 및 50일, 각각 그림 S2A), 이는 TF가 노화된 초파리에서 장 장벽 기능 장애를 예방할 수 있음을 나타냅니다. 참고로 우리는 남성의 스머프 비율이 연령보다 더 크게 감소하는 것을 관찰했습니다(30일, 40일 및 50일령에서 각각 거의 65.8%, 86.9% 및 67.4% 감소). - 짝을 이루는 암컷(30일, 40일 및 50일령에서 각각 거의 54.1%, 19.5% 및 23.3% 감소)은 TF가 수컷 파리의 장 누출을 낮추는 데 더 나은 역할을 할 수 있음을 암시합니다.

이전 연구에서는 노화에 따른 장 장벽 기능 장애가 종종 장내 미생물의 장내 세균 불균형과 관련이 있다고 제안했습니다(Clark et al., 2015; Guo et al., 2014). 따라서 우리는 TF 보충 후 장내 공생 박테리아 구성을 조사했습니다. 우리는 먼저 범용 프라이머를 활용하고 세균 16S rRNA 유전자 수준을 정량화하기 위해 정량적 PCR 실험을 수행했습니다. 그림 2C에서 볼 수 있듯이, 노화 컷에서 TF 개입 그룹의 총 박테리아 개체군은 대조군과 비교하여 현저한 감소(거의 45% -55%)를 보여 TF 보충이 노화 동안 미생물총 확장을 예방할 수 있음을 시사합니다 . 그런 다음, 우리는 TF의식이 보충으로 인한 장내 미생물 군집의 변화를 자세히 조사하기 위해 metagenomics를 수행했습니다. 그림 2D-2F에서 볼 수 있듯이, 감마프로테오박테리아(Gammaproteobacteria)의 비율은 확장이 장 장벽 부전과 밀접한 관련이 있는 것으로 밝혀졌으며(Clark et al., 2015), 노화된 장에서 TF 보충에 의해 분명히 감소했습니다( 거의 7% 감소), 이는 TF가 초파리의 노화 동안 장내 미생물의 항상성에 긍정적으로 기여함을 의미합니다.

Aflavins는 Drosophila의 장 증식 항상성을 향상시킵니다.

We further examined the intestinal integrity of flies that were treated with or without TFs. First, we employed the widely-used P{Esg-Gal4}/P{Uasp-GFP};{Tub-Gal80*s}strain(referred to as esgts>GFP), 장 줄기 세포(ISC) 및 전구 세포는 GFP로 표지되었다. 도 2G 및 2H에 도시된 바와 같이, 40일령(20개의 내장이 계산됨)에 TF 개입 그룹의 GFP-양성 세포의 수는 연령 일치 대조군(거의 47.6% 및 19개의 내장이 계산됨), 이는 TF가 ISC의 연령 발병 과잉 증식을 억제할 수 있음을 시사합니다. 또한, 우리는 장 조직의 유사분열 세포에 대한 특정 마커인 Phospho-Histone 3(pH3)에 대한 항체를 사용하여 면역염색 실험을 수행했습니다. 우리는 대조군(평균 수는 39.5, 그림 2)보다 노화된 TF가 보충된 성인(평균 수는 20.6)의 장에서 더 적은 수의 pH 양성 세포를 관찰했습니다. 종합하면, 우리의 결과는 TF를 사용한 식이 보충제가 장 증식성 항상성을 개선하고 노화에 따른 미생물총 이형성을 예방하여 초파리의 노화를 지연시킨다는 것을 시사합니다.

아플라빈은 장의 Imd 신호를 부정적으로 조절합니다

TF가 Drosophila 장 항상성에 긍정적으로 기여하는 기본 분자 메커니즘을 탐구하기 위해 TF의 유무에 관계없이 여성 w1118 성인의 연령 일치 장 샘플을 사용하여 RNA-seq 분석을 수행했습니다. FPKM(kilobase per million) 분석은 전체 유전자 발현 패턴이 두 실험 그룹 간에 유사함을 시사했습니다(그림 3A). 그러나 추가 차등 발현 분석은 총 229개의 차등적으로 발현된 유전자를 확인했으며, 그 중 99개가 상향 조절되고 126개가 하향 조절되었습니다(그림 3B). 흥미롭게도, 이러한 유전자의 유전자 온톨로지 분석은 면역 반응 경로가 TF를 통한 식이 보충에 의해 크게 변경되었음을 보여주었습니다(그림 3C).

Drosophila에서 타고난 면역 신호 전달 경로는 연령 발병 장의 항상성과 수명을 조절하는 데 지배적인 역할을 하는 것으로 입증되었습니다(Clark et al, 2015; Guo et al, 2014). 그런 다음 우리는 타고난 면역 신호의 다운스트림에 있는 항균 펩타이드(AMP)의 발현 패턴을 조사하는 데 집중했습니다. 보여진 바와 같이

그림 4. 계속

(D) 정제된 Imd 단백질을 실온에서 5분 동안 다양한 농도의 TF(각각 50uM, 100uM 및 200uM)와 함께 인큐베이션했습니다. 그런 다음 샘플을 표시된 파장(430 nm에서 여기, 5 nm의 슬릿 폭으로 450 nm에서 550 nm로 방출)을 사용하여 형광 방출 스펙트럼 분석을 수행했습니다. TF가 없는 샘플을 기준선 대조군으로 사용했습니다.

（E and F）Lysates of guts from NP11>Myc-Imd 파리를 준비하고 실온에서 30분 동안 TF(100μM)와 함께 배양했습니다. SDD-AGE(E의 상단 패널) 및 SDS-PAGE(E의 하단 패널) 분석을 수행하여 Imd 단백질 응집체를 분석했습니다. 튜불린을 로딩 컨트롤로 사용했습니다.시스탕농도계 분석은 서로 다른 샘플에서 Imd 응축물을 정량화하기 위해 수행되었으며 그 결과는 (F)에 표시되었습니다. (G) TF 샘플의 대표적인 크로마토그램.

(H 및 I) 정제된 Flag-Imd 단백질은 표시된 대로 실온에서 TF, TF1, TF2a, TF2b 또는 TF3(각 샘플에 대해 100μM) 또는 동일한 부피의 완충액(대조군)과 함께 인큐베이션했습니다. 그런 다음 샘플을 SDD-AGE(H의 상단 패널) 및 SDS-PAGE(H의 하단 패널) 분석에 적용하여 Imd의 응집 패턴을 결정했습니다. 다른 샘플에서 Imd 응축물을 정량화하기 위한 농도계 분석을 수행하고 ()에 표시했습니다. C, F 및 I에서 데이터는 양측 스튜던트 테스트로 분석되고 평균 ± SEM으로 표시됩니다.***p< 0.001.="" see="" also="" figure="">

그림 3D에서 딥테리신 A(DptA), 딥테리신 B(DptB), 아타신 A(AttA), 세크로핀 A1(CecA1), 세크로핀 A2(CecA2)를 포함한 면역 결핍(Imd) 경로에 의해 지배되는 AMP 유전자, cecropin C(Cece)는 대조군과 비교하여 TF 처리군에서 유의하게 감소했습니다(각각 39.4%, 72.3%, 10.5%,{12}}.5%, 99.8% 및 36.1%). RNA-seq 분석에서 얻은 결과를 추가로 확인하기 위해 정량적 역전사 중합효소 연쇄 반응(gRT-PCR)을 수행하여 4개의 다른 연령 지점에서 얻은 Drosophila 장 샘플에서 Imd 관련 AMP 유전자의 상대적 발현 수준을 정량화했습니다. 10일, 30일, 40일, 50일을 포함합니다. 그림 3E-3G에서 볼 수 있듯이 딥테리신, 아타신, 세크로핀 A1을 포함한 특정 유전자의 mRNA 발현 수준은 TF 처리군에서 유의하게 감소했습니다(거의 35.9% -66.6%). 나이 든 배짱. 종합적으로, 우리의 데이터는 TF가 노화 동안 Drosophila 장 세포에서 Imd 신호 전달 경로의 활성화를 잠재적으로 길항하는 것으로 나타났습니다.

아플라빈은 Imd 경로의 전사 조절 또는 Imd의 유비퀴틴화에 필수적입니다.

우리는 TF와 Imd 사이의 연관성을 조사하고 이전에 설명한 대로 표면 플라즈몬 공명(SPR) 분석을 수행했습니다(Lan et al., 2020). 그림 4A와 같이. TF는 8.078uM의 추정된 Kp 상수에서 정제된 Imd 단백질과 적당한 결합 친화도를 나타냈다. 그런 다음 우리는 TF가 장내 Imd 신호 전달 경로를 제어하는 ​​방법을 결정하는 경향이 있습니다. RNA-seq 데이터의 transcriptome 분석 결과를 기반으로 PGRP-LC, Imd 및 Relish와 같은 Imd 신호 전달 경로의 주요 조절 인자의 발현 수준이 TF 처리에 의해 거의 변경되지 않음을 발견했습니다(그림 S3A ). 우리는 다양한 연령대에서 TF의 유무에 관계없이식이 보충을받은 파리에서 내장 샘플을 추가로 수집하고 qRT-PCR 실험을 수행하여 이러한 유전자의 발현 패턴을 구체적으로 감지했습니다. 그림 S3B에서 볼 수 있듯이 effete, faded, tak1, pgrp-Ica, uev1a, bendless, relish, imd, pgrp-sc2, tab2, ird5 Kenny 및 diap2를 포함한 특정 유전자의 mRNA 수준은 대조군 간에 유사했습니다. 및 TF 개입 그룹은 TF가 전사 수준에서 Imd 신호를 조절하는 데 관여하지 않음을 시사합니다.

다음으로, 이전 연구에서 Imd의 유비퀴틴화가 Imd 경로에서 다운스트림 신호 전달에 필수적임을 시사했기 때문에 우리는 Imd 유비퀴틴화 프로파일을 조사했습니다(Myllymaki et al., 2014; Zhou et al., 2005). 우리는 먼저 시험관 내 E1 ​​이동 분석을 수행했으며 TF로 처리하면 E1과 유비퀴틴의 효소 반응에 영향을 주어 접합된 E1/Ub를 형성하지 않는다는 것을 발견했습니다(그림 S4A). 또한, 우리는 HA 태그가 지정된 Ub와 함께 플래그 태그가 지정된 Imd를 발현하는 플라스미드로 초파리 S2 세포를 형질감염시킨 다음 TF의 유무에 관계없이 세포를 처리했습니다. 추가 유비퀴틴화 분석은 TF 보충이 배양된 세포에서 유비퀴틴화된 Imd 수준에 거의 영향을 미치지 않음을 시사했습니다(그림 S4B 및 S4C). 생체 내에서 TF와 Imd 유비퀴틴화 사이의 관계를 확인하기 위해 형질전환 파리 P {NP{12}}Gal4}/P{Uasp-Myc-Imd};P{Tub-Gal80*}(NP1* s > Myc-Imd), 여기서 Myc-tagged Imd 단백질은 장 세포에서 높게 발현되었습니다(그림 S4D). 우리의 유비퀴틴화 실험은 TF를 사용한 식이 보충제가 장 조직에서 Imd의 유비퀴틴화를 조절하는 데 필수적임을 보여주었습니다(그림 S4D 및 S4E). 종합하면, 우리의 결과는 TF가 Imd의 유비퀴틴화 패턴에 영향을 미치지 않음으로써 Drosophila Imd 신호를 부정적으로 지배함을 나타냅니다.

아플라빈은 Imd 응축수 조립을 방지합니다.

최근 연구에서는 Imd 경로에서 다운스트림 유전자의 활성화에 Imd의 응집이 필수적임을 시사했습니다(Kleino et al., 2017). 그런 다음 TF가 프로세스를 규제하는지 여부를 조사했습니다.

그림 5. 계속

(F 및 G) 암컷 w18(imd plus / plus 라고 함), imd' 이형접합 및 동형접합 돌연변이체(각각 imd plus /- 및 imd-/-라고 함)를 표준 초파리 식품(Basal이라고 함)을 사육했습니다. 또는 2.5 mg/mL(TFs라고 함)로 식이 보충제를 섭취한 다음 수명 분석을 수행했습니다. 생존 곡선(F) 및 평균 수명(G)을 분석하고 표시했습니다.

및 F에서는 통계적 분석을 위해 Log Rank 검정을 사용하였다. BE, 및, 통계 분석을 위해 양측 스튜던트 t-검정이 사용되었으며 데이터는 평균 ± SEM으로 sh입니다. NS, 중요하지 않음, *p<0.05, **p="" <="" 0.01,=""><0.001. see="" also="" figure="">

Imd 집계 형성. 먼저, 배양된 S2 세포에서 Myc 태그가 붙은 Imd 단백질을 정제하고 단백질을 다양한 농도의 TF로 배양했습니다(그림 4B). 흥미롭게도, 우리는 반변성 세제 아가로스 겔 전기영동(SDD-AGE) 분석에서 제안된 바와 같이 TF가 Imd의 응집을 현저하게 방지한다는 것을 발견했습니다(81.7% -89.7% 감소, 그림 4B 및 4C). 이 발견을 확인하기 위해 thioflavin-T 결합 분석을 추가로 수행하여 일관된 결과를 얻었습니다(그림 4D). 마지막으로, 우리는 TF의 유무에 관계없이식이 보충을받은 NP1t> Myc-Imd 형질 전환 파리를 키웠고 노인의 장 샘플을 수집했습니다. SDD-AGE 실험은 Imd의 응집이 장 세포의 TF에 의해 크게 하향조절되었음을 시사했습니다(16.7% -22% 감소, 도 4E 및 4F).

TF가 Imd 응축물 어셈블리를 제어하는 ​​데 어떻게 기여하는지 확인하기 위해 TF를 HPLC 분석에 적용한 결과 TF가 주로 4가지 종류의 단량체(그림 4G), 즉 theaflavin(TF1), theaflavin 3-O-gallate( TF2a), 테아플라빈 3'-O-갈레이트(TF2b) 및 테아플라빈 3,3'-디-O-갈레이트(TF3)는 이전 보고서(Li et al., 2013; Takemoto 및 Takemoto, 2018)와 일치했습니다. . 그런 다음 이러한 각 화학 물질을 정제된 Imdprotein과 함께 배양하고 SDD-AGE 실험을 수행했습니다. 도 4h 및 4l에 나타낸 바와 같이, 이들 모든 TF단량체의 처리는 현저한 감소를 초래하였다(TF, TF1, TF2a, TF2b 및 TF3에 대해 각각 59.5%, 60.9%, 58.4%, 58.2% 및 55.8%). Imd 집계 수준. 종합적으로, 우리의 결과는 TF가 아마도 Imd 응축물의 거동을 제어함으로써 Drosophila Imd 신호 전달 경로를 부정적으로 조절한다고 제안했습니다.

IMD 의존적 방식으로 초파리 수명을 연장하는 아플라빈

To examine whether TFs prolong Drosophila lifespan depending on their regulatory role in Imd, we specifically knocked down Imd in gut tissues using the transgenic flies P{NP1-gal4)PITub-gal80*}/P{Uasp-imd-IR(KK)} (referred to as Imd RNAi). As shown in Figures 5A and 5B, dietary supplementation of TFs extended the lifespan of controls (elevation of nearly 7.2 days in the mean lifespan), whereas prevention of Imd expression in guts apparently reversed the lifespan extension caused by TFs. Consistent results were obtained when we utilized male Imd RNAi and control flies to perform lifespan assays (Figures S5A and S5B). Further qRT-PCR assays showed that the mRNA expression levels of AMP genes at ages of 10 days, 30 days, 40 days, and 50 days, including diptericin, attacin, and cecropin A1.hardly changed in the gut tissues of Imd RNAi flies(Figures 5C-5E), whereas additional TFs caused reductions of 31%-72.3% in mRNA abundances of these genes in samples from control groups. To confirm these results from Imd RNAi flies, we first performed lifespan assays using w18(control, referred to as imd+/+), imd' heterozygous (referred to as imd+/-), and homozygous(referred as imd-/-)mutant flies. We found that TFs addition extended lifespan and increased mean life longevity of imd+/-flies (elevation of nearly 6.2 days, Figures 5F and 5G). However, this lifespan extension effect by TFs was almost abolished in imd-/-flies (Figures 5F and 5G). Next, we performed lifespan assays utilizing Relish RNAi(NP1's>Relish RNAi and control(NP1ts>플러스) 파리. Relish는 Imd-downstream AMP 유전자 발현을 담당하는 주요 전사 인자이기 때문입니다(Myllymaki et al., 2014). Fiqures S5C 및 S5D에 표시된 대로. TF의 식이 추가는 대조군 파리의 수명을 현저하게 연장시켰고, 이러한 수명 연장은 Relish RNAi 파리에서 상당히 방지되었습니다. 종합적으로, 우리의 데이터는 TF의식이 보충이 장 Imd 신호에 따라 초파리 수명에 긍정적으로 기여한다는 것을 나타냅니다.

TFstill에 의한 수명 연장이 무균 배경에서 발생하는지 확인하기 위해 무균 조건에서 w1118 암컷을 사용하여 수명 분석을 수행했습니다. 그림 S5E와 S5F에서 볼 수 있듯이, 18명의 성인에서 서로 다른 농도의 TF(1mg/mL 및 2.5mg/mL)를 추가해도 사망률과 평균 수명에는 거의 영향을 미치지 않습니다. 무균 사육 조건은 풍부한 미생물군을 크게 방지할 수 있으므로 절단 시 Imd 신호를 제한할 수 있기 때문에(Clarke al., 2015), 우리의 데이터는 TF가 장내 미생물군에 의해 조절되는 타고난 면역 신호의 조절을 통해 초파리 수명을 연장할 수 있다고 제안했습니다.

그림 6. Theaflavins는 CD-1 마우스에서 DSS 유발 대장염을 완화합니다.

(A) TF 처리는 다양한 CD{0}} 마우스 그룹에서 물 소비에 영향을 미치지 않았습니다.

(BD) 다양한 농도의 TF(각각 1mg/mL, 2.5mg/mL 및 5mg/mL)의 위관 영양 투여는 CD{5}} 마우스에서 DSS로 인한 결장 단축과 비장 비대를 개선했습니다. 대표 이미지(B) 및 결장(C) 및 비장(D)의 통계적 분석이 표시되었습니다. (E) 다양한 농도의 TF(각각 1mg/mL, 2.5mg/ml, 5mg/mL)를 투여하면 CD{10}} 마우스에서 DSS에 의해 유도된 장 누출이 방지되었습니다. (F 및 G) 표시된 마우스 그룹에서 결장을 수집했습니다. 총 RNA를 추출하고 qRT-PCR 분석을 통해 TNFa(F) 및 IL{12}}(G)의 mRNA 발현 수준을 검출했습니다.

(HL) 다양한 마우스 그룹의 결장을 세로로 수집하고 H 염색 분석을 실시했습니다. 샘플을 현미경으로 검사하고 표시된 샘플(HL)의 대표적인 이미지를 얻어 표시했습니다. 스케일 바, 40μm. (M-Q') 다른 표시된 샘플에서 결장의 마이크로트리홈을 보여주는 SEM 이미지. 스케일 바, 50 um(MQ) 및 4 um(M'-Q').

CG에서 데이터는 양측 스튜던트 테스트에 의해 분석되고 평균 ± SEM.NS로 표시되며, 유의하지 않음, *p<><><0.001. see="" also="" figure="">

aflavins는 CD{1}} 마우스에서 DSS 유발 대장염을 완화합니다.

포유류에서 장내 항상성을 유지하는 데 있어 TF의 잠재적 역할을 추가로 조사하기 위해 CD{0}} 마우스를 사용하여 덱스트란 황산나트륨(DSS)에 의한 대장염을 유도했습니다. 마우스에 4주 동안 대조군으로 다양한 농도의 TF(1g/L, 2.5g/L 또는 5a/L) 또는 물을 위내 투여한 후 7일 동안 음용수에 2% DSS를 처리했습니다. TF가 여러 그룹의 마우스에 걸쳐 DSSa의 음주량에 영향을 미치는지 확인하기 위해 우리는 매일 마우스의 음주를 모니터링했습니다. Fiqure6A에서 볼 수 있듯이, TF 치료는 DSS 유도 대장염 마우스에서 음료 소비에 영향을 미치기 위해 필수적이며, DSS 치료 마우스는 용량 의존적 TF 치료에 의해 예방되는 설사 및/또는 혈변을 동반한 대장염 증후군을 나타냅니다(그림 S6A-S6E).시스탄체 오스트레일리아또한, TF를 사용한 중재는 DSS로 인한 결장 길이의 감소를 구하고 비장의 비대를 개선했습니다(그림 6B-6D).

그런 다음 dextran{0}}FITC(FITC-DX)를 사용하여 이 쥐의 장 장벽 기능을 조사했습니다. 그림 6E에서 볼 수 있듯이 DSS 처리 그룹의 마우스는 혈액 샘플에서 FITC-DX의 높은 농도를 보여 이 동물의 장 누출을 나타냅니다. 그러나 TF의 개입은 소화 기관에서 FITC-DX가 순환계(56.1% -77.5% 감소, 도 6E). 특히, TF의 투여는 정상 조건에서 마우스의 장 투과성을 변경하지 않았습니다(그림 S6F). 염증이 마우스 모델의 대장염 발병에서 중추적인 역할을 하기 때문에 qRT-PCR 실험을 추가로 수행하여 TF 처리가 DSS 처리 마우스의 장에서 IL{13}} 및 TNF 발현을 유의하게 하향조절함을 보여주었습니다(그림 6F 및 6G).

결장의 병리학 적 변화를 추가로 분석하기 위해 우리는 hematoxylin-eosin (HE) 염색 분석을 수행했습니다. 도 6H-6L 및 S6G-S6J에 나타난 바와 같이, DSS로 유발된 심각한 상피 손상은 용량 의존적 방식으로 TF 처리에 의해 현저하게 개선되었다. 이러한 장 샘플의 주사 전자 현미경 영상은 일관된 결과를 추가로 제공했습니다(그림 6M-6Q' 및 S6K-S6N'). 종합하면, 우리의 연구 결과는 TF가 곤충과 포유류 모두에서 장 장벽 기능을 보호하는 데 유익한 역할을 한다는 것을 나타냅니다.

논의

이 연구에서 우리는 장의 항상성과 수명을 조절하는 TF의 생리적 기능과 기본 분자 메커니즘을 조사했습니다. 우리는 TF를 이용한 식이 보충제가 장내 미생물총의 연령 발병 dysbiosis의 예방과 장 상피 기능 장애의 지연에 긍정적으로 기여하여 초파리의 수명을 연장한다는 것을 보여주었습니다. 우리의 시험관 내 및 생체 내 기계론적 연구는 TF가 Imd의 합체를 차단함으로써 Imd 신호 전달 경로를 제어하는 ​​데 부정적인 역할을 할 가능성이 있음을 보여주었습니다. 더욱이, 우리는 DSS로 유발된 대장염이 CD{2}} 마우스에서 TF 보충에 의해 효율적으로 완화될 수 있음을 발견했습니다. 우리의 결과는 TF가 무척추 동물과 척추 동물 모두에서 장 항상성에 유리하게 기여한다는 개념을 뒷받침합니다.

아플라빈을 이용한 식이 보충제는 초파리의 수명을 연장합니다

차 소비는 전 세계적으로 인기가 있으며 물 소비에 이어 두 번째입니다(Rothenberg and Zhang, 2019). 많은 연구가 실험 및 임상 접근 방식을 통해 종종 생리 기능에 초점을 맞추었습니다(Cameron et al., 2008; Niu et al., 2013; Peng et al., 2009; Rothenberg 및 Zhang. 2019; Spindleret al., 2013; Takemoto). 및 Takemoto, 2018, Unno et al., 2020, Zhou et al., 2020. 차가 지질 수준을 낮추고 항비만 효과를 통해 건강에 이롭다는 것이 광범위하게 나타났으며, 차의 주요 기능 화합물은 특히 카테킨입니다. 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)(Abbas and Wink, 2009; Modernelli et al., 2015; Niu et al., 2013; Wagner et al., 2015; Xiong et al., 2018) 이전 연구에서도 녹차와 홍차는 초파리(Site al., 2011; Wagner et al., 2015), 벌레(Fei et al., 2017; Xiong et al., 2018) 및 쥐(Imran et al., 2018)의 건강 수명과 수명을 연장할 수 있습니다. .,2018; Niu et al.2013). 주요 조절 메커니즘은 ROS 신호의 변조를 통해 EGCG에 의한 산화 스트레스의 효과적인 예방입니다.시스탄체 혜택,그러나 홍차의 특징적인 "황금" 화합물인 TF가 노화와 수명을 조절하는 역할을 하는지 여부는 아직 많이 알려지지 않았습니다. 이 연구는 TF 개입이 음식 섭취에 영향을 미치기 위해 필수적이며 식이를 통한 TF의 장기간 섭취가 수컷과 암컷 초파리 모두의 수명을 크게 연장한다는 것을 나타내는 강력한 증거를 제공합니다. 이러한 발견은 포유류의 장수에서 TF의 기능에 대한 추가 연구를 위한 지침을 제공합니다.

아플라빈은 노화에 따른 미생물의 불균형을 개선하고 장내 항상성을 촉진합니다. 증식 항상성과 재생 능력의 점진적인 불균형은 노화 및 노화 질환의 특징입니다(Clark et al., 2015; Heintz and Mair, 2014; Maynard and Weinkove, 2018; Rera 외 2012). 만성 염증은 노화 유기체에서 항상성 상실 및 암 발병 증가와 관련이 있습니다(Bartke et al., 2019; Kapahi et al., 2017; Xiao et al., 2020). 이는 장 상피와 같은 장벽 상피에서 특히 중요합니다(Guo et al., 2014; Maynard 및 Weinkove, 2018). 노화 장에서 노화 관련 이형성증의 발달에 대한 모델을 통해 우리는 노화 장벽 상피에서 숙주-공생 상호 작용을 개선하면 건강과 수명을 증진할 수 있음을 입증했습니다. 우리는 노화 동안 장 기능과 미생물 역학을 분석하기 위해 여러 가지 비침습적 접근 방식을 사용했습니다. 첫째, Smurf 분석은 노화 동안 상피 장벽 기능 장애를 조절하는 데 TF의 긍정적인 역할을 나타냅니다. 그런 다음, 여러 형질전환 파리를 사용한 면역염색 분석에서 TF가 ISC의 과증식과 분화된 세포의 전환을 지연시키는 것으로 나타났습니다. 마지막으로, 미생물군집의 시퀀싱은 TF가 장내 공생 미생물총의 연령 발병 확장을 하향 조절함을 시사했습니다. 이러한 결과는 TF가 장 항상성을 유지하여 숙주의 노화 과정을 지연시키는 데 중요한 역할을 한다는 것을 강력하게 나타냅니다.

아플라빈은 Imd 신호를 부정적으로 조절하여 장내 과도한 면역 반응을 완화합니다

장벽 상피의 장기적인 항상성을 보장하려면 장 면역 기능과 미생물총 사이의 섬세한 균형이 유지되어야 한다고 제안되었습니다(Guo et al., 2014; Maynard and Weinkove, 2018). 이전 연구에서는 장내 만성 과도한 염증이 장벽 상피의 노화 관련 기능 장애와 관련이 있으며 노화의 특징인 것으로 나타났습니다(Clark et al., 2015; Guo et al., 2014; Ji et al., 2019). . 따라서 이러한 상피에서 타고난 면역 항상성을 보존하여 건강한 공생 개체군을 유지하는 것은 건강과 장수를 촉진하는 유망한 접근 방식입니다(Bonfini et al., 2016; Broderick, 2016; Clark et al., 2015). 어떤 TF가 노화를 지연시키는지 알아보기 위해, 우리는 TF 처리 유무에 관계없이 절개된 장을 사용하여 RNA-seq 분석을 수행했습니다. 우리의 데이터는 TF 처리 동물과 비교하여 대조군 초파리의 내장에서 높게 발현되는 유전자 그룹이 "면역 반응" 유전자로 분류된 유전자로 풍부하다는 것을 시사했습니다. 추가 생물정보학적 분석 및 get-PCR 분석에서 Imd 관련 AMP 유전자의 발현이 TF의 식이 첨가에 의해 극적으로 억제됨이 밝혀졌습니다. 장에서 비정상적인 면역 반응을 유도하기 위해 DSS를 사용하는 CD{14}} 마우스 실험의 결과는 TF가 장 염증에 대한 보호 역할을 한다는 개념을 추가로 확인시켜주었습니다.

아플라빈은 Imd의 아밀로이드 어셈블리를 결정하여 신호를 억제합니다.

TF는 Imd 신호 전달 경로를 어떻게 부정적으로 조절합니까? 전사체 분석 결과를 기반으로, 우리는 TF가 Imd 신호 전달 경로의 주요 인자의 전사 조절에 필수적이라는 것을 발견했습니다. 흥미롭게도, 우리는 SPR 분석에 의해 정제된 Imd 단백질과 TF의 명백한 결합 친화성을 관찰했는데, 이는 TF가 Imd 단백질 행동 또는 번역 후 변형 과정을 제어하는 ​​데 역할을 할 수 있는 가능성을 시사했습니다. 이전 연구에서는 Imd 신호 전달에서 유비퀴틴화의 중추적인 역할을 강조했으며(Kleino and Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014), Imd 유비퀴틴화를 방지하면 Imd 신호 전달이 완전히 차단됩니다(Myllymaki et al., 2014; Thevenon et al., 2009). 그러나, 우리의 시험관내 및 생체내 유비퀴틴화 분석은 TF가 Imd의 유비퀴틴화 패턴에 거의 영향을 미치지 않는 것으로 나타났습니다. 최근 연구에 따르면 박테리아 펩티도글리칸의 인식 시 Drosophila Imd 경로의 활성화에 아밀로이드 형성이 필요하다는 것이 밝혀졌습니다(Kleino et al., 2017). 흥미롭게도, 우리의 SDD-AGE 및 ThTbinding 분석은 Imd의 유착이 TF에 의해 방지됨을 시사했습니다. 장 세포에서 Imd의 녹다운 또는 돌연변이에 의한 Imd 응집의 방지는 수명 연장에 대한 TF의 유익한 효과를 분명히 역전시켰습니다. 우리의 발견을 추가로 확인하기 위해 Imd의 보존된 암호 RHIM(cRHIM, 118번째에서 121번째로의 아미노산) 모티프가 파괴될 때 TF가 더 이상 과일 전단지의 수명을 연장하는 기능이 없는지 조사하는 것이 흥미로울 것입니다. Imd의 범죄가 응집과 아밀로이드 형성에 필수적이라는 발견에 기초합니다(Kleino et al., 2017). 그럼에도 불구하고, 우리의 연구는 아마도 Imd 유착을 조절함으로써 장의 항상성과 노화 과정을 제어하는 ​​TF의 중추적인 역할을 강조합니다. 향후 연구는 Imd의 어떤 잔기 또는 영역이 TF에 결합되어 있고 이 결합이 Imd 응축을 방지하는 결과를 가져오는지 조사하는 데 중점을 두어야 합니다. 더욱이, 포유류 시스템에서 우리의 발견은 TF가 외인성 유독성 화학물질 DSS에 의해 유발된 염증으로부터 결장을 효과적으로 보호할 수 있음을 나타내었으며, 이는 장의 항상성을 유지하는 데 TF의 보존된 조절 역할을 시사합니다. TF가 포유류 조직에서 단백질 조립을 조절하는 역할을 하는지 조사하는 것은 가치가 있습니다.

이 기사는 zhongwenxie@ahau.edu.cn에서 발췌했습니다.