Echinoside가 대뇌 허혈을 가진 흰쥐의 선조체 세포외액에서 모노아민 신경전달물질에 미치는 영향

Wei Lili1, Chen Hong1, Jiang Yong2, Tu Pengfei 2, Zhong Ming1, Du Juan1, Liu Fei1, Liu Chunyang1, Wang Lei1

(1. 신장 시허자 대학 약학부, 신장 특수 식물 의학 핵심 실험실, 교육부, 신장 시허자 832002;2. 100083) 북경대학교 중의약현대연구센터

중국도서분류번호: R-332; R284．1; R322．81; R338．14; R743.310.531

문서 ID: A 문서 번호: 1001-1978 (2011) 02-0174-04

추상적인: 목적에키노사이드(ECH) 국소 대뇌 허혈이 있는 쥐의 선조체 세포외액에 있는 모노아민 신경전달물질에 대한 ECH의 뇌에 대한 신경보호 효과의 가능한 메커니즘을 탐색합니다. 방법 SD 쥐를 무작위로 대조군, 모델군, ECH 고용량 및 저용량군, 리구스트라진(CXQ)군으로 나누었다. 각 그룹의 쥐에게 해당 약물 또는 생리 식염수를 7일 동안 하루에 한 번 복강 내 투여했습니다. 투여 3일째에 프로브 슬리브를 뇌의 선조체에 매립하였다. 마지막 투여 1시간 후, MCAO(focal cerebral ischemia) 쥐 모델을 만들었다. 모델을 만든 후 즉시 미세 투석을 수행했습니다. 투석액은 노르에피네프린(NE), 도파민(DA), 5-하이드록시트립타민(5-HT), 3 ,4-dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC), homovanillic acid (HVA), 5-hydroxy indole acetate (HIAA) 각 군의 선조체 세포외액. 결과 대조군에 비해 모델군에서 NE, DA, 5-HT의 수치가 증가하였고, 산성대사산물인 DOPAC, HVA, HIAA도 증가하였다. 모델군과 비교하여 ECH(30, 15 mg · kg - 1 · d - 1)와 CXQ의 고용량군과 저용량군에서 6개 물질의 함량이 감소하였다. 결론 ECH의 신경보호 효과는 뇌허혈 후 모노아민 신경전달물질의 증가와 관련이 있을 수 있다.

시탕슈 파우더

키워드: 에키노사이드; 뇌 허혈; 선조체; HPLC-ECD; 모노아민 신경전달물질 및 대사산물

에키나세오사이드(ECH)는 페닐에타노이드 배당체의 유효성분으로Cistanche Deserticola, 신장의 한 특수 공장. 연구에 따르면 ECH는 항산화[1-2], 신경 보호[3-4], 노화 방지[5], 학습 및 기억력 향상[6-8]과 같은 신경 보호 효과가 있는 것으로 나타났습니다. Chen Hong 등의 결과. 파킨슨병에서 ECH가 DA 뉴런에 보호 효과가 있음을 확인 [9]. 모노아민 신경전달물질은 신체의 생리적 활동을 조절하는 일종의 중요한 물질입니다.조직의 내용물은 신경전달물질 생합성, 방출, 흡수 및 불활성화 과정을 반영할 수 있습니다[10-11]. 현재 대뇌 허혈이 있는 쥐의 뇌에서 모노아민 전달체에 대한 ECH의 영향에 대한 관련 보고는 없습니다. 본 연구에서는 ECH가 뇌 미세투석 기술을 이용하여 뇌 허혈이 있는 쥐의 선조체 세포외액에서 모노아민 신경전달물질 함량에 미치는 영향을 조사하고 ECH가 뇌 신경 보호에 미치는 가능한 메커니즘을 예비적으로 탐색하였다.

Cistanche 추출물 분말

1.재료

1.1 실험동물

SD 쥐, ♂, 체중 250~300g(신강 실험동물 센터에서 구입, 허가 번호: 2009-0053).

1.2 약물 및 시약

ECH는 북경 대학교 약학대학의 Tu Pengfei 교수가 기증했습니다(순도 95% 이상). 노르에피네프린(NE), 도파민(DA), 5-하이드록시트립타민(5-HT), 3,4-디하이드록시페닐아세트산(DOPAC), 호모바닐산(HVA)

5-하이드록시 인돌 아세트산(HIAA)은 Sigma이고; 주사용 테트라메틸피라진 염산염(CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.); 인산아연 시멘트(Shanghai Medical Instruments Co., Ltd. 제품, 액체와 분말로 구성, 시간 혼합); 1-알킬황산나트륨(DIKMA); 구연산 수화물(Tianjin Jinke Fine Chemical Research Institute); 시트르산삼나트륨(Acros); 디소듐 에틸렌디아민 테트라아세트산(JTTakerChemicalco); 메탄올(DIKMA); 아세토니트릴(DIKMA); 뇌 미세투석관류액은 복합염화나트륨주사제(Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.); 사용되는 물은 모두 재증기수입니다.

1.3 악기

미국 BAS4100 쥐 뇌 정위 장치; CMA/12 프로브 및 프로브 슬리브; CMA/120 의식이 있는 동물 장치; CMA/402 마이크로 펌프; CMA/150 저온 시료 자동 수집기. Esa 5600A 주입 펌프; Esa 5600A 주입 펌프; Esa 542 자동 시료 주입 장치; Esa의 CoulArray 전기화학적 검출기; 유리질 탄소 작업 전극 및 Ag/AgCl 기준 전극; C18 컬럼(DIKMA, ODS5 μm, 150mm × 4.6mm); CoulArraywin 크로마토그래피 워크스테이션(Esa사); 볼텍스 믹서(QL-861 유형); 데스크톱 산도 테스터(HANNA-211); 데스크탑 고속 원심 분리기(XYJ-2 유형).

2.방법

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2.1 동물 분류 및 관리

30마리의 쥐를 무작위로 5개의 그룹으로 나누었습니다: ① 대조군: 1ml · kg-1 · d-1 일반 식염수; ② 모델군: 생리식염수 1ml · kg-1 · d-1; ③ 모델 + 리구스트라진(CXQ) 30mg · kg-1 · d-1; ④ - ⑤ 모델 + ECH 고용량 및 저용량 그룹(ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d-1; 각 그룹의 모든 동물을 7일 동안 복강내 주사하였다.

2.2 모델링 방법 및 미세투석

투여 3일째에 각 쥐를 캐뉼라로 묻었습니다: 쥐를 10% 클로랄 수화물(3.5ml · kg-1)로 ​​마취하고 BAS4100에 고정했습니다. GeorgePaxinos의 "Stereotactic Map of Rat Brain"에 관한 좌측 선조체(coordinates AP: plus 0.2mm; ML: - 3.0mm; DV: - 3.5mm)에 프로브 카테터를 이식하였다. ". 마지막 투여 후 1시간 후에 쥐를 마취시키고 Yang Zanzhang[12]의 개선된 Longa 봉합법을 이용하여 국소 뇌 허혈 모델(MCAO 모델)을 만들었다. 대조군의 낚싯줄은 10mm만 삽입하였고, 그 외의 단계는 수술군과 동일하게 하였다. 모델링 후 의식이 있고 자유롭게 움직이는 상태에서 미세투석 탐침을 삽입하고 μ에 Ringer 용액을 사용하여 대뇌 미세투석액을 4도에서 채취하고 20분에 투석액 튜브를 채취하였다. 각 투석액 튜브를 채취한 후 즉시 - 20도의 냉장고에 보관하고 투석 후 - 70도의 냉장고로 옮겨야 합니다. 탐침의 회수율은 사용 전 측정하여 투석액 내 모노아민 신경전달물질의 농도를 환산하는데 사용하였다.

cistanche가 하는 일—기억력 향상

2.3 HPLC-ECD 분석

이동상 구성: 이동상에는 리터당 829ml의 0.15mol · L-1 구연산-구연산나트륨 완충액이 포함되어 있습니다. 0.1mol · L-1 디소듐 EDTA 1ml; 메탄올 150ml; 나트륨{{10}}알킬 설페이트0.283g. 이동상의 유속을 0.7ml·min-1로 설정하고, 컬럼 오븐의 온도를 28도로 설정한다. 전기화학 검출기의 작동 전압은 200mV, 400mV 및 600mV이며 각각 2, 3 및 4채널입니다. 이득은 2nA입니다. 주입량은 25μl입니다. 표준곡선은 0.025, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5mg·L-1 기울기 혼합표준용액으로 그린다.

2.4 통계 처리

실험 데이터는 x field ± s로 표현하고, 반복 측정 데이터는 SPSS13.0 통계 소프트웨어를 이용하여 분석하였다.

그림 1-6은 쥐 선조체의 세포외액에서 NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA 및 5-HT 수준의 변화를 보여줍니다. 뇌 허혈 후 선조체의 세포외액에 있는 모노아민 신경전달물질이 대사 장애를 일으키고 각 신경전달물질의 함량이 증가한 것을 그림에서 알 수 있다. 특정 범위 내에서 증가는 허혈 시간의 연장과 함께 더욱 분명합니다. 허혈 90분 후 선조체 세포외액의 DA와 NE 농도는 대조군의 3배 이상이었다. 대조군의 NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA 및 5-HT의 수준은 높음에서 낮음으로 감소했는데, 이는 좌총경동맥 결찰 후 좌뇌의 일시적인 허혈과 관련이 있을 수 있습니다. 프로브 삽입으로 인한 손상. 변화 곡선에서 ECH와 CXQ는 대뇌 허혈 후 DA, DOPAC, HIAA, HVA 및 5-HT의 피크 농도를 감소시킬 수 있으며 CXQ와 고용량 ECH가 더 분명합니다. 각 신경 전달 물질의 시간 경과 곡선의 하향 이동은 ECH가 대뇌 허혈이 있는 쥐의 뇌에서 신경 전달 물질 및 대사 물질의 증가를 억제할 수 있음을 나타냅니다.

                                                                           Fig2 쥐의 선조체에서 DA의 세포외 수준에 대한 Echinoside의 효과

Fig3 효과에키노사이드쥐의 선조체에서 세포외 수준의 DOPAC에키노사이드쥐의 선조체에서 HIVV의 세포 외 수준

그림5 효과에키노사이드쥐의 선조체에서 HVA의 세포외 수준에 대한 그림 6의 영향에키노사이드쥐의 5-HT instriatum의 세포외 수준

4.논의

수퍼맨 허브 시스탄슈—Improve 메모리

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대뇌 허혈로 인한 뇌 손상의 기전은 복잡합니다. 대뇌 허혈의 경우 뇌의 모노아민 신경전달물질에 이상이 생겨 NE, DA, 5-HT의 함량이 현저히 감소한다. 뇌허혈이 심할수록 뇌조직의 NE, DA, 5-HT의 함량은 낮다[13]. 뇌내 미세투석법은 뇌허혈 동안 세포외액에서 모노아민 신경전달물질의 함량이 증가하고, 전체 허혈 기간 동안 지속되며, 허혈 시간이 연장됨에 따라 더욱 증가함을 입증하였다. 실험 결과는 보고서[14]와 일치했습니다.에키노사이드신장의 특수 식물인 Cistanche deserticola에서 분리 및 정제한 페닐에타노이드 배당체의 유효성분입니다. 노화 방지, 학습 및 기억력 향상, 신경 세포 사멸 방지와 같은 많은 신경 보호 효과가 있습니다.. 본 연구에서는 HPLC-ECD 검출기술을 접목한 국내 첨단 뇌 미세투석법을 이용하여에키노사이드뇌 허혈이 있는 실험용 쥐의 선조체 세포외액에서 모노아민 신경전달물질과 그 대사산물에 대한 연구. 그 결과 ECH는 뇌허혈로 인한 선조체의 세포외액에서 모노아민 신경전달물질의 증가를 감소시킬 수 있으며, 뇌허혈조직의 손상 개선에 더 좋은 효과가 있음을 보여주었다.

참조:

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