님 나무에서 추출한 항멜라닌 생성 게두닌의 분자 메커니즘
Mar 28, 2022
연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com
전황주 1명, 김경남 1명, 김채은 2명, 김명진 1명, 김태오 3,4,5,† 및 이성은 1,2,*,†
추상적인:멜라닌 생성은 피부 보호 색소(자외선 차단)인 멜라닌을 생성하고 인간의 피부색을 결정하는 일련의 과정을 나타냅니다. 멜라닌 생성을 감소시키는 화학물질은 미백과 같은 스킨케어에 대한 관심 때문에 화장품 시장에서 항상 수요가 있었습니다. 멜라닌 생성을 억제하는 주요 메커니즘은 멜라닌 생성의 핵심 효소인 티로시나아제(TYR)의 억제입니다. 여기에서는 대표적인 리모노이드인 진품(Ged)의 멜라닌 생성 억제 작용을 평가하였다. 시험관 내 멜라닌 생성은 B16F10 마우스 흑색종 세포에서 알파 멜라닌 세포 자극 호르몬(-MSH)에 의해 자극되었습니다. Ged는 -MSH로 자극된 멜라닌 생성을 감소시켜 TYR 활성과 단백질 양을 억제합니다. 우리는 멜라닌 생성에 대한 제브라피쉬 모델의 생체 내에서 이 결과를 확인했습니다. 처리된 모든 농도에서 발달 동안 제브라피쉬 배아의 독성 및 기형의 징후는 없었습니다. Ged는 생산된 제브라피쉬 배아 색소 점의 수와 배아의 멜라닌 함량을 줄였습니다. 높은 활성 농도의 Ged(100μM)는 양성 대조군인 kojic acid(8mM)보다 훨씬 낮았습니다. 따라서 Ged는 항 멜라닌 생성 시약의 매력적인 후보가 될 수 있습니다.
키워드: MITF; 소안구증 관련 전사 인자; 티르; 티로시나제; DQ; 도파퀴논;TRP-1; 티로시나제 관련 단백질 1; TRP-2; 티로시나제 관련 단백질 2; MC1R; 멜라노코르틴 1 수용체; -MSH; -멜라닌 세포 자극 호르몬; ACTH; 부신피질자극호르몬; ASP; 아구티시그널링 단백질; 캠프; 사이클릭 아데노신 모노포스페이트; 크렙; 캠프 응답 요소
1. 소개
멜라닌은 멜라닌 세포의 리소좀과 같은 세포 소기관인 멜라노솜에서 합성됩니다. 이러한 멜라닌 색소의 합성은 전구체인 L-티로신에서 시작하여 L-티로신이 도파퀴논(DQ) 및 L-DOPA라는 화합물로 산화 반응합니다[2]. 이 산화 단계에서 tyrosinase(TYR)는 전체 멜라닌 생합성 경로의 속도 제한 효소로 작용합니다[2,3]. 멜라닌 생성 단백질과 밀접한 관련이 있는 TRP{11}}및 TRP{12}}는 유멜라닌 생합성 경로를 촉매하고 TYR 활성을 안정화 및 유도합니다[1]. 멜라닌 색소를 생성하는 과정(멜라닌 생성이라고 함)은 포르멜라닌 합성 및 저장 부위인 멜라닌 세포의 멜라노솜에서 발생합니다[4]. 멜라닌 생성 신호 전달 경로에서 멜라노코르틴1 수용체(MC1R)는 G-단백질 결합 수용체의 구성원입니다. MCIR은 멜라닌 생성 신호의 출발점이며 멜라닌 세포 자극 호르몬(-MSH), 부신피질 자극 호르몬(ACTH) 및 아구티 신호 단백질(ASP)과 같은 MC1R 작용제에 의해 활성화됩니다[1,2]. -MSH-MC1R 신호 전달 경로의 활성화는 cAMP(cyclic adenosinemonophosphate) 농도를 증가시키고 cAMP 반응 요소(CREB)를 인산화합니다. 인산화된 CREB는 멜라닌 합성 관련 유전자를 조절하는 전사 인자인 소안구증 관련 전사 인자(MITF), TYR, 티로시나아제 관련 단백질-1(TRP{33}}) 및 티로시나아제 관련 단백질의 단백질 수준을 유도합니다. -2 (TRP-2) 이러한 유전자의 M-box를 결합하여 [1,5,6]. 5개의 멜라노코르틴 수용체 중 MC1R은 멜라닌 세포가 가장 많습니다. 이것은 주로 a-MSH 및 ACTH와 같은 이 수용체의 작용제가 이 수용체로 전환될 때 MC1R을 활성화하여 유멜라닌(검은 갈색 색소) 생성을 조절합니다[2,4,7].
포유류와 어류 사이에는 차이가 있지만 제브라피쉬는 복어가 가지고 있지 않은 MC5R과 MC3R의 extracopy를 가지고 있으며[7], 이 신호전달 경로는 여전히 제브라피쉬에 존재하며 포유류 멜라닌 세포에서와 똑같이 작동합니다[7]. 멜라닌 색소 형성 억제에 대한 연구는 초기 배아의 빠른 발달과 관찰의 용이성과 같은 연구 이점으로 인해 증가하고 있다[8-11]. 이러한 현상에서 많은 이전 연구에서 이 신호전달 경로의 억제가 멜라닌 생성을 감소시키고 비사보롤-안젤론, 4-하이드록시{9}}메톡시 신남알데하이드 및 디페닐-메틸렌-하이드라진 카보 티아민을 비롯한 여러 억제제를 발견했습니다[12 -14].
잘 알려진 열충격 단백질 90 억제제인 게두닌(Ged)은 백합과 식물의 속에서 발견되는 리모노이드입니다. 이 리모노이드는 주로 어린 인도 님나무(Azadirachta indica) 열매의 외과에 풍부하며 항암, 항말라리아, 항염증, 항당뇨병, 항알레르기, 살충, 제초, 항진균 등 다양한 생물학적 활성을 가지고 있습니다[15-18]. Ged의 항 멜라닌 생성 효과의 메커니즘에 대한 보고는 없습니다.
멜라닌 관련 질병 또는 피부색 변화를 치료하기 위한 의약품 또는 화장품 제제 후보로서 Ged는 안전하고 자연적으로 발생하는 식물 특성으로 인해 이점이 있을 수 있습니다[19]. B16F10 마우스 흑색종 세포와 제브라피쉬 배아를 각각 사용하여 Ged의 항멜라닌 생성 효과를 in vitro 및 in vivo에서 평가하여 상업용 화장품 시장의 가장 큰 부분 중 하나인 적절한 미백제 후보를 찾았습니다. 동시에 zebrafish를 통해 급성 독성 Ged가 동물에 어떤 영향을 미칠 수 있는지 보여주기 위한 테스트도 수행되었습니다.
2. 재료 및 방법
2.1. 화학물질 및 시약
Ged는 Microsource Discovery Systems, Inc.(Gayloardville, CT, USA)에서 구입했습니다. 멜라닌 생성 자극제, -MSH, 항멜라닌 생성 화합물 및 코지산은 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)에서 구입했습니다. 다른 모든 시약은 분자생물학 등급보다 높았다.
2.2. 세포 배양
마우스 흑색종-암종 세포주 B16F10은 American TypeCulture Collection(ATCC, Manassas, VA, USA)에서 입수하여 10% 소태아혈청(v/v)으로 배양하였고, 페니실린은 Dulbecco-modified Eagle's media(GE Healthcare, Chicago, IL, USA) 5% CO2의 습한 대기에서. 세포를 confluency가 80%에 도달할 때까지 배양하고 1:8의 분할 비율로 주 3회 분할하였다. 12시간마다 세포를 관찰하고 형태학적 변화를 확인하였다. 사용된 세포의 통과 수는 작게 유지되었습니다.
2.3. 세포 생존력 분석
B16F10 마우스 흑색종 세포주에 대한 Ged의 증식 효과를 평가하기 위해 CellTiter96 Aqueous One Solution 세포 증식 분석 키트(Promega, Madison, WI, USA)를 사용하여 이전에 보고된 프로토콜[20]에 따라 MTS 분석을 수행했습니다. 간단히 말해서, 96-웰 플레이트의 각 웰에 1 × 103개의 세포를 파종하고 회수를 위해 24시간 동안 인큐베이션했습니다. 배양 후 Ged는 0, 3.12, 6.25, 12.{14}}, 50, 75 µM의 다양한 농도로 처리되었습니다. 48시간 후, 20μL의 MTS 분석 용액을 Ged가 있는 100-μL 배지와 Ged가 없는 웰을 포함하는 각 웰에 첨가했습니다. 4시간 동안 추가로 배양한 후 Multiskan GO 분광광도계(ThermoScientific, Waltham, MA, USA)를 사용하여 490 nm에서 흡광도를 측정했습니다. 흡광도 데이터는 대조군으로 정규화되었고 백분율 억제 비율로 표시되었습니다.
2.4. 멜라닌 함량 측정
세포외 및 세포내 멜라닌 함량은 이전에 보고된 수정된 방법에 따라 결정되었습니다[21]. -MSH(200nM) 전처리된 흑색종 세포를 kojic acid(200μM) 및 Ged(25 및 50μM) 유무에 관계없이 72시간 동안 배양했습니다. 인큐베이션 후, 페놀-레드가 없는 배양 배지를 수집하고, 배양된 세포를 RIPA 용해 완충액으로 수확하였다. 수확한 세포를 4 ºC, 13,{10}} rpm에서 15분 동안 원심분리하고 펠렛을 95ºC에서 1M NaOH, 10% DMSO 용액에 2시간 동안 용해했습니다. 분광광도계를 이용하여 470 nm에서 채취한 배지와 용해된 멜라닌의 흡광도를 측정하였다. 모든 샘플은 BCA 방법에 따라 결정된 단백질 농도로 정규화되었습니다.
2.5. 세포내 티로시나제 활성 분석
세포 티로시나제 활성은 이전에 보고된 대로 L-디히드록시페닐알라닌(L-DOPA)의 산화 속도를 측정하여 측정했으며 약간의 변형을 가했습니다[22]. B16F10 마우스 흑색종 세포를 1시간 동안 200nM의 -MSH로 전처리한 후 200μM으로 처리했습니다. kojic acid, Ged 유무에 관계없이(25 및 50 μM), 72시간 동안 배양했습니다. 배양 후, 단백질분해효소억제제가 포함된 용해 완충액으로 세포를 수확하고, 샘플을 13,{13}} x g, 4℃에서 15분 동안 원심분리했습니다. 상층액을 새 튜브로 옮겼습니다. 각 샘플(20μL)과 80μL의 40mM L-DOPA를 96-웰 플레이트에서 혼합하고 37℃에서 2시간 동안 배양했습니다. oxidatedL-DOPA에 의한 475 nm에서의 흡광도는 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 결정되었습니다. 흡광도 값은 각 샘플의 단백질 농도로 정규화되었습니다.
Cistanche 추출물 혜택: 티로시나제 발현을 억제합니다.
2.6. RNA 분리 및 qRT-PCR
총 RNA 분리 및 qRT-PCR은 [18]에서 이전에 설명한 방법에 따라 수행되었습니다. 총 RNA는 Trizol 시약(Ambion, Austin, TX, USA)을 사용하여 각 샘플에서 간략하게 추출되었습니다. 추출된 total RNA 농도는 260 nm에서의 흡광도에 의해 결정되었고, Multiskan GO microplate reader(Thermo Scientific)를 이용하여 260:280 및 260:230 nm의 흡광도 비율로 total RNA의 품질을 확인하였다. Maxima first-strand cDNA 합성 키트(Thermo Scientific)를 사용하여 TotalRNA(5 µg)를 cDNA로 합성하고 cDNA를 합성했습니다. Mitf, Tyr, Trp{9}} 및 Trp{10}}의 mRNA 발현 수준은 Luna Universal qPCR Master Mix(New England Biolabs, Ipswich, MA, USA) 및 QuantStudio 3 Real-Time PCR 기기( 강사의 프로토콜에 따라 Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). 유전자의 발현 수준은 GAPDH(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)로 정규화되었습니다.
2.7. 면역블롯 분석
면역블롯 분석은 앞서 기술한 방법[23]에 따라 수행하였다. Ceti lysis buffer(Translab, Daejeon, Korea)를 사용하여 B16f10 세포의 단백질을 수집하고, Pierce BCA 단백질 분석 키트(Thermo Scientific)를 사용하여 농도를 측정하였다. 각 샘플의 동량의 단백질(30μg)을 소듐도데실 설페이트-폴리아크릴아마이드 젤에 로딩하고 전기영동하였다. 분리 후 단백질을 니트로셀룰로오스 막으로 옮기고 10% 무지방 우유 용액에서 2시간 동안 막을 막았다. 차단된 막을 4℃에서 1차 항체와 함께 밤새 배양한 다음, 26℃에서 2시간 동안 2차 항체와 함께 다시 배양하였다. 1차 항체와 2차 항체를 각각 1:1000과 1:3000의 비율로 희석하였다. 마지막으로 ECL 시약(SuperSignal, Thermo Scientific)과 함께 ChemiDoc(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)를 사용하여 얼룩진 멤브레인을 문서화했습니다. 1차 및 2차 항체는 Santa Cruz Biotechnology(Dallas, TX, USA)에서 구입했습니다.
2.8. 제브라피쉬 배아 테스트
Wild-type zebrafish were thankfully obtained from Professor Tae-Lin Huh, the School of Life Science and Biotechnology, Kyungpook National University, Daegu, Republic of Korea. The strain was kept for more than eight generations in a laboratory condition of 26 ◦C ± 1 ◦C, and a day-to-night ratio of 8:16. General fish care and breeding conditions, as previously described, were followed [24]. Ten groups of zebrafish were mated to obtain embryos with a mating ratio (male: female, 1:2), and among obtained embryos, healthy embryos had >시비율 80%를 선정하여 실험에 사용하였다. 각 처리 그룹의 12개의 건강한 배아는 차폐 단계에서 E3 배지에서 Ged(25, 50, 75, 100μM) 및 코직산(8mM)이 있거나 없는 {{1}웰 플레이트의 각 웰에 위치했습니다.At 수정 후 24시간(h/pf), 배아를 융모막 제거하고 72h/pf까지 24시간마다 이상을 확인했습니다. 배아의 표현형은 DP80CCD(Olympus Life Science Solutions, Waltham, MA, USA)가 있는 BX53 직립 현미경을 사용하여 그룹 간의 차이를 비교하기 위해 측면 및 등면에서 촬영되었습니다. 촬영 후 배아를 Ceti lysis buffer(TransLab)로 균질화하여 B16F10 세포 멜라닌 함량 측정과 동일한 멜라닌 농도 측정을 수행하였다.
2.9. 통계 분석
이 연구에서 제시된 모든 통계 분석은 GraphPad Prismv.8.{1}}(GraphPad Software, San Diego, CA, USA)을 사용하여 수행되었습니다. 다중 비교에는 Tukey의 검정을 사용한 일원 분산 분석이 사용되었습니다. 모든 데이터는 평균 ± 표준편차로 표시됩니다. 유의한 차이는 p < 0.05에서="" 통계적으로="" 유의한="" 것으로="">
3. 결과
3.1. B16F10 세포에서 Piperlongumine의 세포독성 효과
Ged의 멜라닌 생성 억제 효과를 조사하기 전에 본 연구에서 용량 범위를 설정하기 위해 B16F10 세포주에서 생존력 테스트를 수행했습니다. 3.12~50μM의 농도 범위에서 세포는 성장에 대한 억제 효과를 나타내지 않았으며 상대 증식은 91.0%~118.7%였습니다(그림 1). 대조적으로, 통계적 유의성은 없었지만 75μM 처리 그룹은 성장이 약간 억제되었습니다(89.3%, 그림 1). 따라서 나머지 세포주 실험에서 최고 농도는 50μM로 설정되었습니다.
그림 1. B16F10 세포에서 게두닌(Ged)의 세포독성
3.2. 게두닌은 B16F10 마우스 흑색종 세포에서 멜라닌 생성 및 세포내 티로시나제 활성을 억제합니다
우리는 B16F10 마우스 흑색종 세포에서 Ged의 항멜라닌 생성 효과를 평가했습니다. MC1R 작용제인 -MSH는 세포 내 및 세포 외 멜라닌 생성을 효과적으로 유도했습니다(그림 2a-c). 수집된 배지의 색상은 -MSH로 어두웠습니다(그림 2a). Ged를 추가하면 색이 바래고 효과는 용량 의존적이었습니다(그림 2a). 총 멜라닌 함량의 결과, -MSH는 대조군보다 약 7배 높은 멜라닌 세포의 멜라닌 생성을 증가시켰고 멜라닌 생성의 잘 알려진 양성 대조군인 코직산을 첨가하여 멜라닌 감소를 자극했습니다(그림 2d). Ged는 또한 이 연구에서 테스트된 모든 농도에서 멜라닌 세포에서 자극 유도 멜라닌 생성을 단축했습니다(그림 2d). 또한, tyrosinase 활성 테스트에서 Ged는 멜라닌 생성에서 속도 제한 효소인 tyrosinase에 대한 강력한 억제 효과를 보여주었습니다(그림 2e). 50μM Ged 처리군에서 tyrosinase의 상대적 활성은 대조군과 a-MSH로 자극된 군에 비해 각각 20%와 12.24% 감소했습니다.
그림 2. B16F10 세포에서 알파 멜라닌 세포 자극 호르몬(-MSH) 자극 멜라닌 생성에 대한 정품(Ged)의 항멜라닌 생성 효과.
3.3. 게두닌은 -MSH 유도 멜라닌 생성 관련 유전자 발현을 감소시킵니다.
-MSH(200nM) 유도된 Mitf의 mRNA 수준; 멜라닌 생성 전사 인자 및 표적 유전자 Tyr, Trp-1 및 Trp{3}}(그림 3). Ged의 처리는 25 및 50 μM의 농도에서 용량 의존적으로 모든 유전자의 mRNA 수준을 감소시켰습니다(그림 3). 양성 대조군인 kojic acid(200 μM)에 비해 Ged는 mRNA 감소에 더 효과적이었습니다. B16F10 세포에서 멜라닌 생성 관련 유전자의 수준. 또한 Mitfand Tyr의 수준은 50 µM 농도에서 -MSH 유도 세포보다 각각 0.{14}} 및 0.{16}}배 낮습니다(그림 3a,b). 이들 유전자의 하향 조절된 mRNA 수준은 대조군보다 Tyr 수준을 낮추고 멜라닌의 TYR 생성량을 감소시켰다.
그림 3. 멜라닌 생성 관련 유전자에 대한 감소 효과.
3.4. 게두닌 감소 TYR 및 TYR-1 양
TYR은 멜라닌 생성에 중요한 역할을 하며, 이 효소의 단백질 수준은 멜라닌 생성에 직접적인 영향을 미칩니다. 면역블롯 분석을 통해 mRNA 수준 감소로 인한 단백질 TYR 양의 변화를 확인하고자 하였다. TYR은 대조군에 비해 눈에 띄게 감소했으며 -MSH는 용량 의존적으로 처리되었습니다(그림 4a). 또한 TYR의 필수 전사 인자인 TRP-1가 약간 감소했습니다(그림 4a). 결과는 각 단백질의 밴드가 하우스 키핑 단백질인 GAPDH에 의해 정규화되었을 때 더 분명했습니다(그림 4b,c).
그림 4. 알파 멜라닌 세포 자극 호르몬(-MSH) 유도 B16F10 세포의 웨스턴 블로팅.
3.5. 초기 개발 단계에서 Zebrafish에 대한 Gedunin의 독성
제브라피쉬 초기 단계 발달에 대한 Ged의 독성 평가는 생체 내에서 Ged의 멜라닌 생성 방지 테스트를 평가하기 전에 수행되었습니다. 제브라피쉬 배아의 형태학적 이상은 처리된 Ged 농도에서 관찰되지 않았습니다(그림 5a). Ged, 25, 50, 75 및 100 μM의 조사된 농도에서 Ged 처리 그룹의 생존율은 화학 처리 기간의 72시간에서 유의한 차이가 없었습니다(그림 5b).
그림 5. zebrafish 초기 단계 개발에 대한 정품(Ged)의 독성.
3.6. Zebrafish 배아에서 감소된 멜라닌 함량 Gedunin
Ged는 제브라피쉬 배아에서 발달 독성이 없기 때문에 Ged, 25, 50, 75 및 100μM의 일련의 농도에서 항멜라닌 생성 효과를 조사했습니다. 광학 관찰에서 우리는 안료 zebrafish의 점을 확인했습니다. 제브라피쉬 배아의 오버헤드 측면도는 그림 5a에 나와 있습니다. Kojic acid는 zebrafish 배아의 색소 생성을 억제하는 효과가 있습니다. Ged 처리된 제브라피쉬 배아는 머리에 색소점이 더 적었습니다(그림 6a). 또한 zebrafish 배아의 전신에서 추출한 총 멜라닌 함량은 kojic acid, 양성 대조군 및 Ged 처리군 모두에서 72시간 동안 Ged 노출 후 감소했습니다(그림 6b,c).
그림 6. 생체 내 멜라닌 생성에 대한 정품의 효과.
4. 토론
이 연구에서는 멜라닌 생성에 대한 Ged의 억제 특성을 평가했습니다. 우리의 연구 결과에 따르면 Ged의 억제 능력은 kojic acid(그림 2)보다 약 11.{1}배 높았으며 Ged의 농도( 50μM)은 양성대조군인 kojic acid(200μM)보다 낮았다. 이는 L-Dopa를 DQ로 전환하는 효소인 세포내 티로시나제 활성이 약해진 것과 일치했으며, 이는 유멜라닌과 페오멜라닌의 주요 전구체입니다. 감소된 Tyr 활성은 전체 멜라닌 생산 과정의 속도 저하와 최종 산물인 유멜라닌과 페오멜라닌의 부족을 수반합니다[1-3]. 전사체 및 TYR 수준은 Mitf, Trp-1 및 Trp-2[1,2]와 같은 일련의 전사인자에 의해 조절되었습니다. 감소된 양의 단백질 및 mRNA 수준은 정량적 PCR 및 웨스턴 블롯팅 모두에서 용량 의존적으로 25 및 50 μM 농도의 Ged 처리로 -MSH에 의한 -MSH-MC1R-PKA-CREB 신호 전달 축을 통해 활성화된 MC1R을 의미한다. 이전에 설명한 바와 같이 MITF의 양이 감소하면 Tyr, Trp{19}} 및 Trp{20}}가 이러한 유전자의 프로모터 영역에 덜 결합하여 부족하게 됩니다[25-27]. 이러한 전사 인자의 감소는 TYR을 더 낮은 수준으로 유도하고 B16F10 세포에서 멜라닌 색소 생성을 억제합니다. 또한, 현재 결과는 멜라닌 세포에서 멜라닌 생성의 또 다른 임계점인 Ged의 TYR 억제 효과를 보여줍니다. Ged는 또한 시험관 내 및 생체 내 모델에서 zebrafish 초기 단계 발달 동안 색소 생성에 대한 억제 효과를 보여주었습니다. 우리의 결과는 Ged를 72시간 동안 처리한 것이 zebrafish 배아색소침착을 현저하게 감소시키는 것으로 나타났습니다. Ged의 존재에 따라 관련 유전자의 총 멜라닌 함량 및 mRNA 수준이 감소하였고, 이러한 결과의 경향은 Ged의 시험관내 항멜라닌 생성 특성을 강력하게 지지하였다.
또한, Ged의 억제능은 화장품 산업에서 미백제로 가장 널리 알려진 화합물 중 하나인 kojic acid보다 훨씬 강력하였다[6,28]. Ged가 작용하는 농도는 kojic acid보다 상대적으로 낮았다. 또한, 이전 보고서에서는 또 다른 일반적인 미백제인 arbutin이 kojic acid와 유사한 항 멜라닌 생성 효과가 있음을 보여주었습니다[2]. 따라서 Ged는 현재 사용되는 알부틴이나 코직산을 대체하는 미백제로, 유망한 특성에 대해 항흑색종제로 간주되어야 합니다.
Ged의 멜라닌 생성 억제 특성은 [29,30] 이전에 제안되었지만, 이러한 연구는 효과의 특정 메커니즘에 초점을 맞추지 않고 단순히 세포 독성 효과와 멜라닌 생성량의 변화를 in vitro에서 관찰한 반면, 항증식 활성 및 억제 효과는 HSP 90 표현이 강조 표시되었습니다[31-33]. Ged가 멜라닌 생성 억제제로서의 가능성이 보고되었습니다. 그러나 이들 연구는 효과의 구체적인 기전에 초점을 두지 않았고, 단순히 시험관 내에서 세포독성 효과와 멜라닌 생성량의 변화를 관찰하였다. 멜라닌 생성 관련 유전자의 mRNA 수준과 단백질 양을 확인하여 세포 수준 기전을 규명하고자 하였다. 본 연구는 기존의 보고와 함께 화장품 성분의 성분인 게다스(Gedas)가 뛰어난 항암 및 항멜라닌 생성이라는 두 가지 이점에 대한 새로운 시각을 보여주었고, 이는 특히 자외선에 의한 흑색종과 색소 축적에 동시에 적용될 수 있을 것입니다.
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5. 결론
결론적으로, 이 모든 결과는 새로운 화합물 Ged가 멜라닌 생합성을 위한 탈색소침착 시약으로 사용될 수 있음을 보여주었으며, 이는 하류 단백질인 TYR, TRP{0}} 및 TRP{1}}를 마스터에 비해 감소된 양으로 단축시켰습니다. zebrafish 모델의 시험관 내 및 생체 내 시스템 모두에서 조절 단백질, MITF.
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