Cistanche Deserticola의 총 배당체는 MCAO/R 쥐에서 Nrf- 2/Keap-1 경로를 통해 신경혈관 재생을 유도하여 신경학적 기능 회복을 촉진합니다
Feb 27, 2023
배경:
한약 Cistanche deserticola는 심혈관 및 뇌혈관 질환에 유효한 것으로 보고되었습니다. 그러나 허혈성 뇌졸중 보호를 위한 활성 성분은 명확하지 않습니다. 우리는 허혈성 뇌졸중에 대한 C. deserticola의 활성 성분과 잠재적인 메커니즘을 탐구하는 것을 목표로 했습니다.
행동 양식:
중대뇌동맥 폐색-재관류(MCAO/R) 쥐 모델에서 C. deserticola 추출물, 총 배당체(TGs), 다당류(PSs) 및 올리고당류(OSs)의 뇌 보호 효과를 조사했습니다. 2, 3, 5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC) 염색법을 이용하여 뇌경색 용적을 평가하였고, Evans blue assay를 이용하여 BBB 투과성을 평가하였다. 그런 다음 식 CD31, a-SMA, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, ZO-1, claudin-5, occludin, Keap-1 및 Nrf{{ 13}}은 western blotting이나 immunofluorescence를 이용하여 분석하였고 MDA, SOD, CAT, GSH-Px 활성은 kit를 이용하여 분석하였다.
결과:
TGs 치료는 모델 그룹에 비해 신경학적 결손 점수와 경색 부피를 현저하게 감소시켰고, 혈관신생 및 신경 리모델링을 촉진했으며, 혈뇌장벽 완전성을 효과적으로 유지했습니다. 또한 TG는 뇌에서 MDA 수준을 크게 감소시키고 항산화 활동(SOD, CAT 및 GSH-Px)을 증가시켰습니다. 한편, TG는 Keap-1 발현을 현저하게 하향 조절하고 Nrf-2 핵 전좌를 촉진했습니다. 반대로 PS 및 OS 그룹에 대한 보호 효과는 관찰되지 않았습니다.
결론:
TG는 MCAO/R 유발 뇌 손상에 대한 C. deserticola의 주요 활성 구성 요소이며 보호는 주로 Nrf-2/Keap-1 경로를 통해 이루어집니다.
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소개
뇌졸중은 전 세계적으로 사망 및 장애의 주요 원인으로 간주됩니다(Donnan et al., 2008). 모든 뇌졸중 사례의 거의 87%가 허혈성 뇌졸중에 의해 유발됩니다(Ovbiagele 및 Nguyen-Huynh, 2011). 현재, 허혈성 뇌졸중 치료에 사용되는 가장 효과적인 제제이자 유일한 FDA 승인 약물은 재조합 조직 플라스미노겐 활성제입니다. 그러나 많은 수의 뇌졸중 환자가 이 약물의 좁은 치료 시간 창과 출혈성 합병증의 심각한 위험으로 인해 이 약물에 반응하지 않습니다(Lee et al., 2012; Schellinger and Kohrmann, 2014). 혈전 용해 치료의 주요 과제는 뇌 손상 및 기능 파괴의 주요 원인으로 간주되는 허혈/재관류(I/R) 손상입니다. 대뇌 허혈 후 재관류는 뇌출혈의 위험을 증가시키면서 신경혈관 손상을 유발하고 혈뇌 장벽을 손상시키는 과도한 활성산소종(ROS)을 생성합니다(Alluri et al., 2015). 여러 연구에서 BBB의 파괴가 허혈성 뇌졸중 발병의 주요 원인임을 확인했습니다(Cao et al., 2016b).
BBB는 주로 내피 세포, 혈관 주위 세포, 성상 세포, 뉴런 및 기저막으로 구성됩니다. BBB의 핵심 구성 요소는 단단한 접합부에 의해 결합되어 외인성 분자를 뇌로 제한하는 대뇌 미세혈관 내피 세포입니다. 특히 occludin, claudin-5 및 zonula occludens-1(ZO-1)와 같은 밀착 연접의 병리학적 변화는 허혈성 뇌졸중 동안 BBB 기능, 특히 장벽 투과성에 상당한 영향을 미칩니다(Liu et al., 2014; Hu et al., 2018; Liu et al., 2019). I/R 기간 동안 과도한 ROS는 뇌 뉴런의 직접적인 손상을 초래하는 주요 요인 중 하나입니다(Ding et al., 2014). ROS 과잉 생산은 특정 접합부의 저하와 BBB 파괴로 이어져 외인성 분자가 BBB를 통해 뇌로 들어가 뇌 손상을 악화시킵니다(Cheon et al., 2016; Zhang QY et al., 2017). 따라서 항산화제에 의한 BBB의 보호는 재관류 손상을 예방할 수 있는 잠재적인 방법으로 간주되었습니다.
BBB의 분해 외에도 I/R은 신경혈관 손상 및 신경세포 사멸을 초래할 수 있습니다(Jung et al., 2010). 뇌졸중 동안 증가된 신경 세포 사멸은 산화 스트레스로 인해 발생할 수 있으며(Chi et al., 2018), 수많은 연구에서 ROS가 뇌졸중 중증도와 신경학적 손상을 악화시키는 것으로 나타났습니다(Kondo et al., 1997; Crack et al., 2001; 크랙 등, 2006). 임상 시험에서 만족스러운 결과를 얻지는 못했지만 신경 보호는 여전히 급성 허혈성 뇌졸중의 치료를 위한 유망한 전략입니다(Moretti et al., 2015). 따라서 뇌졸중 치료에 효과적인 신경 보호 약물을 찾는 것은 뇌졸중 환자에게 도움이 됩니다.
중의학(TCM)은 신체의 내부 불균형에 개입하기 위한 조치를 취합니다(Gaire, 2018). 허혈성 뇌졸중의 복잡한 발병기전으로 인해 TCM과 그 활성 성분의 다인성 효과는 뇌졸중 치료에 중요한 역할을 합니다. Cistanche deserticola YC Ma는 몽골과 중국 북서부의 건조 또는 반건조 지역에 널리 퍼져 있으며 중국에서 1000년 이상 건망증 및 우울증과 같은 다양한 질병의 치료를 위해 널리 사용되는 한약재입니다. . 현대 약리학 연구에 따르면 C. deserticola의 조 추출물은 학습 및 기억 기능 향상, 신경 보호, 면역 강화, 항산화, 항노화 및 항피로 효과와 같은 다양한 약리 활성을 나타냈습니다(Ko and Leung, 2007; Wang et al. , 2012; Li 등, 2015). C. deserticola의 화학적 분석은 주요 성분이 페닐에타노이드 배당체, 이리도이드 배당체, 다당류 및 올리고당을 포함한다는 것을 보여주었습니다(Jiang and Tu, 2009). 그러나 뇌 보호를 위한 C. deserticola의 활성 성분은 명확하지 않습니다.
C. deserticola의 신경 보호 특성은 알츠하이머병뿐만 아니라 뇌졸중 및 우울증과 같은 인지 관련 질병에 대한 치료 가능성을 암시합니다(Wang et al., 2017). 그러나 활성 성분 및 작용 메커니즘을 포함하여 뇌졸중에 대한 C. deserticola의 영향에 대한 연구는 매우 제한적입니다.
현재 작업에서 우리는 대뇌 I/R 손상에 대한 C. deserticola의 세 가지 추출물, 총 배당체(TG, 페닐에타노이드 배당체 및 기타 배당체), 다당류(PS) 및 올리고당(OS)의 보호 효과를 조사했습니다. 우리의 연구 결과는 C. deserticola의 정확한 임상 적용에 기여하고 허혈성 뇌졸중 치료를 위한 후보 약제를 제공할 수 있습니다.
재료 및 방법
화학물질 및 시약
Cistanche deserticola의 줄기는 내몽고의 Alashan에서 구입했으며 저자 중 한 명(P.-F. Tu)이 확인했습니다. TG, PS 및 OS는 이전에 보고된 방법(Gao et al., 2015)에 따라 준비되었습니다. TG의 정량 분석은 앞서 기술한 바와 같이(Li et al, 2019) 고성능액체크로마토그래피(HPLC)로 수행하였으며, 그 크로마토그램은 그림 1에 나타내었다. TG의 주성분은 echinacoside, tubuloside A, acteoside, isoacteoside 및 2'-아세틸락티오사이드; 그 함량은 각각 163.05mg/g, 4.125mg/g, 41.66mg/g, 22.655mg/g 및 12.045mg/g이다. PS와 OS의 함량은 HPLC와 페놀-황산 분석으로 각각 69.42%와 65.24%였다(Zhang A. et al., 2018; Shi et al, 2019).
echinacoside(A0282), tubuloside A(A0942), acteoside(A0280), isoacteoside(A0281) 및 2'-acetylacteoside(A0943)의 표준 참조는 Chengdu Must Biotechnology(Sichuan, China)에서 구입했습니다. 모든 표준의 순도는 98% 이상입니다. Nissl 염색 H&E 키트는 Boster(Wuhan, China)에서 구입했습니다. Edaravone(T0407-1)은 Target Mol(중국 상하이)에서 구입했습니다. 토끼 방지 쥐 MAP-2(ab32454), Nrf-2(ab31163), PDGFRb(ab32570), Keap-1(ab66620) 및 마우스 쥐 방지 CD31(ab24590)을 구입했습니다. Abcam Inc(미국 메사추세츠주 케임브리지)에서. 토끼 항 쥐 Claudin5(BS1069), ZO-1(BS9802M) 및 Occludin(BS72035)은 Bioworld Technology(중국 난징)에서 구입했습니다. Cell Signaling Technology Inc.(Boston, MA, USA)는 토끼 항쥐 Synapsin-1(SYN,5297T), PSD95(3450T), a-Smooth Muscle Actin(a-SMA,19245T)의 공급원이었습니다. GAPDH(HRP-60004)는 Proteintech Group, Inc.(미국 시카고)에서 구입했습니다.
2차 항체는 Zhongshan Golden Bridge Biotechnology(중국 베이징)에서 공급받았다. Hoechst 33258은 Beyotime(중국 장쑤)에서 구입했습니다.
동물
Sprague-Dawley 쥐(수컷, 체중 250-300g)는 Vital River Laboratory Animal Technology(중국 베이징)에서 구입하여 12시간 명/암 주기로 유지되는 에어컨이 설치된 방에 보관했습니다. 모든 동물 실험은 동물 연구 ARRIVE 지침(Kilkenny et al., 2010; McGrath et al., 2010)에 의해 수행되었으며 Peking University Health Science Center의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(LA2019123)의 승인을 받았습니다.
동물 실험 프로토콜
쥐는 이전에 설명한 대로 MCAO/R을 받았습니다(Wang et al., 2018). 간략히, 좌측 총경동맥(CCA), 외경동맥(ECA) 및 내경동맥(ICA)을 노출시키고 3-0 나일론 모노필라멘트 봉합사를 ECA에서 ICA로 중간에 도달할 때까지 삽입하였다. 대뇌 동맥 (MCA). MCA 폐색 1.5시간 후, 필라멘트를 제거하여 재관류를 시뮬레이션했습니다. 수술 중 모든 쥐의 체온은 37.0도를 유지하였다.
의약청
설명된 대로(Jiang et al., 2014): 정상 그룹(NOR); 모델 그룹(MOD); edaravone 그룹(양성 약물, 6mL/kg, EDI); TG 그룹(280 mg/kg, TGs); PSs 그룹(280 mg/kg, PSs) 및 OSs 그룹(280 mg/kg, OSs). TG, PS 및 OS는 14일 동안 MCAO/R 후 하루에 한 번 투여되었습니다. NOR 및 MOD 그룹은 생리 식염수로 처리되었습니다. 동물 수는 표 1에 나와 있습니다.
체중 및 수정된 신경학적 결핍 점수(NSS) 측정
ADVENTURE™ 디지털 저울(OHAUS, New Jersey, USA)을 사용하여 14일째에 체중을 모니터링하였다. FJ Wang(Wang et al., 2018)이 기술한 방법에 따라 질량을 약간 수정하여 평가했습니다.
2, 3, 5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC) 염색
이전에 설명한 대로 경색 부피를 측정했습니다(Wang et al., 2015). 간단히 말해서, 뇌는 7개의 동일한 간격의 관상 블록(2mm)으로 분할되었습니다. 이 섹션은 37도에서 15분 동안 2% TTC(Coolaber, Beijing, China)로 염색되었습니다. 경색 부피(백분율) =(동측 허혈 반구 부피 - 반대측 허혈 반구 부피)/대측 허혈 반구 부피 × 100.
Nissl 및 H&E 염색
쥐를 깊이 마취시킨 후 두개골에서 전체 뇌를 빠르게 제거하고 4% 파라포름알데히드를 사용하여 고정하고 파라핀 왁스에 묻혀 7μm 두께의 조각으로 절단했습니다. 섹션은 Nissl과 H&E로 염색되었습니다. 이 연구에서는 광학 현미경으로 각 조직 표본에서 6개의 무작위 200 × 200 µm 필드를 캡처했습니다. Nissl의 시신 수는 IPP 소프트웨어 버전 6.0(Media Cybernetics, Bethesda, USA)으로 계산되었습니다.
에반스 블루 분석
쥐에게 MCAO/R 후 2% EB(Coolaber Science & Technology Co., LTD)를 주사했습니다. 2시간 후, 쥐를 마취시킨 다음 전체 뇌를 빠르게 제거하고 아세톤에서 균질화했습니다. 상청액은 800 TS 흡광도 판독기(BioTek, USA)로 620 nm에서 분석하였다.
Catalase(CAT), Superoxide Dismutase(SOD), Malondialdehyde(MDA), Glutathione Peroxidase(GSH-Px) 활성 측정
모든 혈청 시료는 4도에서 15분 동안 4000 × rpm에서 원심분리한 후 제조업체의 지침(Jiangsu Meimian Industrial Co., 주식 회사, 중국).
웨스턴 블로팅 분석
각 쥐로부터 채취한 뇌 조직(100 mg)을 RIPA 용해 완충액에 균질화 및 용해시킨 후 BCA 키트(Beijing TransGen Biotech Co., Ltd.)를 사용하여 단백질 농도를 검출하기 위해 분석하였다. 조직 총 단백질을 10% SDS-PAGE 젤에 적재하고 니트로셀룰로스 막으로 옮겼습니다. 5% 탈지유를 사용하여 멤브레인을 차단한 다음 4도에서 1차 항체와 함께 밤새 배양했습니다. 그런 다음 멤브레인을 이차 항체와 함께 배양했습니다. Kodak Digital Imaging System(5200 Multi, Tanon, China)을 사용하여 Western blot 분석을 분석하였다.
면역 형광 분석
CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, occludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, Nrf-2 및 Keap-1에 대한 면역형광 염색을 수행하였다. Nrf-2, CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, occludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2 및 Keap-1에 대한 1차 항체를 1로 희석했습니다. :200 및 1:100. Alexa Flur 488 마우스 항-토끼 IgG 및 로다민(TRITC) 염소 항-토끼 IgG의 2차 항체는 모두 1:200으로 희석되었습니다. 핵은 Hoechst 33258로 염색했습니다. 이미지는 Vectra® Polaris™ Automated Quantitative Pathology Imaging System(PerkinElmer, USA)을 사용하여 캡처했습니다. IPP 소프트웨어 버전 6.0을 사용하여 단백질 발현을 분석했습니다.
통계 분석
모든 데이터는 평균 ± SD로 설명되었습니다. SPSS 소프트웨어 버전 22.0는 통계 분석을 위해 수행되었습니다. 서로 다른 그룹을 비교할 때 단방향 ANOVA를 사용했습니다. P < 0.05는 통계적 차이로 간주되었습니다.
결과
TG는 MCAO/R 쥐의 체중 증가 및 뇌 손상 감소
TG, PS, Oss 및 EDI로 치료한지 14일 후에 I/R 쥐의 체중, 신경학적 결손 및 경색 부피를 평가했습니다. 결과는 MOD 그룹의 체중이 크게 감소한 반면 TG, PS 및 EDI 그룹의 체중 감소가 증가한 것으로 나타났습니다(그림 2A). 신경학적 결손 점수는 EDI와 TG에 의해 상당히 낮아졌습니다(그림 2B). NOR 그룹 쥐의 뇌 절편은 진한 빨간색이었고 경색이 없었지만 MOD 그룹의 쥐는 큰 동측 뇌경색을 보였다. TG 처리 후, 경색 부피가 상당히 감소했습니다(그림 2C, D). PS 및 OS 처리는 위의 지수에 뚜렷한 영향을 미치지 않았습니다. 위의 데이터는 TG가 I/R로 유발된 뇌 손상을 현저하게 완화할 수 있지만 PS와 OS는 그렇지 않다는 것을 보여주었습니다.
TG는 MCAO/R 쥐의 조직병리학적 손상을 개선합니다.
조직병리학적 손상에 대한 TG, PS 및 OS 처리의 일부 효과를 확인하기 위해 H&E 염색을 수행하여 병리학적 손상을 확인했습니다. NOR 그룹에서 뇌의 조직형태학적 구조는 규칙적으로 배열되었다. TG 그룹의 형태 변화는 MOD 그룹의 변화보다 적었습니다. 그러나 PS 및 OS 처리 그룹은 형태 변화가 크게 개선되지 않았습니다(그림 3).
TG는 I/RI 유도된 쥐 후 신경 손상을 약화시킵니다.
Nissl 염색은 허혈 부위의 반음영에서 뉴런의 조직병리학적 변화를 보여주었다. 그림 4에서 볼 수 있듯이 정상 뉴런은 명확한 핵소체와 온전한 구조를 가졌습니다. MOD 그룹에서 뉴런은 세포간 공간이 확대되었습니다. 멋진 몸은 사라지고, 쪼그라들고, 짙게 물들었습니다. 그러나 이러한 변화는 EDI, TG 및 PS 그룹에서 거의 관찰되지 않았습니다. 이러한 결과는 TG 및 PS가 허혈/재관류 유발 신경 손상을 상당히 약화시킬 수 있음을 보여줍니다.
TG는 I/RTreated 쥐 후 BBB 중단을 약화
Evans blue assay는 BBB 투과성의 변화를 연구하는 고전적인 방법입니다. 실험 결과, MOD 그룹에서 증가된 Evans blue가 관찰된 반면, TG 및 EDI 처리된 쥐에서는 Evans blue가 상당히 감소한 것으로 나타났습니다. 또한 PS와 OS 요법 그룹 간에는 유의한 차이가 없었습니다(그림 5). 이러한 결과는 TG가 BBB 중단을 상당히 약화시킬 수 있음을 시사합니다.
TG는 I/R 손상 쥐에서 혈관신생을 촉진합니다.
더 최근의 연구에서는 혈관신생이 급성 허혈성 뇌졸중 후 신경학적 기능 회복 및 예후 결과에 중요한 역할을 한다는 것을 보여줍니다(Yuen et al., 2015). TG, PS 및 OS가 혈관 신생에 미치는 영향을 평가하기 위해 CD31 및 a-SMA를 사용하여 모세관 수를 정량화했습니다. Immunofluorescence 염색은 MOD 그룹이 정상적인 쥐와 비교하여 I / R 쥐의 허혈 영역의 반영에서 CD31 (그림 6A, B) 및 aSMA (그림 6C, D)의 발현을 현저하게 감소시키는 것으로 나타났습니다. 이 결과는 I/R이 허혈성 반구의 반음부 피질에서 혈관 손상을 일으킬 수 있음을 보여줍니다. 그러나, TG 및 EDI 처리는 CD31 및 a-SMA의 발현 증가에 의해 나타난 바와 같이 모세혈관 밀도, 혈관신생 및 동맥신생을 현저하게 증가시켰다. 이러한 결과는 TG가 I/R 쥐의 허혈 반음부에서 혈관신생을 촉진할 수 있지만 PS와 OS는 그렇지 않다는 것을 시사합니다.
TG는 I/R 손상 쥐에서 단단한 접합 단백질의 발현을 증가시킵니다.
BBB 중단은 뇌 수분 함량과 조직 팽창을 증가시켜 뇌 손상을 일으킬 수 있습니다. 단단한 접합 단백질은 BBB의 중요한 구조적 구성 요소입니다(Tenreiro et al., 2016; Jiang et al., 2018). 뇌졸중 후 TG, PS 및 OS 치료가 BBB 무결성에 영향을 미칠 수 있는지 여부를 테스트하기 위해 면역 형광 분석을 통해 ZO-1, claudin-5 및 occludin의 발현을 수행했습니다. 결과는 claudin-5, occludin 및 ZO-1의 발현이 MOD 그룹에서 눈에 띄게 감소했음을 나타냅니다. 그러나 투여 14일 후에는 상당히 증가하였다. PS 및 OS 그룹은 이러한 단백질 발현에 유의한 변화를 나타내지 않았습니다(그림 7). 이러한 데이터는 TG가 밀착 접합 단백질 발현을 조절하고 I/R 손상 후 BBB 무결성을 유지할 수 있음을 나타냅니다.
TG는 I/R 부상 쥐의 모세혈관에 대한 Pericyte Coverage를 증가시킵니다.
모세혈관의 Pericyte 범위는 BBB 완전성을 유지하는 데 중요한 역할을 합니다(Armulik et al., 2010; Daneman et al., 2010). 따라서 우리는 TG, PS 및 OS 처리에 의해 pericyte 적용 범위가 증가할 수 있는지 여부를 테스트했습니다. Immunofluorescence intensity 분석 결과 PDGFRb와 CD31 발현 모두 MOD군에서 극적으로 감소하였다. I/R 쥐에 TG를 투여하면 PDGFRb 및 CD31의 발현 강도가 상당히 회복되거나 심지어 증가했지만 PS 및 OS 처리 그룹에서는 차이가 관찰되지 않았습니다(그림 8). 따라서 TG의 치료는 pericyte coverage를 상당히 증가시킬 수 있습니다. 이러한 결과는 TG가 I/R 후에 BBB의 무결성을 유지할 수 있음을 추가로 확인했습니다.
TG는 I/R 부상 쥐의 신경 리모델링을 촉진합니다.
수많은 연구에 따르면 뇌졸중 후 신경 발생은 기능 회복을 크게 향상시킬 수 있습니다(Grefkes and Ward, 2014; Zhang et al., 2019). Synaptophysin(SYN), postsynaptic density 95(PSD-95) 단백질 및 microtubule-associated protein 2(MAP-2)를 마커로 사용하여 피질의 ischemic penumbra에서 신경 가소성을 검사했습니다. I/R 손상 쥐의 신경 발생에 대한 TG, PS 및 OS 처리의 효과를 평가하기 위해 SYN, PSD95 및 MAP-2 발현에 대한 면역형광 및 웨스턴 블롯을 수행했습니다. 그림 9 및 10에서 볼 수 있듯이 재관류 14일 후 I/R 쥐의 SYN, PSD95 및 MAP-2 발현 수준은 NOR 쥐에 비해 감소한 반면 TG 및 PS 치료는 상당히 증가할 수 있습니다. 발현 수준을 조절합니다. OS 그룹은 MOD 그룹에 비해 큰 변화가 없었습니다. 데이터는 TG 및 PS 치료가 I/R 손상 후 신경 리모델링을 극적으로 촉진할 수 있음을 나타냅니다.
TG는 I/R 부상 쥐에서 Nrf-2를 변경하고-1 식을 유지합니다.
산화 스트레스는 I/R 손상의 주요 병원성 메커니즘입니다(Ya et al., 2018; Yu et al., 2018). 연구를 통해 Nrf-2가 항산화 반응의 마스터 조절자임을 확인했습니다(Thompson et al., 2015). I/R 손상 후 Nrf-2 및 Keap-1 매개 산화 반응을 조사하기 위해 Keap-1의 핵 전좌뿐만 아니라 세포질 발현을 평가했습니다. 한편, I/R 손상 래트의 뇌 조직에서 Nrf-2의 발현도 분석하였다(도 10 및 11). 면역형광분석 결과 Nrf-2는 NOR군에서 주로 세포질에 위치하는 것으로 나타났다. TGs군에서는 세포질 국소화에서 Nrf-2의 발현이 하향조절되었으나 핵에서는 상향조절되었으며, Keap-1 발현의 감소도 관찰되었다. 데이터는 TG의 뇌 보호가 Nrf-2 및 Keap-1의 변조와 연관될 수 있음을 보여주었습니다.
TG는 I/R 손상 쥐의 뇌 조직 산화 스트레스를 약화시킵니다.
TG의 항산화 효과를 확인하기 위해 I/R 손상 쥐에서 SOD, CAT, GSH-Px 및 MDA의 활성을 평가하였다. Figure 12에서 MDA의 함량은 MOD군에서 현저하게 증가함과 동시에 SOD, CAT, GSH-Px의 활성은 정상 쥐에 비해 감소하였다. 반대로, TGs 처리는 MDA 함량의 현저한 감소와 SOD, CAT 및 GSH-Px의 활성 증가로 이어졌습니다. 이러한 결과는 TG의 항산화 활성을 추가로 확인시켜 주었다.
논의
많은 연구에서 TCM C. deserticola가 학습 능력, 기억력 및 면역 강화와 같은 광범위한 생물학적 활성을 가지고 있음을 시사합니다(Dong et al., 2007; Jiang and Tu, 2009; Wang et al., 2017; Xia et al., 2018). 그러나 신경 보호를 위한 C. deserticola의 활성 성분은 아직 명확하지 않습니다. 현재 작업은 MCAO/R 모델에서 허혈성 뇌졸중에 대해 C. deserticola의 활성 구성 요소를 스크리닝하는 것을 목표로 합니다. C. deserticola의 세 가지 추출물(TG, PS 및 OS)을 사용하여 MCAO/R 쥐에 미치는 영향과 가능한 메커니즘을 평가했습니다. 뇌졸중은 흔한 급성 뇌혈관 질환이다. 역학 연구에 따르면 뇌졸중은 여성보다 남성에게 더 흔합니다(Sealy-Jefferson et al., 2012; Guzik and Bushnell, 2017).
따라서 우리 실험에서는 수컷 쥐를 테스트에 채택했습니다. 우리의 결과는 I/R 유도가 산화 스트레스와 경색 부피를 가속화하여 BBB를 파괴하고 신경 및 뇌혈관 손상을 유발한다는 것을 입증했습니다. 스크리닝 후, TG는 경색 부피를 감소시키고 신경 리모델링 및 혈관신생을 촉진하는 것으로 밝혀졌습니다. 또한, TG는 I/R 손상 후 BBB 무결성을 유지하는 것으로 관찰되었습니다. 반대로 PS와 OS는 I/R 손상을 크게 완화하지 않습니다. 따라서 TG는 잠재적으로 Nrf2/Keap-1 경로 활성화를 통해 신경 리모델링, 혈관신생 및 BBB 무결성을 촉진하여 신경보호를 위한 C. deserticola의 주요 활성 부분으로 간주됩니다.
효과적인 측부 순환의 확립이 경색 및 허혈성 반음부의 형성을 피하는 데 매우 중요하며 허혈성 뇌졸중의 초기 단계에서 중요한 치료라는 증거가 늘어나고 있습니다(ElAli, 2016; Iwasawa et al., 2016). 허혈성 경색 후 혈관 내피 세포 및 평활근 세포의 증식은 측부 순환의 확립을 결정합니다.
그러나 허혈 모델에는 공통적인 현상이 있습니다. 즉, 산화 스트레스가 뇌 미세혈관에 광범위하게 존재한다는 것입니다. 연구 데이터에 따르면 많은 항산화제가 BBB의 기능과 혈관신생 특성을 방해할 수 있습니다(Mentor and Fisher, 2017). CD31 및 a-SMA는 각각 혈관 내피 세포 및 평활근 세포의 마커입니다(Saboor et al., 2016). 위에서 언급한 C. deserticola 추출물의 세포 증식 효과를 알아보기 위해 뇌허혈 반음영동 균질액에서 CD31과 a-SMA의 발현을 조사하였다. 우리의 데이터는 TG가 CD31 및 a-SMA의 발현을 현저하게 향상시켰음을 보여주었습니다. 그러나 PS와 OS 그룹 간에는 큰 차이가 없었습니다. 따라서 우리는 TG가 CD31 및 a-SMA의 발현을 증가시켜 혈관신생을 촉진함으로써 뇌 손상을 감소시킬 수 있는 반면 PS 및 OS는 뇌 손상으로부터 그러한 보호를 제공하지 않는다고 추론했습니다. 이러한 결과는 TG만이 대뇌 I/R 손상을 예방할 수 있음을 추가로 확인했습니다.
허혈성 뇌졸중은 신경 가소성의 손상이나 뇌 영역의 리모델링으로 인한 뇌 허혈의 결과로 생각할 수 있습니다. 뇌졸중 환자의 대다수는 신경학적 결손을 앓고 있다. 신경 발생 활성화는 뇌졸중 환자의 신경학적 기능을 개선하기 위한 유망한 전략입니다(Cramer and Chopp, 2000). 신경 발생은 뇌 I/R 손상 후 신경학적 기능 회복에 직접적으로 참여합니다(Zhang et al., 2019). 이전 연구에서는 TG가 해마 피라미드 세포의 생존율을 향상시키고 신경 발생을 유도할 수 있음을 보여줍니다(Lian et al., 2017). 산화 스트레스는 파킨슨병, 뇌졸중 등과 같은 많은 질병 동안 뉴런의 손실을 유발합니다(Duan and Si, 2019; Singh et al., 2019). Nrf-2는 주로 SOD, MDA, CAT 및 글루타밀 시스테인 리가제 등을 포함하여 프로모터 영역에서 신경 보호와 관련된 많은 유전자를 전사합니다(Satoh et al., 2006). 시냅스 형성 및 신경 전달과 밀접한 관련이 있는 SYN, PSD-95 및 MAP-2 단백질은 허혈 반음부 영역에서 연구 신경 가소성의 마커로 간주될 수 있습니다. 연구 후, 우리는 TG를 사용한 치료가 PSD95, SYN 및 MAP-2의 발현을 크게 증가시킬 수 있음을 발견했으며, 이는 TG의 대뇌 보호가 I/R 동안 강화된 신경 가소성과 상관관계가 있음을 나타냅니다. 다만, OS군은 물론이고 PS군 간에 확연한 차이가 없다는 점은 아쉽다. 이러한 결과는 TG가 대뇌 I/R 손상 후 신경가소성을 향상시킬 수 있음을 나타냅니다.
뇌졸중 환자에 대한 영상 연구는 BBB 기능 장애가 허혈성 뇌의 현저한 속성으로 생각할 수 있음을 보여주었습니다(Bang et al., 2007). 세포질 단백질, 막관통 단백질 및 모세혈관 내피 세포 사이의 접합부 접착 분자로 구성된 TJ는 BBB 무결성을 유지하는 데 매우 중요합니다(Ye et al., 2019). 그 중 ZO-1, claudin-5 및 occludin은 TJ에서 가장 중요한 단백질입니다. 허혈에 의해 유도된 BBB의 투과성 증가는 일반적으로 ZO-1, claudin-5 및 occludin의 변경과 상관관계가 있다는 증거가 늘어나고 있습니다(Cao et al., 2016a; Page et al., 2016; Yu 외, 2017; 리우 외, 2018).
이 작업에서 결과는 TG가 MCAO로 유도된 뇌 조직에서 ZO-1, claudin-5 및 occludin 단백질의 발현을 크게 증가시킬 수 있지만 PS나 OS 모두 그렇지 않음을 보여주었습니다. BBB는 대뇌 내피 세포로 구성되며 혈관주위세포와 밀접하게 연관되어 있습니다(Nyul-Toth et al., 2016). Pericytes는 BBB 무결성에 매우 중요합니다(Bell et al., 2010). 허혈성 뇌졸중은 급성기의 뇌 내피 세포에서 pericyte death 및 분리를 유발하여 미세 혈관 구조를 불안정하게 만들고 BBB 특성을 변경합니다(Zechariah et al., 2013). 우리의 데이터는 TG가 모세혈관의 pericyte 범위를 증가시키고 ZO-1, claudin-5 및 occludin의 발현 수준을 증가시킬 수 있음을 보여주었습니다. 이러한 현상은 TG가 대뇌 I/R 손상 후 BBB 무결성을 효과적으로 보호할 수 있음을 입증했습니다. 요약하면, TG는 혈관신생 촉진, 신경 가소성 개선, BBB의 무결성 유지와 같은 여러 방식으로 뇌 손상을 약화시킬 수 있습니다.
그런 다음 TG의 뇌 보호 기본 메커니즘을 탐색하기 위해 신호 경로를 조사했습니다. I/R 손상 과정은 다인자적이며 따라서 수많은 기전이 병인에 관여합니다. 산화 스트레스는 BBB 구조 손상, 혈관 내피 기능 장애 및 허혈성 신경 손상의 악화와 같은 I/R 유발 뇌 손상(Suda et al., 2013)에 기여하는 근본적인 위험 요소입니다(Xiong et al., 2015; Caglayan 외, 2019; Priestley 외, 2019).
따라서 산화 스트레스는 I/R 유발 뇌 손상에서 매력적인 치료 표적이 되었습니다. 핵 인자 E2-관련 인자-2(Nrf-2)에 의해 매개되는 2단계 효소는 뉴런이 산화 스트레스로부터 자신을 보호하는 중요한 수단으로 간주되었습니다(Suzuki 및 Yamamoto , 2015; Ya et al., 2018). 증가하는 증거는 I/R 동안 Nrf-2의 활성화가 신경 보호를 위한 잠재적인 치료 표적임을 나타냅니다(Ding et al., 2015; Zhang R. et al., 2017). 내인성 항산화 방어의 중요한 조절자인 Nrf-2는 heme oxygenase 1(HO-1) 및 NAD(P)H quinone oxidoreductase 1(NQO1)과 같은 다른 항산화 효소의 수준을 매개합니다. SOD, CAT, GSH 및 MDA(Siow et al., 2007; Ding et al., 2014). 또한 Nrf-2는 혈관신생에서 중요한 조절자 역할을 합니다. 본 연구는 Nrf-2가 혈관 발달 과정에서 상당히 향상되고 활성화될 수 있음을 보여줍니다(Wei et al., 2013).
이전에 기술된 바와 같이(Jiang and Tu, 2009), TG는 echinacoside, tubuloside A, acteoside, isoacteoside 및 2'-acetylacteoside와 같은 많은 생리 활성 화합물을 함유하고 있으며, 이들 중 일부는 대뇌 I/R 손상 후 신경 보호 기능을 나타냈습니다. 펭 외, 2016). Echinacoside는 항산화, 항노화, 신경보호, 항염증, 반흔화 촉진, 간보호, 골형성 촉진, 항종양 작용 등 많은 약리작용을 가지고 있다(Yu et al., 2016; Li et al., 2018; Zhang Y. et al., 2018; Ji et al., 2019; Xu et al., 2019).
최근 에키나코사이드는 중추신경계에서 강력한 항산화제로 확인되었습니다(Lu et al., 2016). Echinacoside는 허혈성 뇌 손상에서 MDA 함량을 줄이고 SOD 및 GSHPx의 활동을 개선할 수 있으며, 분자 도킹 분석은 echinacoside가 Keap-1에 결합하여 Nrf-2 핵 전위를 유도할 수 있음을 보여주었습니다(Li et al. 알., 2018). 연구 Xia는 액티오사이드가 산화 스트레스를 완화함으로써 MCAO/R 쥐의 신경학적 결손을 개선하기 위해 경색 부피와 뇌 수분 함량을 감소시킬 수 있음을 보여주었습니다(Xia et al., 2018). 다른 연구에서는 isoacteoside가 H2O2- 처리된 V79-4 세포에서 세포 항산화 효소, SOD 및 CAT의 활성을 증가시킬 수 있음을 입증했습니다(Chae et al., 2005). TG에 포함된 활성 화합물에 대한 위의 보고를 기반으로 TG가 항산화 경로를 통해 허혈성 뇌졸중을 예방할 수 있다고 추론할 수 있습니다.
저는 Nrf2/ARE 경로(Li et al., 2018)를 통해 PC12 세포에서 H2O2- 유도된 세포사멸에 대한 페닐에타노이드 배당체(PhGs)의 신경 보호 효과에 대해 보고했습니다. 이러한 PhG는 Nrf2 핵 전좌를 유발하고 HO-1, NQO1, 글루타메이트-시스테인 리가제 촉매 소단위(GCLC) 및 글루타메이트-시스테인 리가제 수식어 소단위(GCLM)의 발현을 증가시킴으로써 상당히 억제되었습니다(Li et al., 2018 ; 공 외, 2019).
따라서 이러한 결과는 Nrf-2/ARE 경로가 신경 세포에 대한 PhG 매개 보호 효과에 중요한 역할을 한다는 것을 시사합니다. 유사하게, 이 연구에서 우리는 TG가 I/R 쥐에서 MDA 수준을 감소시키고 SOD, CAT 및 GSH-Px 수준을 증가시킬 수 있음을 발견했습니다. 한편, TG는 핵에서 Nrf2 발현을 상향 조절하고, 세포질에서 상응하는 발현을 하향 조절하며, Keap-1 발현을 상당히 감소시킬 수 있습니다. 따라서 Nrf-2/Keap-1 경로는 TG 매개 신경 보호 효과에 관여할 수 있습니다. 이 경로의 추가 검증은 향후 산소-포도당 박탈/재산소화 손상 모델을 사용하여 체외 세포 배양에서 수행될 것입니다. 또한 본 연구에서는 C. deserticola 추출물을 14일 동안 지속적으로 투여하였다. 성인 신경 발생은 재관류 14일 동안 신경 보호 효과의 해석에 영향을 미치기 때문에 신경 발생은 CT의 신경 보호 효과를 탐색하는 현재 실험 설계에서 제외할 수 없습니다. 이것이 우리 연구의 한계입니다.
결론적으로, C. deserticola의 TG는 I/R 손상 쥐에서 혈관 신생 및 신경 발생을 향상시킬 수 있을 뿐만 아니라 BBB의 무결성을 유지할 수 있지만 PS 및 OS는 그렇지 않습니다. 효과는 Nrf-2/Keap-1 경로의 활성화에 의해 조정될 수 있습니다.
데이터 가용성 진술
저자는 이 기사의 결론을 뒷받침하는 원시 데이터를 자격을 갖춘 모든 연구자에게 과도한 예약 없이 제공할 것입니다.
윤리 선언문
이 작업은 북경 대학교 동물 실험 지침에 따라 수행되었습니다. 연구 프로토콜은 북경 대학 건강 과학 센터(LA2019123)의 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다.
저자 기여
YJ, KZ 및 PT가 연구를 설계했습니다. FW가 연구를 수행했습니다. FW와 RL은 데이터를 분석했습니다. FW, RL 및 JC는 원고 및 HPLC 분석을 작성했습니다. JC, KZ, YJ 및 PT가 원고를 수정했습니다.
자금 조달
이 연구는 국가 핵심 연구 개발 프로젝트(2017YFC1702400, 2019YFC1711000), 중국 국립 자연과학 재단(81773932), 중국 국가 핵심 기술 R&D 프로그램 "신약 혁신"(2018ZX09711001-008-003)의 지원을 받았습니다. ).
참조
Alluri, H., Anasooya Shaji, C., Davis, ML 및 Tharakan, B. (2015). 혈액-뇌 장벽 기능 장애를 연구하기 위한 체외 허혈-재관류 손상 모델로서의 산소 포도당 결핍 및 재산소화. J. 비스. 특급 99, e52699. 도이: 10.3791/52699
Armulik, A., Genove, G., Mae, M., Nisancioglu, MH, Wallgard, E., Niaudet, C. 등. (2010). Pericytes는 혈액 뇌 장벽을 조절합니다. 자연 468 (7323), 557–561. 도이: 10.1038/nature09522
Bang, OY, Buck, BH, Saver, JL, Alger, JR, Yoon, SR, Starkman, S., 외. (2007). T2*-투과성 자기공명영상을 이용한 재개통술 후 출혈성 변형 예측. 앤. 뉴롤. 62 (2), 170–176. doi: 10.1002/ana.21174
Bell, RD, Winkler, EA, Sagare, AP, Singh, I., LaRue, B., Deane, R. 등. (2010). Pericytes는 성인 뇌와 뇌 노화 동안 주요 신경 혈관 기능과 신경 표현형을 제어합니다. 뉴런 68(3), 409–427. 도이: 10.1016/j.neuron.2010.09.043
Caglayan, B., Kilic, E., Dalay, A., Altunay, S., Tuzcu, M., Erten, F. 등. (2019). Allyl isothiocyanate는 생쥐의 외상성 뇌 손상에서 Nrf2/HO-1 및 NF-kappaB 경로를 조절하여 산화 스트레스와 염증을 약화시킵니다. 몰. 비올. 46(1), 241–250. 도이: 10.1007/s11033-018-4465-4
Cao, G., Jiang, N., Hu, Y., Zhang, Y., Wang, G., Yin, M., et al. (2016a). Ruscogenin은 TXNIP/NLRP3 inflammasome 활성화 및 MAPK 경로를 억제하여 대뇌 허혈 유발 혈액-뇌 장벽 기능 장애를 약화시킵니다. 국제 J.Mol. 과학. 17(9), 1–17. 도이: 10.3390/ijms17091418
Cao, G., Ye, X., Xu, Y., Yin, M., Chen, H., Kou, J., et al. (2016b). YiQiFuMai 분말 주사는 생쥐의 국소 대뇌 허혈-재관류 손상 후 혈액-뇌 장벽 기능 장애 및 뇌 부종을 개선합니다. 마약 데스. 데브. 그. 10, 315–325. 도이: 10.2147/dddt.S96818
Chae, S., Kim, JS, Kang, KA, Bu, HD, Lee, Y., Seo, YR, et al. (2005). Clerodendron trichotomum의 isoacteoside의 항산화 활성. J. Toxicol. 환경. 건강 A 68 (5), 389–400. 도이: 10.1080/15287390590900750
천승일, 조경주, 김승훈, 감은호, 이재은, 구빈(2016). 아폽토시스 신호 조절 키나아제 1의 차단은 뇌 내피 세포에서 매트릭스 메탈로프로테이나제 9 활성을 약화시키고 허혈성 손상 후 뉴런에서 이어지는 아폽토시스를 약화시킵니다. 앞쪽. 세포신경과학 10, 213. 도이: 10.3389/fncel.2016.00213
지희, 장효, 상태경(2018). 주요 신경 퇴행성 질환의 신경 세포 사멸 메커니즘. 국제 J.Mol. 과학. 19(10), 1–18. 도이: 10.3390/ ijms19103082
Crack, PJ, Taylor, JM, Flentjar, NJ, de Haan, J., Hertzog, P., Iannello, RC 등. (2001). 허혈/재관류 손상에 대한 반응으로 글루타티온 퍼옥시다제-1(Gpx-1) 녹아웃 마우스 뇌에서 경색 크기 증가 및 세포자살 악화. J. Neurochem. 78(6), 1389–1399. 도이: 10.1046/j.1471- 4159.2001.00535.x
Crack, PJ, Taylor, JM, Ali, U., Mansell, A. 및 Hertzog, PJ (2006). 허혈-재관류 손상에 대한 반응으로 글루타티온 퍼옥시다제-1 녹아웃 마우스에서 신경 세포 사멸에 대한 NF-kappaB의 잠재적 기여. Stroke 37 (6), 1533–1538. 도이: 10.1161/01.Str.0000221708.17159.64
Cramer, SC 및 Chopp, M. (2000). 회복은 개체 발생을 요약합니다. 트렌드 신경과학. 23(6), 265–271. 도이: 10.1016/s0166-2236(00)01562-9
Daneman, R., Zhou, L., Kebede, AA 및 Barres, BA (2010). Pericytes는 배아 발생 중 혈액 뇌 장벽 무결성에 필요합니다. 자연 468 (7323), 562–566. 도이: 10.1038/nature09513
Ding, Y., Chen, M., Wang, M., Wang, M., Zhang, T., Park, J., et al. (2014). 허혈성 뇌 손상에서 acetyl-11-keto-beta-Boswellic acid에 의한 신경 보호는 Nrf2/HO-1 방어 경로를 포함합니다. 과학. 4, 7002. doi: 10.1038/srep07002
Ding, Y., Chen, M., Wang, M., Li, Y. 및 Wen, A. (2015). 11- keto-beta-boswellic acid를 사용한 후치료는 대뇌 허혈-재관류 손상을 완화합니다: Nrf2/HO-1 경로를 잠재적 메커니즘으로. 몰. 신경비올. 52(3), 1430–1439. 도이: 10.1007/s12035-014-8929-9
Dong, Q., Yao, J., Fang, JN, Ding, K. (2007). Cistanche deserticola YC Ma의 냉수 추출성 다당류 2종의 구조적 특성 및 면역학적 활성. 탄수화물. 해상도 342(10), 1343–1349. 도이: 10.1016/j.carres.2007.03.017
Donnan, GA, Fisher, M., Macleod, M. 및 Davis, SM(2008). 뇌졸중. 란셋 371(9624), 1612–1623. doi: 10.1016/s0140-6736(08)60694-7
Duan, Q., Si, E. (2019). MicroRNA-25는 마우스 모델에서 Nrf2 신호 전달 경로를 통해 KLF2를 하향 조절함으로써 알츠하이머병에서 Abeta1-42- 유도 해마 뉴런 손상을 악화시킵니다. 제이셀바이오켐. 120(9), 15891–15905. 도이: 10.1002/jcb.28861
엘알리, A. (2016). 허혈성 뇌졸중 후 손상과 복구 사이의 미묘한 균형을 제어하는 신경 혈관 단위 신호 전달의 의미. 신경 재생기. 해상도 11(6), 914–915. 도이: 10.4103/1673-5374.184485
게이어, BP(2018). 허혈성 뇌졸중의 약초: 도전과 전망. 턱. J. 통합. 중간 24(4), 243–246. 도이: 10.1007/s11655-018-2828-2
Gao, Y., Jiang, Y., Dai, F., Han, Z., Liu, H., Bao, Z. 등. (2015). Cistanche deserticola YC Ma의 완하제 성분 연구. 모드. 턱. 중간 17 (04), 19–22 더하기 26. doi: 10.13313/j.issn.1673-4890.2015.4.003
Gong, X., Xu, Y., Ren, K., Bai, X., Zhang, C., and Li, M. (2019). Paraboea martini의 Phenylethanoid glycosides는 과산화수소로 인한 세포 손상으로부터 쥐 갈색 세포종(PC12) 세포를 보호합니다. Biosci. 생명공학. 생화학. 83(12), 2202–2212. 도이: 10.1080/09168451.2019.1654359
Grefkes, C. 및 Ward, NS(2014). 뇌졸중 후 피질 재구성: 얼마나 기능적입니까? 신경과학자 20 (1), 56–70. 도이: 10.1177/ 1073858413491147
구직, A., 부시넬, C. (2017). 뇌졸중 역학 및 위험 요인 관리. Continuum (Minneap Minn) 23 (1, Cerebrovascular Dis), 15– 39. doi: 10.1212/con.0000000000000416
Hu, S., Wu, Y., Zhao, B., Hu, H., Zhu, B., Sun, Z. 등. (2018). Panax notoginseng 사포닌은 PI3K/Akt/Nrf2 항산화 신호 경로의 활성화를 통해 산소-포도당 결핍/재관류 유발 장벽 기능 장애로부터 대뇌 미세혈관 내피 세포를 보호합니다. 분자 23(11), 1–17. 도이: 10.3390/molecules23112781
Iwasawa, E., Ichijo, M., Ishibashi, S. 및 Yokota, T. (2016). 허혈성 뇌졸중의 측부 순환 및 치료 전망의 급성 발달. 신경 재생기. 해상도 11(3), 368–371. 도이: 10.4103/1673-5374.179033
Ji, S., Li, S., Zhao, X., Kang, N., Cao, K., Zhu, Y., et al. (2019). 알츠하이머병에서 페닐에타노이드 배당체, 토레노사이드 B 및 사바티사이드 A의 보호 역할. 특급 그. 중간 17(5), 3755–3767. doi: 10.3892/item.2019.7355
Jiang, Y. 및 Tu, PF (2009). Cistanche 종의 화학 성분 분석. J. Chromatogr. 1216(11), 1970–1979. doi: 10.1016/ j.chroma.2008.07.031
Jiang, T., Yu, JT, Zhu, XC, Wang, HF, Tan, MS, Cao, L. 등. (2014). 급성 메트포르민 전처리는 AMPK 의존적 autophagy의 사전 활성화에 의해 국소 뇌 허혈에 대한 신경 보호를 부여합니다. 브. J.Pharmacol. 171(13), 3146–3157. 도이: 10.1111/bph.12655
Jiang, X., Andjelkovic, AV, Zhu, L., Yang, T., Bennett, MVL, Chen, J. 등. (2018). 허혈성 뇌졸중 후 혈액 뇌 장벽 기능 장애 및 회복. 음식물. 신경비올. 163-164, 144–171. 도이: 10.1016/j.pneurobio.2017.10.001
Jung, JE, Kim, GS, Chen, H., Maier, CM, Narasimhan, P., Song, YS, et al. (2010). 뇌졸중에서 재관류 및 신경혈관 기능장애: 기본 메커니즘에서 신경보호를 위한 잠재적인 전략까지. 몰. 신경비올. 41 (2-3), 172–179. 도이: 10.1007/s12035-010-8102-z
Kilkenny, C., Browne, WJ, Cuthill, IC, Emerson, M. 및 Altman, DG(2010). 생명과학 연구 보고 개선: 동물 연구 보고를 위한 ARRIVE 지침. PLoS Biol. 8(6), e1000412. 도이: 10.1371/저널. 바이오.1000412
고광명, 렁현(2007). 한약재에 의한 ATP생성능력, 항산화작용, 면역조절작용 강화. 턱. 중간 2, 3. 도이: 10.1186/1749-8546-2-3
Kondo, T., Reaume, AG, Huang, TT, Carlson, E., Murakami, K., Chen, SF 등. (1997). CuZn-슈퍼옥사이드 디스뮤타제 활성의 감소는 일시적 국소 대뇌 허혈 후에 신경 세포 손상 및 부종 형성을 악화시킨다. J. Neurosci. 17(11), 4180–4189. doi: 10.1523/JNEUROSCI.17-11-04180
Lee, M., Saver, JL, Alger, JR, Hao, Q., Starkman, S., Ali, LK 등. (2012). 후방 순환 허혈성 뇌졸중의 혈액-뇌 장벽 투과성 장애: 빈도 및 출혈성 변형과의 관계. J. 뉴롤. 과학. 313 (1-2), 142–146. 도이: 10.1016/j.jns.2011.08.048
Li, N., Wang, J., Ma, J., Gu, Z., Jiang, C., Yu, L., et al. (2015). 중등도 알츠하이머병 환자에 대한 원거리 약초 요법의 신경 보호 효과. Evid 기반 보완 대안. 중간 2015, 103985. doi: 10.1155/2015/103985
Li, M., Xu, T., Zhou, F., Wang, M., Song, H., Xiao, X. 등. (2018). H(2)O(2)에 대한 4개의 페닐에타노이드 배당체의 신경 보호 효과 - Nrf2/ARE 경로를 통해 PC12 세포에 유도된 세포사멸. 국제 J.Mol. 과학. 19(4), 1–17. 도이: 10.3390/ijms19041135
Li, R., Zhao, M., Tu, P. 및 Jiang, Y. (2019). 단일 마커에 의한 다중 성분의 정량 분석을 사용하여 Cistanches Herba에서 5개의 페닐에타노이드 배당체를 동시에 측정합니다. J. Chin. 제약 과학. 28 (08), 537–546. 도이: 10.5246/jcps.2019.08.051
Lian, J., Wang, L., Zhao, F., Lin, S., Yan, X., Jia, J. 등. (2017). 노화가 가속화된 마우스에서 시냅스 형태학적 가소성에 대한 cistanche의 배당체의 효과. J. Baotou Medl Coll. 33 (08), 78–80. 도이: 10.16833/j.cnki.jbmc.2017.08.036
Liu, Y., Wang, D., Wang, H., Qu, Y., Xiao, X. 및 Zhu, Y. (2014). HET0016의 뇌허혈/재관류 후 뇌부종 및 혈뇌장벽 기능장애에 대한 보호 효과. 뇌 해상도 1544, 45–53. doi: 10.1016/ j.brainres.2013.11.031
Liu, P., Zhang, R., Liu, D., Wang, J., Yuan, C., Zhao, X. 등. (2018). 영구 국소 허혈의 쥐 모델에서 혈액 뇌 장벽 투과성 및 밀착 연접 단백질 변화에 대한 시간 경과 조사. J. Physiol. 과학. 68 (2), 121– 127. doi: 10.1007/s12576-016-0516-6
Liu, S., Chang, L., Wei, C. (2019). 음파 고슴도치 경로는 생쥐의 허혈성 뇌졸중 후 혈액 뇌 장벽 파괴에 대한 Tongxinluo 캡슐 유도 보호를 중재합니다. 기본 클린. 파마콜. 독성. 124 (6), 660–669. doi: 10.1111/bcpt.13186
Lu, CW, Lin, TY, Huang, SK 및 Wang, SJ (2016). Echinacoside 전압 종속 Ca(2 플러스) 항목 및 쥐 대뇌 피질 신경 말단에 있는 단백질 키나아제 C를 억제하여 글루타메이트 방출을 억제합니다. 국제 J.Mol. 과학. 17(7), 1–13. 도이: 10.3390/ijms17071006
McGrath, JC, Drummond, GB, McLachlan, EM, Kilkenny, C. 및 Wainwright, CL(2010). 동물 관련 실험 보고 지침: ARRIVE 지침. 브. J.Pharmacol. 160(7), 1573–1576. 도이: 10.1111/j.1476-5381.2010.00873.x
멘토, S. 및 피셔, D. (2017). 적극적인 항산화 환원 스트레스는 뇌 내피 세포 혈관 신생 및 혈액 뇌 장벽 기능을 손상시킵니다. 현재 신경 혈관 해상도 14(1), 71–81. 도이: 10.2174/1567202613666161129113950
모레티, A., 페라리, F. 및 빌라, RF (2015). 허혈성 뇌졸중에 대한 신경 보호: 현재 상태 및 과제. 파마콜. 그. 146, 23–34. 도이: 10.1016/j.pharmthera.2014.09.003
Nyul-Toth, A., Suciu, M., Molnar, J., Fazakas, C., Hasko, J., Herman, H. 등. (2016). 대뇌피질과 백질의 혈액-뇌 장벽의 분자 구조 차이: in silico, in vitro, ex vivo 연구. 오전. J. Physiol. 하트서클 피시올. 310(11), H1702–H1714. 도이: 10.1152/ajpheart.00774.2015
Ovbiagele, B. 및 Nguyen-Huynh, MN(2011). 뇌졸중 역학: 질병 메커니즘 및 치료에 대한 이해를 증진합니다. 신경치료제 8 (3), 319–329. 도이: 10.1007/s13311-011-0053-1
Page, S., Munsell, A. 및 Al-Ahmad, AJ (2016). 대뇌 저산소증/허혈은 줄기 세포 유래 인간 뇌 미세혈관 내피 세포에서 밀착 연접 복합체를 선택적으로 파괴합니다. 유체 장벽 CNS 13 (1), 16. doi: 10.1186/s12987-016-0042-1
Peng, F., Chen, J., Wang, X., Xu, C., Liu, T. 및 Xu, R. (2016). 증기 처리에 의한 시스탕케 데저티콜라 슬라이스의 페닐에타노이드 글리코시드 수준, 항산화 활성 및 기타 품질 특성의 변화. 화학. 제약 황소. (도쿄) 64(7), 1024–1030. doi: 10.1248/CPB.c16-00033
Priestley, JRC, Fink, KE, McCord, JM 및 Lombard, JH (2019). Protandim을 사용한 NRF2 활성화는 염으로 인한 혈관 기능 장애 및 미세혈관 희박화를 약화시킵니다. 미세순환, 26(7), e12575. 도이: 10.1111/misc.12575
Saboor, F., Reckmann, AN, Tomczyk, CU, Peters, DM, Weissmann, N., Kaschtanow, A., 외. (2016). Nestin 발현 혈관벽 세포는 폐고혈압의 발생을 촉진합니다. 유로. 호흡. J. 47(3), 876–888. 도이: 10.1183/13993003.00574-2015
Satoh, T., Okamoto, SI, Cui, J., Watanabe, Y., Furuta, K., Suzuki, M., et al. (2006). 친전자성[전자성 교정] II상 유도제에 의한 신경보호를 위한 Keap1/Nrf2 경로의 활성화. 절차 Natl. Acad. 과학. USA 103 (3), 768–773. 도이: 10.1073/pnas.0505723102
Schellinger, PD 및 Kohrmann, M. (2014). 재조합 조직형 플라스미노겐 활성화제로 정맥 혈전 용해를 위한 4.5-시간 시간대가 설정됩니다. Stroke 45 (3), 912–913. 도이: 10.1161/strokeaha.113.002700
Sealy-Jefferson, S., Wing, JJ, Sanchez, BN, Brown, DL, Meurer, WJ, Smith, MA 등. (2012). 뇌졸중 위험의 연령 및 인종별 성별 차이. 젠드메드 9(2), 121–128. 도이: 10.1016/j.genm.2012.02.002
Shi, Z., Wu, Y., Zhu, Y., Cui, Wang, M., Yin, H., et al. (2019). HPLC-ELSD에 의한 Cistanches Herba의 베타인, 만니톨, 과당, 포도당 및 자당의 정량 측정. 모드. 턱. 중간 32(6), 1–11. doi: 10.13313/ j.issn.1673-4890.20190320006
Singh, D., Reeta, KH, Sharma, U., Jagannathan, NR, Dinda, AK 및 Gupta, YK (2019). 쥐의 허혈-재관류 손상에 대한 모노메틸 푸마레이트의 신경 보호 효과: 경색 주위 영역에서 Nrf2/HO1 경로의 역할. 신경 화학. 국제 126, 96–108. 도이: 10.1016/j.neuint.2019.03.010
Siow, RC, Ishii, T. 및 Mann, GE(2007). 4-hydroxynonenal에 의한 항산화 유전자 발현 조절: Nrf2/ARE 전사 경로의 죽상경화 방지 역할. 레독스 담당자 12(1), 11–15. 도이: 10.1179/ 135100007x162167
Suda, S., Katsura, K., Kanamaru, T., Saito, M. 및 Katayama, Y. (2013). Valproic acid는 산화 스트레스와 염증의 억제를 통해 쥐 뇌의 허혈-재관류 손상을 약화시킵니다. 유로. J.Pharmacol. 707 (1-3), 26–31. 도이: 10.1016/j.ejphar.2013.03.020
스즈키, T. 및 야마모토, M. (2015). Keap1-Nrf2 시스템의 분자 기반. 자유 라디칼. 비올. 중간 88(파트 B), 93–100. 도이: 10.1016/j.freeradbiomed.2015.06.006
Tenreiro, MM, Ferreira, R., Bernardino, L. 및 Brito, MA (2016). 손상에 대한 혈액-뇌 장벽의 세포 반응: 뇌 재생을 위한 잠재적인 바이오마커 및 치료 표적. 신경비올. 디스. 91, 262–273. 도이: 10.1016/j.nbd.2016.03.014
Thompson, JW, Narayanan, SV, Koronowski, KB, Morris-Blanco, K., Dave, KR 및 Perez-Pinzon, MA(2015). 허혈성 미토콘드리아 신경 보호로 이어지는 신호 경로. J.Bioenerg. 생물막 47 (1-2), 101–110. 도이: 10.1007/s10863-014-9574-8
Wang, T., Zhang, X. 및 Xie, W. (2012). Cistanche deserticola YC Ma,"사막 인삼": 리뷰. 오전. J. Chin. 중간 40(6), 1123–1141. 도이: 10.1142/s0192415x12500838
왕, X., 왕, S., 왕, J., 구오, H., 동, Z., 차이, L., 외. (2015). 일시적 및 영구적 쥐의 대뇌 허혈 모델에서 주사(동결건조)에 대한 설화통의 신경 보호 효과. Evid 기반 보완 대안. 중간 2015, 134685. doi: 10.1155/2015/134685
왕디, 왕홍, 구엘(2017). 한약재 시스탄슈의 항우울제 및 인지기능 향상 활성. Evid 기반 보완 대안. 중간 2017, 3925903. doi: 10.1155/2017/3925903
왕, FJ, 왕, SX, Chai, LJ, Zhang, Y., Guo, H. 및 Hu, LM (2018). 설솽통 주사(동결건조)는 살비아놀산 동결건조 주사와 결합하여 산화 스트레스의 감쇠를 통해 쥐의 국소 뇌 허혈/재관류 손상을 방지합니다. 악타 파마콜. 죄. 39(6), 998–1011. doi: 10.1038/aps.2017.128Wei, Y., Gong, J., Thimmulappa, RK, Kosmider, B., Biswal, S. 및 Duh, EJ (2013). Nrf2는 내피에서 세포 자율적으로 작용하여 말단 세포 형성 및 혈관 분지를 조절합니다. 절차 Natl. Acad. 과학. 미국 110(41), E3910–E3918. 도이: 10.1073/pnas.1309276110
Xia, D., Zhang, Z., Zhao, Y.(2018). Acteoside는 국소 대뇌 허혈-재관류 손상이 있는 쥐의 산화 스트레스와 신경세포 사멸을 약화시킵니다. 비올. 제약 황소. 41(11), 1645–1651. 도이: 10.1248/bob.b18-00210
Xiong, W., MacColl Garfinkel, AE, Li, Y., Benowitz, LI 및 Cepko, CL(2015). NRF2는 신경 퇴화 및 급성 신경 손상에서 신경 생존을 촉진합니다. J. 클린. 투자하다. 125(4), 1433–1445. 도이: 10.1172/jci79735
Xu, HT, Zhang, CG, He, YQ, Shi, SS, Wang, YL 및 Chou, GX(2019). 슈나벨리아 센티폴리아(Benth.) PDCantino의 페닐에타노이드 배당체는 조골세포의 증식을 촉진합니다. 식물화학 164, 111–121. 도이: 10.1016/j.phytochem.2019.05.003
예, BL, 리우, Q., 리, HF, 쳉, HJ, 유, T., 첸, L., 외. (2018). 요산은 Nrf2 활성화 및 신경 영양 인자 발현 조절을 통해 국소 대뇌 허혈/재관류 유발 산화 스트레스로부터 보호합니다. 산화. 중간 Cell Longev 2018, 6069150. doi: 10.1155/2018/6069150
Ye, ZY, Xing, HY, Wang, B., Liu, M. 및 Lv, PY (2019). DL-3-부틸 프탈라이드는 밀착 연접 단백질의 상향 조절을 통해 허혈/저산소증 손상으로부터 혈액-뇌 장벽을 보호합니다. 턱. 중간 J. (Engl.) 132 (11), 1344–1353. 도이: 10.1097/cm9.0000000000000232
Yu, Q., Li, X., Cao, X. (2016). 쥐의 허혈-재관류 유발 심근경색에서 Cistanche deserticola의 페닐에타노이드 배당체 풍부 추출물의 심장 보호 효과. 앤. 바스크. 수술 34, 234–242. 도이: 10.1016/j.avsg.2016.04.002
Yu, N., Wang, Z., Chen, Y., Yang, J., Lu, X., Guo, Y., et al. (2017). 수부 12 Jing-well point의 방혈 천자는 혈액-뇌 장벽의 밀착연접을 보호하여 영구적인 중뇌 허혈에 의해 유발된 뇌부종에 대한 개선 효과. BMC 보완 대안. 중간 17 (1), 470. doi: 10.1186/s12906-017-1979-6
Yu, W., Gao, D., Jin, W., Liu, S. 및 Qi, S. (2018). 프로포폴은 국소 대뇌 허혈-재관류 손상에서 석신산의 허혈성 축적을 감소시켜 산화 스트레스를 예방합니다. 신경 화학. 해상도 43(2), 420–429. doi: 10.1007/ s11064-017-2437-z
Yuen, CM, Chung, SY, Tsai, TH, Sung, PH, Huang, TH, Chen, YL, 외. (2015). 체외 충격파는 급성 허혈성 뇌졸중 후 쥐의 뇌경색 부피를 효과적으로 약화시키고 신경 기능을 향상시킵니다. 오전. J. Transl. 해상도 7 (6), 976–994.
Zechariah, A., ElAli, A., Doeppner, TR, Jin, F., Hasan, MR, Helfrich, I., 외. (2013). 혈관 내피 성장 인자는 뇌 모세혈관의 pericyte 적용 범위를 촉진하고, 이후의 국소 뇌 허혈 동안 뇌 혈류를 개선하고, 대사 반음부를 보존합니다. 스트로크 44(6), 1690–1697. 도이: 10.1161/strokeaha.111.000240
Zhang, QY, Wang, ZJ, Sun, DM, Wang, Y., Xu, P., Wu, WJ 등. (2017). 허혈성 뇌졸중에 대한 임기의 새로운 치료 효과: BBB 무결성의 새로운 메커니즘. 산화. 중간 Cell Longev 2017, 7150376. doi: 10.1155/2017/7150376
Zhang, R., Xu, M., Wang, Y., Xie, F., Zhang, G. 및 Qin, X. (2017). Nrf는2-뇌졸중의 산화 스트레스를 방어하기 위한 유망한 치료 표적입니다. 몰. 신경비올. 54(8), 6006–6017. 도이: 10.1007/s12035-016-0111-0
Zhang, A., Yang, X., Li, Q., Yang, Y., Zhao, G., Wang, B., et al. (2018). 시험관내 및 생체내에서 식물 보조제로서 Cistanche deserticola로부터의 물추출성 다당류의 면역자극 활성. PLoS One 13(1), e0191356. 도이: 10.1371/journal.pone.0191356
Zhang, Y., Wang, K., Chen, H., He, R., Cai, R., Li, J., et al. (2018). Isodon terricolous (D.Don) Kudo의 뿌리에서 추출한 항염증 리그난 및 페닐에타노이드 배당체. 식물화학 153, 36–47. doi: 10.1016/j.phytochem.2018.05.017
Zhang, K., Zhang, Q., Deng, J., Li, J., Li, J., Wen, L., et al. (2019). ALK5 신호 전달 경로는 Gadd45b를 통해 쥐의 대뇌 허혈/재관류 후 신경 발생 및 기능 회복을 중재합니다. 세포 사멸 Dis. 10 (5), 360. doi: 10.1038/s41419-019-1596-z
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