난소 절제된 쥐의 뼈 대사에 대한 Cistanoside A의 치료 효과
Apr 17, 2024
1. 소개
전신 골격의 "침묵의 살인자"인 골다공증은 최근 몇 년간 전 세계적으로 2억 명이 넘는 사람들을 괴롭히는 주요 건강 위험이 되었습니다.. 이는 낮은 골질량 밀도(BMD)와 미세구조적 악화를 특징으로 하며, 이는 뼈 형성에 비해 과도한 뼈 흡수로 인해 발생하며 최종적으로 골다공증성 골절을 초래합니다.. 오늘날 파골세포의 분화와 재흡수를 차단하는 물질을 식별하는 것은 골다공증 치료제 개발을 위한 일반적이고 성공적인 전략입니다.에스트라디올 발레레이트와 알렌드로네이트 나트륨을 포함한 실제로 많은 합성 물질이 있습니다.골다공증을 예방하고 치료한다. 그러나 질병에 대한 약물은 이상적이지 않습니다. 이러한 약물 중 일부는 자궁내막암 및 유방암의 위험을 증가시킬 수 있으며 고칼슘혈증, 고칼슘뇨증 등과 같은 어느 정도의 부작용도 있을 수 있습니다., 이는 임상 적용을 제한합니다. 따라서 천년이 넘도록 전통 한의학(TCM), 특히 분리된 생리활성 화합물과 분획을 함유한 식용 TCM은 골다공증을 포함한 다양한 질병을 예방하고 치료하기 위해 아시아 국가에서 안전하고 효과적으로 광범위하게 사용되어 왔습니다..
골다공증 질환 치료 및 예방을 위한 천연 CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%
골다공증은 파골세포 생성의 증가로 인해 뼈 흡수가 강화되는 것을 특징으로 하며, 이 과정에는 조혈 단핵구가 파골세포 전구체로 결합되어 리모델링이 진행 중인 뼈 부위를 표적으로 하는 다핵 파골세포가 형성되는 과정이 포함됩니다. 조골세포에서 분비되는 핵심 인자인 핵인자-κB 리간드에 대한 수용체 활성인자(RANKL)는 단핵구에서 파골세포로의 분화를 자극합니다[8,9]. RANKL과 그 수용체 RANK의 상호작용은 어댑터 신호 단백질 TNF 수용체 관련 인자(TRAF6)를 모집함으로써 NF-κB, PI3K/Akt 및 칼슘/칼모듈린 의존성 키나제를 포함한 일련의 세포내 사건을 초래합니다. 결과적으로 TRAP, cathepsin K, DPD를 포함한 여러 파골세포 관련 마커 유전자가 상향 조절되고 뼈 흡수 과정이 가속화됩니다.
페닐에타노이드 배당체는 글리코시드 결합을 통해 α-글루코피라노스(아피오스, 갈락토스, 람노스, 자일로스 등)에 부착된 신남산 및 하이드록실 페닐 에틸 부분을 특징으로 하며, 이는 약용 식물에 널리 분포되어 있습니다[10]. 시스타노사이드 A(Cis A)는 활성 성분입니다.페닐에타노이드 배당체Cistanche Deserticola YC Ma에서. 중국 약전의 기록에 따르면 C. Deserticola는 전통적으로 신장음 결핍, 근육 약화, 요추 쇠약 등을 치료하는데 사용되었으며, 페닐에타노이드 배당체는 이 약초의 주요 생리 활성 성분입니다[11]. 한의학의 '신장' 이론에 따르면 신장은 뼈계를 관장한다. 즉, 뼈의 발달과 기능은 신장의 본질에 달려 있고, 이 신장의 본질은 골수로 전환되어 뼈에 영양을 공급할 수 있다는 뜻이다. 골격의 성장과 회복을 촉진하고 골격을 강화합니다 [12]. C. Deserticola가 신장을 강화할 수 있으므로 Cis A가 골다공증을 예방하고 치료할 수 있다고 가정했습니다. 따라서 본 연구는 다음의 잠재력을 검증하기 위해 고안되었습니다.골다공증 예방에 효과적인 Cis A난소 절제된 마우스 모델을 사용하여 뼈 형성 및 흡수 마커뿐만 아니라 관련 잠재적 메커니즘을 결정하여 이 약물의 항골다공증 생체활성을 추정했습니다.
2. 결과 및 고찰
2.1. 결과
2.1.1. 뼈 3점 굽힘 시험에 대한 Cis A의 영향
Cis A 처리로 뼈가 더 강해지는지 분석하기 위해 대퇴골에 3점 굽힘 테스트를 실시했습니다. 그림 1에서 볼 수 있듯이, 뼈가 부러졌을 때 적용되는 최대 하중은 20 mg/kg 및 80 mg/을 처리한 동물에서 21.5% 및 22.{5}}% 더 높았습니다. kg Cis A를 각각 난소절제(OVX) 그룹의 동물과 비교했습니다(p < 0.05). 한편, Cis A로 치료하면 뼈의 강성도 향상되었습니다. 모든 Cis A 처리 마우스는 각각 121.0 ± 12.1(p < 0.05), 124.1 ± 16.2(p < 0.05) 및 127.7 ± 9.6(p < 0.01)의 데이터로 상당히 증가된 강성을 나타냈습니다. OVX 마우스의 102.2 ± 10.7과 비교했을 때. 결과는 Cis A로 처리된 OVX 마우스의 뼈 강도 증가가 뼈 양의 증가와 뼈의 질 향상으로 인한 것임을 나타냅니다.
2.1.2. 뼈 미세구조에 대한 Cis A의 효과
마이크로 CT(그림 2 및 표 1)로 측정한 마우스의 3차원 소주 뼈 미세 구조는 OVX 그룹의 마우스가 가짜 그룹과 비교할 때 소주 영역과 소주 수의 현저한 감소를 나타냄을 직관적으로 보여줍니다. 이는 난소 절제술을 나타냅니다. 골량 밀도(BMD, -46%), 골 미네랄 함량(BMC, -66%), 조직 미네랄 함량(TMC, -85%), 골 부피 분율(BVF, -82%)의 현저한 감소를 유발할 수 있습니다. 소주 수(Tb. N, -76%) 및 소주 분리의 증가(Tb. Sp, +80%), 총 조직 미네랄 밀도(TMD) 및 소주 두께(Tb. Th)의 수정 없이 12주간의 운영. 그러나 Cis A를 처리한 OVX 마우스에서는 용량 의존적으로 BMD(+43%~57%), BMC(+65%~73%), TMC(+83%~)가 증가했습니다. 90%), BVF(+80%~88%), Tb 감소 효과가 더 큽니다. Sp(-79%~88%) 및 더욱 강화된 Tb. OVX 그룹과 비교하여 N(+73%~82%)입니다. TMD는 난소절제술에 의해 영향을 받지 않는 것으로 보였지만 에스트라디올 발레레이트(EV) 치료에 의해 유의하게 증가되었습니다.
2.1.3. 뼈 형성 및 흡수 표지 모두에 대한 Cis A의 효과
TRAP, DPD, 카텝신 K 뼈 형성 지수 ALP 및 뼈 Gla-단백질(BGP)을 포함한 뼈 흡수 표지자에 대한 Cis A의 효과는 그림 3에 나와 있습니다. 난소 절제술 수술 12주 후 TRAP, DPD의 활성 , OVX 그룹의 카텝신 K는 크게 증가했으며, 특히 DPD는 거의 55.6% 증가했습니다. TRAP과 카텝신 K는 가짜 그룹에 비해 각각 43.5%와 38.1% 향상되었습니다. 12주 동안 경구 투여된 Cis A는 위에서 언급한 모든 골흡수 지표를 예방하는 데 있어 주목할만한 잠재력을 나타냈으며, 특히 고용량(80 mg/kg)에서는 DPD의 활성을 억제하는 데 상당한 효과를 나타냈습니다. 45.0%, TRAP은 49.0%, 카텝신 K는 44.0% 증가했습니다(p < 0.01). OVX 그룹(그림 3). OVX 그룹에서 ALP 및 BGP 활동의 증가 추세가 입증되었지만 통계적으로 유의미한 변화는 관찰되지 않았습니다. 그러나 가짜 그룹과 비교하여 낮은 및 높은 Cis A 처리 그룹에서 ALP 활성의 상당한 개선이 관찰되었습니다(p < 0.01).
골다공증 예방을 위한 천연 시스탄체 튜불로사PHGS75% ECH 30% ACT 12%
2.1.4. TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG 및 RANKL의 단백질 발현 수준에 대한 Cis A의 영향
웨스턴 블롯 분석 결과, 가짜 그룹에 비해 OVX 그룹의 TRAF6, NF-κB 및 RANKL의 단백질 수준이 크게 증가한 반면(p < 0.05), OPG, PI3K 및 Akt는 크게 감소했습니다(그림 4). Cis A(20 mg/kg 또는 80 mg/kg)는 TRAF6 발현을 크게 하향 조절했으며(p < 0.05), 이어서 RANKL 발현은 감소하고 OPG는 증가했습니다. 이는 OPG/RANKL 비율이 상향 조절되었음을 의미합니다. 결과적으로, Cis A 처리에 의해 NF-κB의 신호 전달 계통이 하향조절되었고 PI3K/Akt가 상향조절되었습니다(p < 0.05).
2.2. 논의
골다공증 질환에 대한 현재 치료 옵션의 한계를 고려할 때, 식품이나 천연 식용 약용 식물의 대안이 필요합니다. TCM에서 효과적인 항골다공증제를 발견하기 위한 지속적인 노력의 일환으로 우리는 항골다공증 특성의 효과를 지닌 일련의 추출물, 분획물 및 화합물을 발견했습니다[13,14]. Cistanche Deserticola는 중요한 고전 TCM으로, 유리한 안전성 프로필[15]과 신장 결핍증 치료 등을 위한 광범위한 의약 기능을 갖는 것으로 밝혀졌습니다[16]. 한의학 이론에 따르면, 신장을 보양하는 효능이 있는 한의학은 대개 다음과 같습니다.골다공증 치료에 사용; 페닐에타노이드 배당체는 이 허브의 주요 생리 활성 성분이므로 다음과 같습니다.페닐에타노이드 배당체C. Deserticola에 함유된 성분은 항골다공증 특성을 가질 수 있습니다. C. Deserticola 추출물이 BMD 감소를 유의하게 억제하고 OVX로 인한 섬유주 미세구조의 악화를 예방할 수 있음이 입증되었습니다[17]. In vitro 실험에서는 ALP, 골형성단백질-2, osteopontin mRNA와 배양된 조골세포의 골광물화도 유의하게 증가시켰다[18]. C. Deserticola의 주요 생리활성 성분인 Echinacoside는 중국 약전에 공식적으로 기록되어 있으며[11], 30~270 mg/kg 체중/일의 고용량에서 항골다공증 활성을 나타냈으며[19], 추가 in vitro 결과에서는 MC3T3-E1 Subclone 14 세포에서 OPG/RANKL 비율을 증가시켜 뼈 재생을 촉진할 수 있습니다[20]. Cis A는 C. Deserticola에서 분리된 페닐에탄올 배당체 중 하나였으며 여러 보고에 따르면 이 화합물은 항산화 활성[21] 및 항염증 특성[22,23]을 가지고 있는 것으로 나타났습니다. 최근 발표된 논문에서는 Cis A가 생쥐에서 CCl4와 알코올 유발 간독성 모두에 대해 보호 활성을 나타냈으며, 또한 시험관 내에서 일차 배양된 생쥐 간세포에서 에탄올 유발 손상에 대한 보호 특성도 보여주었습니다[24]. 본 연구에서는 난소절제 마우스 모델을 사용하여 Cis A가 저용량(20~80 mg/kg 체중/일)에서 항골다공증 활성을 나타냈으며, 이러한 생체 활성은 TRAF6의 수준을 하향 조절하여 발휘되는 것으로 나타났습니다. RANKL 및 NF-κB의 발현과 OPG, PI3K 및 Akt의 자극은 OVX 마우스에서 Cis A의 치료 효과가 TRAF{25}}매개 NF-kappaB 불활성화 및 PI3K/Akt 활성화 메커니즘을 통해 이루어졌음을 의미합니다.
난소절제술은 골밀도, 생체역학적 강도, 골질 및 소주골 미세구조의 명백한 감소와 함께 골다공증을 유발할 수 있다는 것은 잘 알려져 있으며, 위의 변화는 부분적으로 에스트로겐 결핍으로 인한 것입니다[25]. 현재 생체 내 실험에서 우리의 연구는 난소 절제술로 인한 골다공증이 BMD, BMC, TMC 및 Tb를 포함한 생체 역학적 강도와 섬유주 구조 매개 변수의 상당한 감소를 초래한다는 것을 보여줍니다. N, Tb가 증가합니다. Sp; Cis A의 치료는 OVX 그룹의 마우스와 비교하여 최대 하중 및 강성을 포함한 뼈의 기계적 특성을 크게 개선하고 BMD를 향상시키며 뼈 소주 미세구조 구조 매개변수의 대부분을 개선하여 Cis A가 뼈의 질을 개선하는 데 효과적임을 나타냅니다. OVX 마우스의 섬유주 마이크로 아키텍처.
총 골밀도 외에도 3점 굽힘 검사와 소주골 미세구조 측정을 통해 골다공증을 직접 진단할 수 있었고, ALP, BGP 등 골형성 지표와 TRAP, DPD, 카텝신 K 등 골흡수 지수도 활용해 골다공증을 직접적으로 진단할 수 있었다. Cis A의 관련 항골다공증 메커니즘을 설명합니다. 우리 연구에서 OVX 그룹 마우스의 ALP 활성은 유의미하지 않은 증가 추세를 나타냈는데, 이는 폐경 후 골다공증에서 골 교체율이 증가했음을 나타냅니다[26,27]. Cis A 처리의 고용량(80 mg/kg 체중/일) 및 저용량(20 mg/kg 체중/일)에서는 가짜 그룹에 비해 ALP 활성이 크게 향상되었지만 BGP 활성은 다음과 같은 영향을 받지 않는 것으로 보입니다. 모든 치료군에서 난소절제술; TRAP, DPD, cathepsin K는 OVX군에서 유의하게 증가하였고, Cis A 투여에서는 세 가지 골흡수 지표가 모두 현저하게 감소하였다. 위의 데이터는 Cis A가 잠재적인 항골다공증 활성을 갖고 있음을 암시하며, 이 효과는 골흡수 억제 및 골형성 증가를 포함한 골대사 조절에 의해 발휘됩니다.
조골세포와 파골세포 사이의 조정은 골격 완전성을 유지하는 데 중요한 요소입니다. TRAP를 발현하는 파골세포는 액틴 결합 밀봉 영역을 형성하여 뼈 표면에 부착되고, 그 안에서 카텝신 K와 같은 단백질 분해 효소가 방출되어 흡수 구멍이 형성됩니다. 조골세포 계통의 미성숙 세포에 의한 파골세포 생성 조절은 RANKL과 OPG에 의해 매개됩니다. OPG는 파골세포 생성의 RANKL 활성화를 억제하여 뼈 흡수를 감소시키는 미끼 수용체입니다. 파골세포 전구세포에 중요한 신호를 제공하는 RANKL은 파골세포의 형성을 촉진하는 종양 괴사 인자 리간드 계열의 막 결합 분자입니다. OPG/RANKL 발현 비율은 파골세포 형성 활성의 핵심 매개변수로 여겨지며, RANKL에 의해 활성화된 신호 전달 계통에는 NF-κB 및 PI3K 경로가 포함됩니다[29]. 파골세포 생성에 대한 NF-κB 경로의 중요성은 생쥐에서 NF-κB가 결실되면 성숙한 파골세포가 없다는 사실에 의해 입증됩니다[30]. TRAF6은 새로운 항골다공증 약물의 유망한 표적으로 입증되었습니다. 파골세포 생성 결함과 심각한 골화석증을 나타내는 TRAF6-결핍 마우스는 골대사에서 TRAF6의 중요성을 입증했습니다. 새로운 증거는 RANKL/RANK 매개 신호 전달 계통에서 TRAF6의 중요한 조절 기능을 지적합니다[4,31]. 현재 연구의 데이터에 따르면 OVX 마우스에 대한 Cis A 처리는 TRAF6 단백질 발현 수준의 하향 조절, RANKL 감소 및 OPG 발현 증가로 인해 하류 NF-κB의 RANKL 활성화를 방지하고 PI3K/Akt 신호 경로를 활성화하는 것으로 나타났습니다. 이는 Cis A가 TRAF{20}매개 NF-kappaB 불활성화 및 PI3K/Akt 활성화에 의해 파골세포 분화를 억제하고 OPG/RANKL 비율을 증가시켜 결과적으로 파골세포 형성을 억제하고 뼈 형성을 촉진한다는 것을 시사합니다.
천연 시스탄체 투불로사골다공증 방지 활성PHGS75% ECH 30% ACT 12%
3. 재료 및 방법
3.1. 식물 재료, 준비 및 결정
Cistanche Deserticola의 줄기Ningxia Medical University 약학과의 Xue-yan Fu 교수가 확인한 YC Ma는 9월 2일015년 중국 Ningxia Province Yongning County에서 수집되었습니다. 바우처 표본(#2{13}}150901)은 약국 식물표본실에 보관되어 있습니다. 공기 건조된 C. Deserticola 줄기 총 30.0kg을 70% 에탄올(180L, 3×2h)로 3회 환류 추출하였다. 여액을 합하고 물에서 에탄올을 증가시키는 단계적 구배 용매 시스템(0%, 20% 및 60%, 각각 60L)을 사용하는 거대 다공성 수지(AB{12}}) 컬럼에 적용하여 3개의 분획을 얻은 다음, 분획의 60%를 Sephadex LH-20(Pharmacia Biotech Co., Uppsala, 스웨덴) 및 반조제 고성능 액체 크로마토그래피(Agilent 1100, Agilent Technologies, Waldbronn, Germany)로 추가 정제하여 연한 노란색을 얻었습니다. 시스타노사이드 A 4.5g(Cis A; 수율은 0.015%). 구조는 주로 NMR(Bruker Avance, 400MHz, Germany) 및 MS 스펙트럼(Agilent 6540, Agilent Technologies) 데이터 분석을 통해 밝혀졌으며 이는 보고된 데이터와 일치했습니다[19]. 순도는 HPLC 면적 정규화 방법으로 결정되었습니다(그림 5). 동물 실험에서 우리의 예비 실험에 따르면 Cis A의 복용량은 20-80 mg/kg/day였습니다.
3.2. 화학물질 및 용제
다음이 사용되었습니다: 전체 단백질 추출 키트 및 BCA 단백질 정량화 키트(Ken Gen Biotech. Co. Ltd, Nanjing, China), TRAF6, NF-κB, PI3K, Akt, RANKL, OPG, -actin 및 튜불린의 1차 항체( Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA), 양 고추 냉이 퍼옥시다아제 결합 염소 항 토끼 IgG의 2차 항체(ZSGB-BIO, 중국 베이징), 에스트라디올 발레레이트(1 mg, Delpharm Lille SAS, 프랑스 파리), 뼈 Gla -단백질과 디옥시피리디놀린은 ELISA 키트(Xinyu Biological Engineering Co. Ltd., Shanghai, China)와 카텝신 K ELISA 키트(Biovision, Mountain View, CA, USA)를 가교합니다. 사용된 다른 모든 화학 물질 및 생화학 제제는 AR 분석 등급 시약이었습니다.
3.3. 동물 실험
60마리의 암컷 Kunming 계통 마우스(체중 26.0 ± 1.62 g, 8주령)를 Ningxia Medical University에서 구입하였고, 10마리의 마우스를 표준 실험실 식단으로 한 케이지에 보관했습니다. 공기 조절 조건(24.0 ± 0.5 ◦C, 습도 45%~50%, 명암 조명 주기 12시간/12시간)에서 수돗물을 사용합니다. 1주일 동안 적응시킨 후 무균상태에서 수술을 실시하였고, 모든 마우스를 클로랄 수화물(100 mg/kg, ip)로 마취시켰다. 난소를 제거하지 않고 수술 노출을 실시한 마우스는 가짜 그룹(n= 10)이었고; 나머지는 OVX 그룹(n{19}})과 같이 양측 난소 절제술을 받았습니다. 위의 동물 실험은 실험 동물의 관리 및 사용 지침에 따라 수행되었으며 닝샤 의과 대학 생명 윤리위원회의 승인을 받았습니다.
또 다른 {{0}주의 회복 기간 후, 위의 50마리의 OVX 마우스를 무작위로 동일하게 5개 그룹으로 나누었습니다. 양성 대조군(EV)으로 에스트라디올 발레레이트(1mg/kg/일)를 경구 투여하고; 각각 저용량, 중등도, 고용량 그룹으로 Cis A 20, 40, 80 mg/kg/day를 사용하고; 모델 그룹(OVX)으로 비히클(0.5% 카르복시메틸셀룰로오스()-Na)을 사용합니다. 모든 쥐에게 동량의 1 mL/100 g 체중 비히클, EV 또는 Cis A를 경구 투여하였으며, 이는 수술 후 2주째에 시작하여 12주 동안 지속되었습니다. 체중은 격주로 측정되었으며 이에 따라 복용량이 조정되었습니다. 마지막 경구 투여 후, 마취된 마우스의 대퇴 동맥으로부터 혈액 샘플을 채취하여 응고시키고, 3000×g에서 10분간 원심분리하여 혈청을 얻었다; 오른쪽 대퇴골과 경골이 해부되었습니다. 모든 샘플은 뼈의 미세구조와 골다공증 관련 혈청 생화학적 변수를 추가로 평가하기 위해 -80°C에 보관되었습니다.
3.4. 3점 굽힘 테스트
마우스의 오른쪽 대퇴골의 생체역학적 특성은 3점 굽힘 배열을 사용하여 결정되었습니다. 벤딩 지그에는 검사 중 대퇴골의 원위부와 근위부 끝을 고정하기 위한 V자형 지지대가 있습니다. 대퇴골은 앞쪽이 위쪽을 향하도록 수평으로 위치시키고, 대퇴골 중앙부 중앙에 아래쪽으로 하중을 가하였다. 지지대 사이의 거리는 8mm였습니다. 뼈는 BOSE 시험기(3220)(Bose Corporation, Endura TEC Systems Group, Minnetonka, MN, USA)를 사용하여 파손될 때까지 0.02mm/s의 일정한 변위 속도로 로드되었습니다. 하중-변위 곡선을 구하여 최대 하중, 최대 하중, 탄성 계수, 굴곡 강도 등을 포함한 구조 및 재료 특성 계산에 사용했습니다.
3.5. 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 분석
모든 마우스의 오른쪽 대퇴골에서 부착된 연조직을 제거하고 위의 오른쪽 원위 대퇴골 형이상학의 소주골 미세구조를 마이크로 CT 스캐너(eXplore Locus SP, GE Healthcare, London, ON, Canada)를 사용하여 결정했습니다. 세 가지 공간 차원 모두에서 등방성 분해능이 8μm로 설정되었습니다. 관심 영역(ROI)은 대퇴골 성장판의 동일한 좌표를 사용하여 선택되었습니다. BMD, 골 미네랄 함량(BMC), 조직 미네랄 함량(TMC), 조직 미네랄 밀도(TMD), 골 부피 분율(BVF), 소주 분리(Tb. Sp), 소주 수(Tb. N)를 포함한 골 형태 측정 매개변수 ) 및 섬유주 두께(Tb.Th)는 ABA 뼈 분석 소프트웨어를 사용하여 ROI 분석을 통해 평가되었습니다.
3.6. 생화학적 매개변수 분석
혈청 알칼리성 포스파타제(ALP)의 활성은 자동 분석기(Ciba-Corning 550 Diagnostics, Corp., Oberlin, OH, USA)에서 측정되었습니다. 혈청 DPD, BGP 및 카텝신 K의 수준은 해당 시약 키트를 사용하여 측정하였고, TRAP(Tartrate-Resistant Acid Phosphatase)는 관련 문헌에 따라 분석했습니다[32].
3.7. 웨스턴 블롯 분석
서로 다른 그룹의 TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG 및 RANKL의 단백질 발현 수준은 Western blot 분석을 통해 검출되었습니다. 간단히 말하면, 0.5 mM 페닐메틸술포닐 플루오라이드, 프로테아제 및 포스파타제 억제제를 함유하는 용해 완충액을 사용하여 마우스의 오른쪽 경골에서 단백질을 추출했습니다. 추가 분석을 위한 상층액을 얻기 위해 용해물을 12000×g에서 10분 동안 원심분리했습니다. 용해물의 단백질 농도는 비신코닌산 정량 분석을 사용하여 측정되었습니다. 단백질(50-100 µg)을 10% SDS-PAGE를 사용하여 분리하고 폴리비닐리덴 디플루오라이드 막으로 옮기고 TRAF6, NF-κB RANKL, PI3K, Akt, OPG 및 -actin(1:500)을 표적으로 하는 단일클론 1차 항체와 함께 배양했습니다. Image Lab 소프트웨어에 의해 검출된 화학발광 신호를 사용하여 동일한 막을 벗겨내고 다시 조사했습니다. -액틴이나 튜불린이 내부 대조군으로 사용되었습니다.
3.8. 통계 분석
동물 실험에서 얻은 모든 데이터는 SPSS(Version 22.0, IBM SPSS Statistics, IBM Corp., Armonk, New York, NY, USA)를 통한 Dennett's test를 이용한 일원 분산 분석을 이용하여 분석하였다. ) 소프트웨어; p < 0.05 값을 통계적으로 유의한 것으로 간주하여 모든 결과를 평균±SD로 나타내었다.
4. 결론
요약하면, 시스 A,활성 페닐에타노이드 배당체C. Deserticola에서 분리된 이 물질은 OVX 생쥐에서 상당한 항골다공증 활성을 나타냈으며, 분자 메커니즘은 TRAF6-매개 NF-kappaB 불활성화 및 PI3K/Akt 활성화와 관련이 있을 수 있으므로 골다공증 치료에 유망한 물질일 가능성이 높습니다. 질병.
천연 시스탄체 투불로사골다공증 방지 활성PHGS75% ECH 30% ACT 12%
