세포 표적 나노입자의 폐 투여에 의한 점막 면역 유도
Jul 05, 2023
추상적인
우리는 이전에 항원, 벤잘코늄 클로라이드(BK) 및 c-폴리글루탐산(c-PGA)으로 구성된 나노입자가 피하 투여 후 높은 Th1 및 Th2- 유형 면역 유도를 나타냄을 발견했습니다. 그러나 호흡기 감염의 예방을 위해서는 점막면역을 유도해야 한다. 본 연구에서는 OVA(Ovalbumin)를 모델항원으로 하는 나노입자, BK, c-PGA의 폐투여가 폐와 혈청의 점막면역 유도에 미치는 영향을 조사하였다.
복합체는 RAW264.7 및 DC2.4 세포에 의해 강력하게 흡수되었습니다. 폐 투여 후, OVA 단독보다 OVA/BK/c-PGA 복합체에서 폐 체류가 더 길었다. OVA-특이적 혈청 면역글로불린(Ig)G는 복합체에 의해 고도로 유도되었다. 기관지폐포 세척액에서도 높은 IgG와 IgA 수치가 유도되었고 생체 내에서 독성은 관찰되지 않았습니다. 결론적으로 우리는 OVA/BK/c-PGA 복합체의 폐 투여에 의해 효과적이고 안전하게 점막 면역을 유도하였다.
최근 몇 년 동안 점점 더 많은 연구에서 점막 면역이 신체의 면역 체계에서 중요한 역할을 한다는 것이 밝혀졌습니다. 점막면역이란 인체의 점막을 기반으로 하는 면역체계를 말하며 그 방어능력은 주로 호흡기, 소화관, 생식기관 등 인체 점막에 병원균이 침입하는 것을 목적으로 한다.
점막면역 그 자체가 우리 몸의 면역력을 높여주는 것은 아니지만 우리 몸이 외부 병원균의 침입에 보다 효과적으로 대처할 수 있도록 도와줄 수 있습니다. 지속적으로 점막 면역을 자극함으로써 우리 몸은 더 많은 항체를 생성하여 면역력을 향상시킵니다.
그렇다면 어떻게 점막면역을 자극할 수 있을까요? 다음은 몇 가지 제안 사항입니다.
1. 비타민 C를 충분히 섭취하세요. 비타민 C는 면역 세포 기능을 강화하는 천연 항산화제로 감염과 싸우는 데 도움이 됩니다. 과일과 레몬, 오렌지, 딸기와 같은 녹색 잎 채소는 비타민 C가 풍부합니다.
2. 유산균의 섭취를 늘린다. 유산균은 장내 세균총의 균형을 촉진하고 유해균의 성장을 억제할 수 있습니다. 일반적인 유산균 식품으로는 요거트, 김치, 김치 등이 있습니다.
3. 호흡 연습 심호흡. 심호흡은 폐로의 산소 공급과 환기를 증가시켜 폐에 축적된 병원균을 제거하는 데 도움이 될 수 있습니다.
요컨대, 점막 면역을 자극하는 것은 면역력을 향상시키는 중요한 수단입니다. 식습관과 생활습관을 통해 점막면역력을 향상시켜 건강을 지킬 수 있도록 최선을 다해야 합니다. 이러한 관점에서 우리는 면역력을 향상시켜야 합니다. 육회에는 다당류, 버섯 2종, 면역 체계를 자극할 수 있는 황리와 같은 다양한 생물학적 활성 성분이 포함되어 있기 때문에 육종은 면역력을 크게 향상시킬 수 있습니다. 다양한 유형의 세포는 면역 활동을 증가시킵니다.
1. 소개
급성 호흡기 감염은 거의 확실하게 개발도상국의 5세 미만 아동의 주요 사망 원인입니다(Williams et al., 2002). 인플루엔자, 백일해 및 폐렴구균과 같은 여러 백신이 호흡기 감염에 대해 개발되었습니다(White, 1988; Pittman, 1991; Chen et al., 2020). 이러한 백신의 대부분은 혈청 면역글로불린(Ig)G를 효과적으로 유도할 수 있는 근육 및 피하 경로로 투여됩니다. 그러나 다른 경로는 급성 호흡기 감염을 예방하기 위해 점막 면역을 자극하는 데 더 유용합니다. 비강 및 폐와 같은 점막 투여는 점막 IgA를 효과적으로 유도하고 호흡기 감염을 예방하는 것으로 보고되었습니다(Giri et al., 2005; Ainai et al., 2017).
한편, 비강 및 폐 투여용 백신은 투여 부위에서 염증 반응 및 궤양을 유발하는 것으로 보고된 보조제를 함유해서는 안 된다(Tamura et al., 1988; McKee et al., 2007). 보조제 없이 백신의 효능을 개선하기 위한 또 다른 접근법은 백신을 점막 항원 제시 세포(APC)로 효과적으로 전달할 수 있는 시스템을 개발하는 것입니다.
이전 연구에서 우리는 항원, 벤즈알코늄 클로라이드(BK) 및 c-폴리글루탐산(c-PGA)으로 구성된 새로운 백신 전달 벡터를 개발했습니다. OVA(ovalbumin)를 모델 항원으로 포함하는 복합체, BK 및 c-PGA(OVA/BK/c-PGA 복합체)는 OVA를 수지상 세포로 효과적으로 전달하고 마우스에 피하 투여한 후 OVA 특이적 혈청 IgG 유도를 개선했습니다(Kurosaki et al. ., 2012). 본 연구는 OVA/BK/c-PGA 복합체의 폐 투여가 폐 및 혈청의 점막 면역 유도에 미치는 영향을 조사하는 것을 목적으로 한다.
2. 재료 및 방법
2.1. 화학
OVA는 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)에서 구입했습니다. BK는 Nacalai Tesque, Inc.(Kyoto, Japan)로부터 얻었다. c-PGA는 Yakult Pharmaceutical Industry Co., Ltd.(Tokyo, Japan)에서 제공받았다. Fluorescein isothiocyanate-labeled OVA(FITC-OVA) 및 Alexa Fluor 647-labeled OVA(Alexa647- OVA)는 Invitrogen(Carls, CA, USA)에서 구입했습니다. 태아 소 혈청(FBS)은 Biological Industries Ltd.(Kibbutz Beit Haemek, Israel)에서 구입했습니다. OPTI-MEM I은 GIBCO BRL(Grand Island, NY, USA)에서 입수하였고, 페니실린, 스트렙토마이신 및 L-글루타민을 포함하는 프리믹스 항생제 용액은 Wako Pure Chemical Industries, Ltd.(Osaka, Japan)에서 입수하였다. Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM) 및 RPMI1640 배지는 Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.(Tokyo, Japan)에서 구입했습니다.
2.2. 복잡한 준비
이전에는 1:0.2:0.2의 중량비로 OVA/BK/c-PGA 복합체를 구성했습니다(Kurosaki et al., 2012). OVA/BK 복합체를 제조하기 위해 5% 포도당에 용해된 BK 용액(pH 5.0)을 5% 포도당에 용해된 OVA 용액(pH 7.0)과 혼합하고 OVA/BK 복합체를 c-PGA로 코팅하기 위해 5% 포도당에 용해된 c-PGA 용액(pH 7.0)을 OVA/BK 복합체에 첨가하고 4 C. 각 복합체의 입자 크기 및 f-전위는 Zetasiser Nano ZS(Malvern Instruments, Ltd., Malvern, UK)를 사용하여 측정하였다.
2.3. 세포
마우스 대식세포주 RAW264.7과 수지상세포주 DC2.4를 사용하였다. RAW264.7 세포는 10% FBS와 항생제가 보충된 DMEM에서 성장했습니다. DC2.4 세포는 10% FBS, 항생제, 1mM 비필수 아미노산 및 1nM 2-메르캅토에탄올이 보충된 RPMI1640 배지에서 성장했습니다. 이들 세포는 37℃, 공기 중 5% CO2의 가습 분위기에서 평가되었습니다.
2.4. 체외 세포 흡수 실험
RAW264.7 세포와 DC2.4 세포를 24-웰 플레이트(Corning, NY, USA)에 2.0 104 세포/웰의 밀도로 도말하고 50{ {21}} 배양 배지 mL. 24-h 전배양 후, 배지를 OPTI-MEM I 배지로 교체하고, 세포를 5 mg FITC-OVA 및 5 mg FITC-OVA를 포함하는 복합체와 함께 2시간 동안 배양하였다. 배양 후, 이들 세포를 PBS로 세척하고 형광 현미경(BIOREVO BZ-9000; Keyence Co., Osaka, Japan) 하에서 관찰하였다. 관찰 후, 이들 세포를 300㎕의 용해 완충액(pH 7.8 및 0.05% Triton X-100 및 2mM EDTA를 함유하는 0.1M Tris/HCl 완충액)에서 용해시켰다. 용해물을 96-웰 플레이트에 넣고 FITC-OVA의 형광을 fluorometric microplate reader(Infinite-200Pro M-Plex, Tecan Japan Co., Ltd., 일본 가나가와). 용해물의 단백질 함량은 BSA를 표준으로 사용하는 Bradford 분석으로 결정되었습니다. 570 nm에서 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 흡광도를 측정하였다. FITC-OVA의 흡수는 단백질 mg당 mg으로 표시되었습니다.
2.5. 동물
동물 관리 및 실험 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받아 나가사키 대학의 동물 실험 지침에 의해 수행되었습니다. 수컷 C57BL/6N 마우스(5주령)는 Japan SLC(일본 시즈오카 소재)에서 구입했습니다. 이동 후, 실험 전 1일 동안 마우스를 새로운 환경에 적응시켰다. 폐 투여(40 mL)는 이소플루란 흡입에 의해 마취된 마우스에서 자발 호흡에 의해 빛이 있는 설압자를 사용하여 수행되었다(Horiguchi et al., 2015).
2.6. 복잡한 폐 축적
OVA의 축적을 조사하기 위해 40mg Alexa647-OVA와 40mg Alexa647- OVA를 포함하는 복합체를 마우스당 40mL의 폐 경로로 마우스에 투여했습니다. 투여 6일 후, 마우스를 희생시키고 폐를 해부하였다. 마우스 폐에서 Alexa647-OVA의 형광 강도는 데이터 수집을 위한 Living Image 소프트웨어(Xenogen, Co, Almeda, CA, USA)와 결합된 Xenogen IVIS Lumina System으로 관찰되었습니다. 관찰 후 폐를 용해 완충액으로 균질화하고 균질액을 15000 rpm(Kubota-3500, Kubota Corporation, Tokyo, Japan)에서 5분 동안 원심분리하고 그 상등액에서 Alexa647의 형광을 측정했습니다. 각각 640 및 670 nm의 여기 및 방출 파장에서 마이크로플레이트 리더로 결정되었습니다.
2.7. 면제
마우스는 5% 포도당 용액, 40mg OVA, 8mg BK 및 8mg c-PGA의 빈 복합체(비히클) 및 40mg OVA를 포함하는 OVA/BK/c-PGA 복합체로 폐 투여에 의해 4회 면역화되었다. 주간. 마지막 접종 2주 후 기관지폐포세척액(BALF)과 혈청을 채취하였다. BALF와 혈청은 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 분석에 사용되었습니다.
2.8. OVA 특이적 항체 유도의 결정
OVA 코팅을 위해 ELISA 플레이트(Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA)의 각 웰에 100 mL의 OVA 용액(10 mg/mL, 1 M 탄산수소나트륨 중)을 첨가했습니다. 플레이트를 0.05% Tween-20(PBST), 블로킹 시약 N 102(Nichiyu, Co., Ltd., Tokyo, Japan) 200mL를 포함하는 인산염 완충 식염수로 3회 세척했습니다. )를 첨가하여 비특이적 결합을 차단한 다음 4C에서 6시간 동안 배양했습니다. 플레이트를 PBST로 2회 세척했습니다. 그런 다음 1000-배 희석된 혈청 및 희석되지 않은 BALF 샘플의 100mL 분취량을 각 웰에 첨가하고 4C에서 밤새 배양했습니다. -mouse IgG, IgA, IgM, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b 및 IgG3(1:10,000)(Abcam, Cambridge, UK) – 각 웰에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 배양하고 그런 다음 PBST로 5번 세척했습니다. TMB One 솔루션(Promega, WI, USA)을 사용하고 제조업체의 지침에 따라 준비했습니다. 이어서 1N 염산을 첨가하여 반응을 15분에 중단시켰다. 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 450nm에서 흡광도를 판독했습니다.
2.9. OVA/BK/c-PGA 복합체의 생체 내 독성
OVA 및 OVA/BK/c-PGA 복합체를 폐 경로로 마우스에 투여하였다. BALF는 마우스에서 투여 후 3시간 및 24시간 후에 얻었다. 투여 24시간 후, 폐도 해부하였다. 제조사의 지시에 따라 QuantiChromTM Lactate Dehydrogenase Kit(BioAssay Systems, CA, USA)를 사용하여 BALF에서 Lactate dehydrogenase(LDH) 활성을 측정하였다. 폐 샘플은 4% 파라포름알데히드 인산 완충 용액에 고정되었습니다. 절편 및 hematoxylin-eosin (HE) 염색은 GenoStaff (Tokyo, Japan)에 맡겨졌습니다. HE로 염색된 폐 부분을 현미경으로 20배율로 관찰했습니다.
2.10. 통계 분석
두 그룹 간의 차이의 통계적 유의성은 Student's t-test를 수행하여 평가했습니다. 그룹 간의 다중 비교는 Tukey의 테스트를 수행하여 수행되었습니다. p-값 < .05는 통계적 유의성을 나타내는 것으로 간주되었습니다.
3. 결과
3.1. 복합체의 물리화학적 특성
1:0.2:0.2의 중량비로 음이온성 OVA/BK/c-PGA 복합체를 구성했습니다. c-PGA-코팅된 복합체는 대략 105.4 nm의 입자 크기 및 대략 35.5 mV의 f-포텐셜을 가졌다.
3.2. 복합체의 세포 흡수
RAW264.7 세포와 DC2.4 세포를 FITC-OVA와 FITC-OVA/BK/c-PGA 복합체로 처리하고 FITC-OVA의 세포 흡수를 그림 1과 같이 시각화했습니다. FITC-OVA/BK/ c-PGA 복합체는 RAW264.7 세포와 DC2.4 세포에 많이 흡수되었으며, FITC-OVA의 강한 녹색 형광이 관찰되었다(각각 그림 1(A, B)). 동시에, FITC-OVA를 처리한 두 세포 모두에서 FITC-OVA의 양이 거의 관찰되지 않았다.
FITC-OVA의 세포 흡수는 RAW264.7 세포와 DC2.4 세포에서 정량화되었습니다(그림 1(C)). FITC-OVA/BK/c-PGA 복합체는 두 세포 모두에서 FITC-OVA보다 유의하게 더 높은 흡수를 보였다(p < .01).
3.3. 폐 투여 후 Alexa647-OVA의 폐 축적
Alexa647-OVA 및 Alexa647-OVA/BK/c-PGA 복합체는 항원으로서 Alexa647-OVA의 폐 축적을 결정하기 위해 폐 경로를 통해 마우스에 투여되었습니다. 투여 6일 후 폐를 해부하고 Xenogen IVIS Lumina System을 사용하여 형광 강도를 시각화했습니다. ex-vivo 형광 이미지는 그림 2(A)에 나와 있습니다. 비장, 심장, 신장 및 간에는 형광 강도가 없었으나 폐 투여 6일 후에 전체 폐에 걸쳐 높은 형광 강도가 관찰되었다(데이터는 나타내지 않음). 폐 축적은 6일차에 Alexa647-OVA보다 Alexa647-OVA/BK/c-PGA 복합체에서 더 높았습니다. 그림 2(B)에 표시된 것처럼 폐 축적은 Alexa에서 훨씬 더 높았습니다. 647-Alexa647- OVA보다 OVA/BK/c-PGA 복합물(p < .05).
3.4. 복합물의 폐 투여 후 혈청 내 OVA 특이 항체
5% 포도당 용액, BK/c-PGA 복합체(비히클), OVA 및 OVA/BK/c-PGA 복합체를 마우스에 폐 경로로 4회 투여한 다음 혈청 OVA 특이 IgG, IgA, IgM, 및 IgE는 도 3에 도시된 바와 같이 ELISA에 의해 결정되었다. OVA 및 OVA/BK/c-PGA 복합체의 폐 투여는 마우스에서 IgG 수준을 증가시켰지만, OVA-특이적 IgG는 5% 글루코스 및 비히클을 투여한 마우스에서 검출되지 않았다. 또한, IgG 및 IgA 생성은 OVA 투여 후보다 OVA/BK/c-PGA 복합체 투여 후 유의하게 더 높았다(p < .05 또는 .01). 한편, OVA 특이 IgM 및 IgE는 OVA 또는 OVA/BK/c-PGA 복합체에 의해 유도되지 않았다.
3.5. 복합체의 폐 투여 후 BALF의 OVA 특이 항체
그림 4와 같이 BALF의 OVA-특이적 IgG, IgA, IgM 및 IgE도 측정되었습니다. .01). 그럼에도 불구하고, OVA/BK/c-PGA 복합체는 BALF에서 IgG뿐만 아니라 IgA도 유의하게 증가시켰다(p < .01). 그러나, OVA 특이 IgM 및 IgE는 OVA 또는 OVA/BK/c-PGA 복합체에 의해 유도되지 않았다.
3.6. 복합물의 폐 투여 후 혈청 내 IgG 아형
혈청 내 IgG1, IgG2a, IgG2b 및 IgG3과 같은 OVA 특이적 IgG 아형의 유도 효과는 그림 5와 같이 결정되었습니다. 대조군 및 비히클과 비교하여 OVA는 IgG1만 유의하게 증가했습니다(p < .01). OVA/BK/c-PGA 복합체에 의해 유도된 모든 아형의 항체 수준은 대조군 및 비히클에 의해 유도된 수준보다 상당히 높았다(p < .05 또는 .01).
3.7. 복합체의 폐 투여 후 BALF의 IgG 아형
그림 6과 같이 BALF의 IgG1, IgG2a, IgG2b 및 IgG3과 같은 OVA 특이적 IgG 아형도 결정되었습니다. . 대조군, 비히클 및 OVA와 비교할 때, OVA/BK/c-PGA 복합체는 모든 아형의 상당히 높은 항체 수준을 유도했습니다(p < .05 또는 .01).
3.8. OVA/BK/c-PGA 복합체의 생체 내 독성
마우스에게 5% 포도당 용액, OVA 및 OVA/BK/c-PGA 복합체를 투여했습니다. BALF의 LDH 활성은 투여 후 3시간 또는 24시간 후에 결정되었습니다(그림 7). OVA 및 OVA/BK/c-PGA 복합체의 투여는 BALF의 LDH 수준에 거의 영향을 미치지 않았습니다.
투여 24시간 후, 조직학적 분석을 위해 이들 마우스로부터 폐를 해부하였다. HE로 염색된 폐 절편은 그림 8에 나와 있습니다. OVA 및 OVA/BK/c-PGA 복합체로 처리된 마우스에서 조직학적 이상이 관찰되지 않았습니다.
4. 토론
폐는 호흡을 조절하며 호흡기 감염을 일으키는 바이러스 및 박테리아와 같은 많은 병원균에 노출됩니다. 이러한 병원균은 폐점막을 통해 감염되므로 호흡기 감염으로부터 보호하기 위해 점막 면역을 유도해야 합니다. 호흡기 감염을 예방하고 점막 면역이 중요한 역할을 합니다. 그러나 백신의 피내 및 근육내 투여는 점막 면역을 강하게 자극할 수 없다(Ito et al., 2003; Amorij et al., 2007). 분비성 IgA를 유도하는 점막 면역 체계는 점막 표면에서 발달합니다. 수지상 세포 및 대식세포와 같은 여러 APC가 점막 표면에 위치하는 것으로 보고되었습니다(Kopf et al., 2015). 또한 BALT(Bronchus-associated Lymphoid Tissue)는 세기관지 점막에서 발견되며 호흡기 점막 면역에 중심적인 역할을 하는 림프성 여포이다(Bienenstock, 1980). 백신의 폐 투여는 점막 면역 체계를 효과적으로 자극할 것으로 예상됩니다. 따라서 우리는 폐 경로를 통해 투여되는 백신으로서의 유용성을 평가하기 위해 OVA/BK/c-PGA 복합체를 구성했습니다.
도 4는 OVA 및 OVA/BK/c-PGA 복합체의 폐 투여 후 OVA-특이적 항체의 BALF 농도를 보여준다. OVA의 폐 투여는 IgG를 증가시켰지만 BALF에서 IgA에는 거의 영향을 미치지 않았습니다. 한편, OVA/BK/c-PGA 복합체는 BALF에서 IgA 분비를 유의하게 유도하였다. 또한, 혈청 IgG 유도는 OVA 투여 후보다 OVA/BK/c-PGA 복합체 투여 후 유의하게 더 높았다(도 3). 혈청 IgG는 발생하는 모든 감염의 악화를 예방하는 데 중요합니다(Huber et al., 2006; Schroeder & Cavacini, 2010). 결과는 OVA/BK/c-PGA 복합체가 높은 점막 IgA 유도에 의한 호흡기 감염 및 높은 혈청 IgG 유도에 의한 호흡기 감염의 악화를 예방할 수 있음을 나타냅니다. 또한, OVA/BK/c-PGA 복합체에 의한 IgE 유도는 관찰되지 않았으며, 이는 OVA/BK/c-PGA 복합체에 의한 알레르기 반응의 위험이 거의 없음을 시사한다.
OVA/BK/c-PGA 복합체는 또한 IgG1 및 IgG2b뿐만 아니라 IgG2a 및 IgG3도 유도할 수 있습니다(그림 5). IgG1 및 IgG2b는 체액성 면역 반응을 매개하는 Th2-형 면역글로불린으로 알려져 있으며, IgG2a 및 IgG3는 세포성 면역 반응을 매개하는 Th1-형 면역글로불린으로 알려져 있습니다(Firacative et al., 2018). . 따라서 OVA/BK/c-PGA 복합체는 체액성 및 세포성 면역 반응을 모두 유도할 수 있습니다. 이러한 결과는 이 시스템이 감염 및 암에 대한 백신에 유용할 수 있음을 시사합니다. 예방 효과, 유도성 BALT, Treg 집단 및 IL-10 유도에서 항원 유도 Th1- 및 Th2- 유형 사이토카인 반응은 향후 감염 또는 암의 실제 항원을 사용하여 평가되어야 합니다. 연구.
면역 반응의 OVA/BK/c-PGA 복합체에 의한 강력한 유도는 폐에서 복합체의 높은 보유 및 폐점막의 APC로의 OVA의 효과적인 전달 때문임에 틀림없다. 우리의 결과는 투여 6일 후 Alexa647-OVA/BK/c-PGA 복합체가 폐에 남아 있었고 Alexa647- OVA보다 훨씬 더 높은 형광을 보였다는 것을 보여줌으로써 이를 확인했습니다(그림 2). 복합체 형성은 OVA의 확산을 방지하고 폐점막에서 프로테아제에 의한 분해로부터 OVA를 보호할 수 있습니다. 또한 OVA/BK/c-PGA 복합체는 OVA를 RAW264.7 대식세포 및 DC2.4 수지상 세포로 효과적으로 전달할 수 있었습니다(그림 1). 이러한 결과는 OVA/BK/c-PGA 복합체가 폐포 APC에 의해 흡수되고 폐 투여 후 높은 면역 반응을 유도할 것임을 나타냅니다. c-PGA로 코팅된 나노입자는 gamma-glutamyl transpeptidase 매개 엔도사이토시스 경로에 의해 흡수되는 것으로 보고되었다(Du et al., 2015). 우리는 또한 c-PGA로 코팅된 나노입자가 c-PGA 특이적 엔도사이토시스 경로에 의해 흡수됨을 확인했습니다(Kurosaki et al., 2009). OVA/BK/c-PGA 복합체는 동일한 메커니즘을 통해 폐의 APC에 의해 흡수될 수 있습니다. 그러나 특정 면역 유도에서 어떤 세포가 OVA 흡수 및 후속 항원 제시에 책임이 있는지는 아직 명확하지 않습니다. 향후 자세한 면역유도 기작에 대한 추가 연구가 수행되어야 할 것이다.
백신의 효과를 향상시키기 위해 많은 보조제가 개발되었습니다. 그러나 보조제는 주사 부위에서 염증 반응을 일으키는 것으로 보고되었다(Tamura et al., 1988; McKee et al., 2007). 따라서 보조제를 폐에 투여하면 폐렴과 같은 심각한 부작용이 발생할 수 있습니다. OVA/BK/c-PGA 복합체의 폐 투여 후, BALF의 LDH 수준은 증가하지 않았고(도 7) HE-염색된 부분에서 조직학적 이상이 관찰되지 않았다(도 8). 보고된 바에 따르면, c-PGA는 면역 염증 반응을 나타내지 않는 생체적합성 및 생분해성 고분자이다(Prodhomme et al., 2003; Ye et al., 2006). BK는 안전한 4차 암모늄 화합물로서 임상적으로 항균 첨가제로 널리 사용되어 왔다(Marple et al., 2004). 이 보고서는 또한 OVA/BK/c-PGA 복합체의 안전성을 지원합니다. 반면 대조군에서도 폐투여 24시간 후보다 폐투여 3시간 후에 더 높은 LDH 수치가 관찰되었다. 이러한 결과는 폐 투여로 인해 약간의 자극이 발생했음을 나타냅니다. OVA/BK/c-PGA 복합체의 임상 적용 전에 추가 안전성 연구가 필요합니다.
본 연구에서는 폐 투여 후 항원 단백질, BK 및 c-PGA로 구성된 새로운 백신 전달 벡터에 의해 높은 점막 면역 체계 유도를 입증했습니다. 이 시스템은 다양한 호흡기 감염에 대한 백신에 사용할 수 있습니다.
공시문
저자가 보고한 잠재적인 이해 상충은 없습니다.
펀딩
이 작품은 보조금[JP20K12649 및 JP20K07156]에 따라 일본 과학 진흥 협회(JSPS) KAKENHI의 지원을 받았습니다.
참조
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