3. 토론

Plumbagin은 식물 유래 2차 대사산물이며 항염증, 항암, 항알레르기 및 항균 활성을 포함한 여러 생물학적 기능을 나타냅니다[8,9]. 그러나 플럼바진이 과색소침착 및 흑색종과 관련된 멜라닌 생성에 억제 효과가 있는지는 알려지지 않았습니다. 본 연구에서는 플럼바진이 B16F10 흑색종 세포의 멜라닌 생성을 강력하게 억제함을 입증하였으며, 플럼바진의 항염증, 항알레르기, 항균, 항멜라닌 생성 활성을 기반으로 한 스킨케어 화장품 개발의 기회를 제공할 수 있을 것입니다.

관련 연구에 따르면, Cistanche는 "생명을 연장하는 기적의 허브"로 알려진 일반적인 허브입니다. 주성분은 시스타노사이드(cistanoside)로 항산화, 항염증, 면역기능 촉진 등 다양한 효능이 있다. cistanche와 피부 미백 사이의 메커니즘은 citanche glycosides의 항산화 효과에 있습니다. 인간 피부의 멜라닌은 티로시나제에 의해 촉매되는 티로신의 산화에 의해 생성되며, 산화 반응에는 산소의 참여가 필요하므로 체내의 산소가 없는 라디칼이 멜라닌 생성에 영향을 미치는 중요한 요인이 됩니다. Cistanche는 산화 방지제인 cistanoside를 함유하고 있으며 신체의 자유 라디칼 생성을 감소시켜 멜라닌 ​​생성을 억제할 수 있습니다.

미백에 대한 Rou Cong Rong 혜택을 클릭하십시오.

더 많은 정보를 위해서:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

멜라닌 생성의 상향 조절은 혈액 및 종양 조직에서 과발현된 티로시나제 수준을 갖는 악성 흑색종에서 종종 관찰되기 때문에 멜라닌 생성이 악성 흑색종의 화학 요법에 대한 잠재적인 표적임이 명백합니다[1]. 현재 연구에서 우리는 plumbagin이 멜라닌 생성과 관련된 전사 기계와 독립적으로 티로시나제 활성을 직접적으로 억제한다는 것을 발견했습니다(그림 6). 따라서, 우리의 결과는 plumbagin이 악성 흑색종 관리를 위한 예방 및 치료 전략의 잠재적 구성 요소일 수 있음을 시사합니다. 실제로, 흑색종 치료에 대한 플럼바긴의 항흑색종, 화학감작 및 방사선감작 효과가 보고되었습니다[17-21].

플럼바진의 항암 및 항염증 효과를 다룬 이전 연구에서는 약 5–10 µM의 플럼바진(본 연구에서 사용된 농도보다 높음)이 체외 모델에 사용되었습니다[17,22 ,23]. 따라서 스킨케어 화장품에 의해 손상될 수 있는 정상각화세포(HaCaT)와 수정체상피세포(B3)를 포함한 증식세포에서 플럼바진의 독성 영향을 조사하였다. 우리의 결과는 낮은 농도, 약 0.5–1 μM의 plumbagin이 정상적인 각질 세포와 수정체 상피 세포에 독성이 없지만 티로시나제 활성과 멜라닌 합성을 감소시키기에 충분히 효과적이라는 것을 보여주었습니다. 또한 플럼바긴이 피부 미백제로 잘 알려진 1mM 알부틴이나 0.2mM 코직산보다 멜라닌 생성을 더 효과적으로 억제한다는 사실도 발견했습니다. 이러한 결과는 플럼바진이 미백화장품 개발의 성분으로 사용하기에 안전함을 시사한다.

본 연구에서는 L-DOPA 산화에 기초한 세포 및 무세포 티로시나제 활성 분석법을 사용하여 티로시나제 효소 반응에 대한 플럼바긴의 억제 효과를 연구하였다. 그럼에도 불구하고 우리는 plumbagin이 tyrosinase 활성을 억제하는 방법에 대한 정확한 분자 메커니즘을 제안하지 않았습니다. 이 메커니즘은 plumbagin이 티로시나제와 직접 상호 작용하여 옥시다제 활성을 억제하는지 또는 티로시나제 활성을 감소시키는 간접적인 효과가 있는지 여부를 결정하기 위해 추가로 조사되어야 합니다.

4. 재료 및 방법

4.1. 시약 및 항체

버섯에서 정제된 Plumbagin, -MSH(M4135), 알부틴(A4256), 코직산(K3125), L-DOPA(333786) 및 티로시나아제(T3824)는 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)에서 구입했습니다. MITF(#12590), p-AKTS473(#4060), p-AKTT308(#13038), p-CREB(#9198), p-ERK1/2(#4370), ERK1/2(#9102), H2AX(#9718), PARP(#5625) 및 caspase-3(#9665)는 Cell Signaling Technology(Danvers, MA, USA)에서 구입했습니다. Tyrosinase(sc-7833) 및 -tubulin(sc-9104)은 Santa Cruz Biotechnology(Dallas, TX, USA)에서 구입했습니다.

4.2. 세포 배양 및 세포 생존능 분석

4.3. 면역 블로팅

4.4. 세포내 및 세포외 멜라닌 함량 측정

멜라닌 함량은 이전에 설명한 방법을 약간 수정하여 결정하고 정량화했습니다[2,24]. 멜라닌 함량 분석을 위해 B16F10 세포를 10% 태아 소 혈청을 포함하는 페놀 레드가 없는 DMEM에서 배양했습니다. B16F10 세포를 플럼바긴의 부재 또는 존재 하에 -MSH 처리와 함께 3일 또는 4일 동안 배양하였다. 배양된 세포 또는 배지를 수확하고 펠렛을 10% DMSO를 함유한 1N NaOH에 80℃에서 1시간 동안 용해시켰다. 멜라닌 함량은 흡광도 판독기를 사용하여 475nm(OD475)에서 측정한 다음 멜라닌 함량을 세포 단백질 농도로 정규화했습니다.

4.5. RNA 분리 및 정량적 RT-PCR

4.6. 세포 티로시나제 활성 분석

세포 티로시나제 활성은 수정된 이전에 기술된 방법을 사용하여 결정되었다[25,26]. 배양된 B16F10 세포를 플럼바긴의 부재 또는 존재 하에 -MSH와 함께 인큐베이션한 다음, 세포를 세척하고 1% 데옥시콜산나트륨 및 0.5% 트리톤 X{{8} }. 단백질 농도를 결정한 후, 단백질 50 μg을 2.0mM L-DOPA 및 0.1M PBS(pH 6.8)와 함께 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. L-DOPA의 산화는 흡광도 판독기를 사용하여 475nm(OD475)에서 측정되었습니다. 활성은 다음 공식을 사용하여 측정되었습니다: 티로시나제 활성(백분율) =(시료의 OD475/대조군의 OD475) × 100.

4.7. 무세포 티로시나아제 활성 분석

4.8. DPPH 라디칼 소거 활성 검정

4.9. 통계 분석

5. 결론 

이 연구의 주요 발견은 plumbagin이 (i) 티로시나제 활성을 억제함으로써 -MSH로 유발된 멜라닌 합성을 억제하고; (ii) 멜라닌 생성과 관련된 AKT 및 ERK1/2 활성화를 포함하는 MITF 연결 전사 기계 및 신호 전달 캐스케이드에 영향을 미치지 않으며; (iii) 농도가 5 μM 미만일 때 정상 각질 세포(HaCaT) 및 수정체 상피 세포(B3)에서 독성을 일으키지 않습니다. 종합하면, plumbagin은 CREB-MITF 전사 축과 독립적인 티로시나제 활성을 억제함으로써 -MSH로 유도된 멜라닌 합성을 제거합니다. 따라서 이러한 결과는 피부 미백 화장품 개발에 사용함으로써 과색소침착을 감소시키는 유망하고 안전한 천연물 플럼바진을 제안합니다.

약어

참조

1. Riley, PA Melanogenesis 및 흑색종. 색소세포해상도 2003, 16, 548–552. [CrossRef] [펍메드]

2. 배준석; 한엠; 야오, C.; Chung, JH Chaetocin은 ERK의 활성화를 통해 B16F10 마우스 흑색종 세포에서 IBMX로 유도된 멜라닌 생성을 억제합니다. 화학. 비올. 상호 작용합니다. 2016, 245, 66–71. [CrossRef] [펍메드]

3. 디멜로, SA; 핀레이, GJ; 브리티시 컬럼비아 주 배글리; Askarian-Amiri, ME 멜라닌 생성의 신호 전달 경로. 국제 J.Mol. 과학. 2016. [크로스리프] [펍메드]

4. 김형주; 요네자와, T.; 테루야, T.; 우제티; Cha, 폴리에톡시 플라보노이드인 BY Nobiletin은 인간 멜라닌 세포에서 엔도텔린-1 및 SCF 유도 색소 침착을 감소시켰습니다. 광화학. 포토바이올. 2015, 91, 379–386. [CrossRef] [펍메드]

5. 강성주; 최비란; 이익; 김성서; 이효리; 박형식; 송, CH; 이영재; Ku, SK B16F10 흑색종 세포에서 멜라닌 생성에 대한 건조 석류 농축 분말의 억제 효과; p38 및 PKA 신호 전달 경로의 관련. 국제 J.Mol. 과학. 2015, 16, 24219–24242. [CrossRef] [펍메드]

6. 김재원; 김혜리; 김정호; 권오씨; 아들, ES; 이찬수; 박영주 약용버섯 영지버섯의 새로운 멜라닌 생성억제제인 ganodermanondiol의 효과. 국제 J.Mol. 과학. 2016, 17, 1798. [CrossRef] [PubMed]

7. Tsao, YT; 황, YF; 쿠오, CY; 린, YC; WC 치앙; WK 왕; Hsu, CW; Lee, CH Hinokitiol은 B16F10 마우스 흑색종 세포에서 AKT/mTOR 신호전달을 통해 멜라닌 생성을 억제합니다. 국제 J.Mol. 과학. 2016, 17, 248. [CrossRef] [PubMed]

8. Padhye, S.; Dandawate, P.; 유수피피, M.; 아마드, A.; Sarkar, FH plumbagin 및 그 유사체의 의학적 특성에 대한 관점. 중간 해상도 2012, 32, 1131–1158. [CrossRef] [펍메드]

9. 사우스캐롤라이나주 굽타; 김정호; 프라사드, S.; Aggarwal, BB 기능 식품에 의한 염증 경로의 조절을 통한 종양 세포의 생존, 증식, 침입, 혈관 신생 및 전이의 조절. Cancer Metastasis Rev. 2010, 29, 405–434. [CrossRef] [펍메드]

10. JK 잭슨; 이고, T.; 헌터, WL; Burt, 항관절염제로서의 HM Topoisomerase 억제제. 염증. 해상도 2008, 57, 126–134. [CrossRef] [펍메드]

11. 아마드, A.; Banerjee, S.; 왕, Z.; 공디; Sarkar, FH Plumbagin에 의해 유도된 인간 유방암 세포의 세포사멸은 NF-κB 및 Bcl-2의 불활성화에 의해 매개됩니다. 제이셀. 생화학. 2008, 105, 1461–1471. [CrossRef] [펍메드]

12. 아지즈, MH; Dreckschmidt, NE; Verma, AK Plumbagin은 약용 식물에서 추출한 나프토퀴논으로 호르몬 불응성 전립선암의 성장과 침윤을 억제하는 새로운 억제제입니다. 암 해상도 2008, 68, 9024–9032. [CrossRef] [펍메드]

13. 타스니, KA; Rakesh, S.; Rojini, G.; Ratheeshkumar, T.; Srinivas, G.; Priya, S. BRCA1-의 에스트로겐 의존성 세포 신호 및 세포자살은 플럼바진 및 기타 화학요법제에 대한 반응으로 BG1 난소암 세포를 차단했습니다. 앤. 온콜. 2008, 19, 696–705. [CrossRef] [펍메드]

14. Gomathinayagam, R.; Sowmyalakshmi, S.; 마르다틸라, F.; 쿠마르, R.; 매사추세츠 악바르샤; Damodaran, C. 비소세포 폐암 세포에 대한 천연 화합물인 plumbagin의 항암 메커니즘. 항암 해상도 2008, 28, 785–792. [펍메드]

15. 왕 CC; 치앙 YM; 성찬성; 쉬, YL; 장재규; Kuo, PL Plumbagin은 인간 흑색종 A375.S2 세포에서 반응성 산소종/c-Jun N-말단 키나아제 경로를 통해 세포 주기 정지 및 세포사멸을 유도합니다. 암 레트. 2008, 259, 82–98. [CrossRef] [펍메드]

16. Shih, YW; 이영찬; 우, PF; 이영비; Chiang, TA Plumbagin은 매트릭스 메탈로프로티나제-2 및 유로키나제-플라스미노겐 활성제의 생성을 감소시켜 간암 HepG2 세포의 침입 및 이동을 억제합니다. 헤파톨. 해상도 2009, 39, 998–1009. [CrossRef] [펍메드]

17. 아누프, 아칸소; 라마찬드란, R.; Krishnasamy, R.; 간디, PS; Periyasamy, S. SK-MEL 28 흑색종 세포주에 대한 Plumbago rosea 및 정제된 성분인 plumbagin의 항증식 효과. 약리학. 해상도 2014, 6, 312–319.

18. 고다, R.; 샤르마, A.; Robertson, GP 흑색종 종양 성장에 대한 celecoxib 및 plumbagin의 상승적 억제 효과. 암 레트. 2017, 385, 243–250. [CrossRef] [펍메드]

19. Li, J.; Shen, Q.; 펭, R.; 첸, R.; Jiang, P.; 리, 와이.; 장, L.; Lu, J. Plumbagin은 인간 흑색종 A375 세포에서 사멸 수용체의 상향 조절을 통해 TRAIL 매개 세포자멸사를 강화합니다. J. Huazhong Univ. 과학. 기술. 중간 과학. 2010, 30, 458–463. [CrossRef] [펍메드]

20. 나이르, S.; 나이르, RR; Srinivas, P.; Srinivas, G.; Pillai, MR 자궁경부암 세포에서 플럼바진의 방사선감작 효과는 세포사멸 경로의 조절을 통한 것입니다. 몰. 발암물질. 2008, 47, 22–33. [CrossRef] [펍메드]

21. 프라사드, VS; 데비, PU; 라오, BS; Kamath, R. 시험관 내에서 성장한 마우스 흑색종 세포에 대한 plumbagin의 방사선감작 효과. 인디언 J. 특급 비올. 1996, 34, 857–858. [펍메드]

22. 리, YC; 그, SM; 그, ZX; 리, 엠.; 양유; Pang, JX; 장, X.; 차우, 케이; Zhou, Q.; Duan, W.; 외. Plumbagin은 인간 비소세포 폐암 세포에서 PI3K/Akt/mTOR 경로의 억제를 통해 세포사멸 및 자가포식 세포 사멸을 유도합니다. 암 레트. 2014, 344, 239–259. [CrossRef] [펍메드]

23. 체커, R.; 샤르마, D.; 산두르, SK; 카남, S.; Poduval, TB plumbagin의 항염증 효과는 림프구에서 NF-κB 활성화 억제에 의해 매개됩니다. 국제 면역약물. 2009, 9, 949–958. [CrossRef] [펍메드]

24. 김비; 이성환; 최 켄터키; Kim, HS N-Nicotinoyl tyramine은 새로운 niacinamide 유도체로 MITF 유전자 발현을 억제하여 멜라닌 생성을 억제합니다. 유로. J.Pharmacol. 2015, 764, 1–8. [CrossRef] [펍메드]

25. 이효리; 장은지; 배승영; 전재은; 박형주; 신제이; Lee, SK 해양 해면 Phorbas sp.의 고산소 디테르페노이드인 Gauguin D의 티로시나아제 발현 및 분해 조절을 통한 항멜라닌 생성 활성. 3월 Drugs 2016, 14, 212. [CrossRef] [PubMed]

26. 와인더, AJ; Harris, H. tyrosinase의 tyrosine hydroxylase 및 DOPA oxidase 활성에 대한 새로운 분석. 유로. J. Biochem. 1991, 198, 317–326. [CrossRef] [펍메드]

자세한 정보: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501