마우스에서 면역의 영향에 관한 연구

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30명 중 2명DBA/2NCrl(D2N) 마우스의 배경 데이터 분석에서 대조군 균주로 사용DBA/2N-MDX감염을 시사하는 비정상적 소견을 보이는 쥐. 사례 1: 4-주된 수컷 D2N 마우스가 왼쪽 신장에 흰색 플라크 병변을 보여(임상 증상 없음) 신장의 병리학적 검사를 수행했습니다. 주로 호중구를 중심으로 하는 염증성 세포 침윤이 좌측 신장의 세뇨관과 간질에서 관찰되었고, 좌측 신장 분절에서 황색포도상구균(S.aureus)이 검출되었다. 따라서 왼쪽 신장의 이 병변은 화농성으로 진단되었습니다.세뇨관 간질S. 아우레우스 감염으로 인한 신염. 사례 2: 9-주된 수컷 D2N 마우스에서 체중 감소가 있는 왼쪽 사경이 감지되었습니다. 조직학적 평가에서 유스타키오관의 인두 구멍 주위의 삼출성 염증과 농양 형성 및 그람 양성 미세 집락으로 클러스터가 있는 양쪽 중이 및 왼쪽 내이의 화농성 염증이 나타났습니다. S. aureus는 양쪽 외이도의 면봉 배양에서 확인되었습니다. 결과적으로 이번 사경은 S. aureus-suppurative otitis media와 인터넷에 의해 발생하였다. S. 아우레우스는 면역 능력이 있는 실험 동물에게 화농성 질환을 자주 일으킬 가능성이 있는 기회 감염 병원체로 잘 알려져 있습니다. 그러나 우리가 아는 한 D2N 마우스에서 사경이 나타난 S. 아우레우스 감염 사례는 보고되지 않았습니다.

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2018년 국방의과대학 실험동물과학센터 실험용 쥐에서 메티실린 내성 황색포도상구균(MRSA) 균주가 출현하여MRSA그 후 다른 마우스 방에서도 마우스에서 분리주를 회수했습니다. 이들 MRSA 분리주에 대해 MLST(Multi-locus sequence typing), 황색포도상구균 단백질 A(spa)형, SCCmec형 및 응고효소형과 같은 분자형 분석을 통해 유전자형을 확인했습니다. 모든 분리주는 동일한 유전자형(ST1, spa t1784, SCCmec 유형 IV 및 응고효소 유형 VII)을 나타내어 분리주가 동일한 클론임을 시사합니다. 2018년 MRSA가 출현하기 전에는 이러한 유전자형을 가진 분리주가 이 시설에서 분리되지 않았으므로 MRSA 클론이 인간 또는 실험실 동물을 통해 시설로 가져온 것으로 가정되었습니다. ST11은 미국에서 어린이로부터 회수된 최초의 지역사회 획득 MRSA이지만, ST1은 현재 전 세계적으로 인간과 동물에서 회수됩니다. 일본에서는 ST1 및 SCCmec IV형 균주가 사람과 고양이에서 분리되어 ST1이 사람과 동물 간에 전염됨을 시사합니다. 이러한 유전자형을 갖지만 spa tl784도 포함하는 MRSA 균주가 인간으로부터 회수되었습니다. 현재, 병원 획득 MRSA, 지역사회 획득 MRSA 및 가축 관련 MRSA의 구분이 더 모호합니다. 이러한 결과는 마우스가 MRSA의 저장소로 작용할 수 있음을 시사합니다.

최근의 암 면역 요법에서는 PD{0}}와 같은 분자의 활성이 억제되어 암에 대한 면역 세포의 활성이 증가합니다. 높은 치료 효과에도 불구하고 암 면역 요법에서 자가면역질환이 발병하는 경우가 있다. 여기에서 우리는 다음을 사용하여 배양된 세포와 마우스에서 PD{1}}를 시간에 따라 분해할 수 있는 시스템을 구축했습니다.SMASH 디그론 시스템. NS3/4A 단백분해효소 억제제인 ​​Asunaprevir(ASV) 또는 Grazoprevir(GRV) 투여 후 Jurkat 세포와 CD3 + 비장세포의 PD{0}}SMASH 융합 단백질이 1일 감소했습니다. ASV가 있는 PD{6}}cherry-SMASh knockin(KI) 마우스에 접종된 MC-38 선암 세포의 성장은 야생형(WT) 및 처리되지 않은 KI 마우스에 비해 억제되었습니다. 더욱이 치명적인 방사선을 조사한 후 KI 골수 세포를 이식한 WT 마우스는 GRV가 있는 MC{9}} 세포를 거부할 수 있습니다. KI 마우스는 건강해 보였고 자가면역 질환의 징후를 보이지 않았습니다. 생물체에서의 데그론 시스템의 활용은 다양한 생물학적 연구뿐만 아니라 질병의 치료에도 진전이 있을 것으로 기대된다.

프로게스테론(P4)은 태반에서 분비되어 임신을 유지하고 면역 조절자 역할을 합니다. 글루코코르티코이드는 또 다른면역 조절염증을 조절하는 스테로이드. 이 연구에서는 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 NOG 마우스에 이식하여 이식편대숙주병(GVHD)을 유도하고 P4와 코티솔(COR) 효과를 비교하는 데 사용했습니다. PBMC는 다양한 농도의 P4 또는 COR의 존재하에 자극되었고 세포는 유세포 분석(FCM)에 의해 분석되었습니다. 분취량PBMCNOG 마우스에 이식하고 P4 또는 COR을 마우스에 주 2회 주사하였다. 28일 후, FCM 및 면역조직화학적 분석을 수행하였다. 그 결과, 고농도의 P4는 시험관 내에서 T 세포 활성화를 억제한 반면, 제거 후에도 억제가 계속되지 않았습니다. T 세포 활성화의 억제는 P4에 비해 COR 처리에서 덜했고, T 세포 고갈이 더 두드러졌다. P4-주사된 마우스는 대조군 마우스에 비해 더 많은 비장세포, 특히 CD8 T 세포를 보유했습니다. 그러나 CD25의 발현이 낮고 인간 T 세포가 폐와 간으로 침투하는 횟수가 적습니다.GVHD증상이 관찰되었습니다. 반면, COR 주입 마우스의 비장세포, 특히 T 세포의 수는 현저히 낮았고 활성화/소진 세포는 풍부하였다. 이러한 결과는 P4가 시험관 내에서 COR에 비해 T 세포를 유지하는 것을 선호함을 시사합니다.

Helicobacter hepaticus 및 Helicobacter bills는 마우스에서 간염 및 대장염을 일으키는 병원체로 알려져 있습니다. 일본의 동물 실험 시설에서는 매년 몇 건의 양성 사례가 확인되고 있습니다. H. hepaticus 및 H. bilis의 PCR 검사를 위한 샘플로 맹장 내용물 또는 신선한 대변을 사용하는 것이 가장 좋습니다.

최근에는 다양한 제조사에서 DNA 및 RNA 수송 및 보관 시약을 제조하고 있습니다. 이러한 시약이 PCR 검사에 사용되는 검체를 운반할 때 문제가 해소될 것으로 기대된다. 따라서 본 연구에서는 핵산보존시약을 이용하여 보존한 맹장의 내용물을 이용하여 Helicobacter의 PCR 검사를 수행하여 핵산보존시약의 유용성을 살펴보았다. 그 결과, 보존액을 사용하여 7일 동안 보관한 검체에서 신선한 검체와 동일한 수준의 헬리코박터를 검출할 수 있었습니다. 이상에서 헬리코박터의 PCR 검사에서는 운송이 며칠이 걸리더라도 핵산 저장 시약에 담근 검체를 냉장 비행으로 운송함으로써 높은 정확도로 검사를 수행할 수 있음을 시사하였다.

우리는 이전에 영양 기아에 반응하는 유전자를 수정하여 시험관 내 고체 표면에 대한 접착력이 크게 향상된 E.coli 돌연변이 균주를 개발했습니다. 이러한 접착력 강화 대장균 균주(AEE)와 생체 내 장 환경 간의 상호 작용을 평가하기 위해 우리는 마우스를 접종하여 장관으로의 집락화 능력을 평가했습니다.

평가 실험 전에 우리는 생체 내 시각화를 위해 루시페라제를 발현하는 플라스미드로 AEE를 형질전환했습니다. 금식한 마우스에 경구 접종하고 며칠마다 대변을 수집했습니다. 라이브 수AEE수집된 대변으로부터 CFU를 측정하여 추정하였다.

그 결과, 대조군에 비해 AEE가 1주일 이상 동안 대변에 더 풍부하여 장관 내 집락화가 강화되었음을 나타냅니다. IVIS를 사용하여 비침습적 영상화에 의한 루시페라제 발광의 위치를 ​​관찰함으로써, AEE가 맹장과 결장에 집락화되는 경향이 있음도 발견되었습니다.

[목표] 현재 [파스퇴렐라]폐렴새로운 속 Rodentibacter로 재분류되었습니다. 이 중 R.pneumotropicus와 R. Healy는 설치류의 미생물 모니터링을 위한 주요 대상입니다. 우리는 많은 Rodentibacter sp.를 분리했습니다. 설치류의 종으로 식별할 수 없습니다. 이 연구에서는 Rodentibacter sp. 박테리아 독성에 초점을 맞춘 분리. [방법] Rodentibacter sp. 쥐 기관에서 분리된 것을 연구에 사용했습니다. 차세대 염기서열분석기에서 Draft genome sequencing을 수행한 후 병독성 관련 유전자를 예측하였다. 동물 실험에서 Rag2 마우스는 Rodentibacter sp. 감염.|결과| 초안 게놈 시퀀싱에 의해 독특한 RTX 독소 코딩 유전자가 로덴티박터 종에서 확인되었습니다. RTX 독소의 단백질 서열은 Pasteurellaceae보다 Enterobacteriaceae에서 생산된 것과 더 상동성을 보였다. 동물 실험에서 거의 모든 감염된 Rag 2 마우스가 치명적인 폐렴 또는 패혈증으로 확인되었습니다. 분리주를 R. pneumotropicus 및 R. heylii로 식별할 수는 없었지만, 이 밀접하게 관련된 종은 RTX 독소와 같은 독성 인자가 있는 경우 면역이 저하된 동물에게 치명적일 수 있습니다.

NBRP 기본 기술 개발 프로그램(2018-2019)에서 우리는 쥐의 기회감염 병원성 박테리아의 게놈을 시퀀싱하고 수행했습니다.RNAseq이러한 유기체에 대한 PCR 분석을 개발하기 위해 생쥐의 원생동물을 분석했습니다. 우리는 이 결과를 사용하여 Rodentibacter spp.를 분석했습니다. 교토 대학(NBRP 쥐)과 공동으로 쥐의 원생동물. 여기에서 우리는 쥐 샘플의 테스트 결과를 보고합니다. [방법] 1.5kbp 정도의 16S rRNA 유전자 염기서열을 6개의 Rodentibacter spp.에 대해 PCR을 통해 판독하였고, Illumina HiSeq 2500을 이용하여 1개의 분리주(#25)의 Draft genome sequence를 결정하였다. rat cecal content의 PCR은 다음과 같다. 마우스 원생동물의 RNAseq 결과를 기반으로 수행되었습니다. [결과] 모든 균주의 16S rRNA 유전자 염기서열은 동일하였고, OTU 분석에서 Rodentibacter Ratti로 동정되었다. 분리주 #25의 재배열은 또한 이 균주가 R. Ratti임을 밝혀냈습니다. 쥐 원생동물에 대한 PCR은 쥐 아메바에 대해 긍정적인 결과를 제공했습니다. 트리코모나스에 대한 긍정적인 결과가 없었습니다PCR쥐 표본에. [토론] 쥐가 분리한 Rodentibacter spp. 이 보고서에서 조사한 것은 모두 R. Ratti였습니다. 쥐에서 로덴티박터 검사를 수행할 때 R. Ratti의 존재를 인식하는 것이 중요합니다. 일부 쥐 배설물 샘플은 마우스 아메바 PCR에 대해 양성을 보였습니다. 이것은 쥐의 원생동물 검출을 위한 PCR 개발의 첫 번째 단계입니다.

로덴티박터 유기체 '파스퇴렐라 뉴모트로피카'는 생쥐와 쥐에게 호흡기 질환을 일으키는 기회감염 병원성 세균이다. 그들은 이전에 Pasteurella 속으로 분류되었으며 몇몇 균주는 잠정적으로 생물형으로 제안되었습니다. 2017년에는 로덴티박터(Rodentibacter)속으로 집합적으로 개편되었다. MaM과 MaR 균주는 1980년대에 각각 생쥐와 쥐에서 분리되었습니다. 이 연구에서 우리는 두 균주의 게놈 서열을 결정하고 Rodentibacter 속의 그것과 비교, 재료 및 방법IThe MaM 및 MaR 균주는 국립 전염병 연구소(NIAID)에서 입수했습니다.

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->이케 후미오). 두 균주 모두 액체배양으로 배양하여 genomic DNA를 추출하였으며, Illumina Hiseq 2500과 PacBio Sequel을 이용하여 genomic sequence를 결정하였다. R. 라티처럼. 또한, MaR 균주의 완전한 게놈 서열(2,213,961 bp)을 확인하였다(rRNA 오페론의 수는 6개, 유전자 수는 2,063개로 추정됨). [토론] MaM과 MaR 균주는 일본에서 'Pasteurella pneumotropica'를 식별하기 위한 표준으로 사용되었습니다. 이 분석에서 우리는 두 균주의 종을 다음과 같이 결정했습니다. MaM 균주는 R.pneumotropicus이고 MaR 균주는 R.ratti입니다. 놀랍게도, 이러한 결과는 R. Ratti가 일본의 쥐로부터 분리될 수 있음을 보여줍니다.

Clostridium pili for me(CP)는 쥐와 생쥐를 포함한 다양한 실험동물에서 감염되기 쉬우며 면역저하 동물을 제외하고는 무증상 감염을 보인다. 동물 시설을 유지하는 것은 주요 감별 진단으로 간주되며 동물 연구의 실험 데이터에 영향을 미치는 것으로 잘 알려져 있습니다. 혈청진단(ELISA, IFA) 및 PCR은 CP에 대해 인공영양배지에서의 분리가 어렵기 때문에 CP의 진단에 일반적으로 사용된다. 그러나 혈청진단법을 이용하여 CP와 교차반응을 나타내는 비특이항체의 존재가 보고되고 있으며 우리 시설에서도 이와 유사한 사례로 자주 인식되고 있다. 또한 PCR 방법은 항체가가 증가하면 대변에서 CP를 검출할 수 없기 때문에 주기적인 모니터링으로 신뢰할 수 있는 진단 방법으로 한계가 있습니다. 최근에 우리는 매달 동물의 배설물을 보존하는 다른 접근 방식을 조사했습니다. 항체의 영향을 받지 않는 CP에 대한 PCR 검사를 지속적으로 보존된 대변을 이용한 보다 신뢰성 있는 진단으로 채택하였다. 이 보고서에서는 최근 사례를 보여줍니다. (비특이항체) 당사에서 전개하고 있는 흐름의 검사로 이어집니다.