Cistanche tubulosa에서 추출한 아르테오 시드 및 에키 노사이드의 요산 하강 효과 및 메커니즘
Mar 03, 2025
추상적인:추출한 요산 하상 효과 및 아티 아코 시드 및 에코 시드 (ECH)의 메커니즘을 탐색하는 것을 목표로합니다.Cistanche Tubulosa.
행동 양식고요 혈증 (HUA) 래트 모델은 옥소 소네이트 칼륨 (1.5 g · kg -1 · d -1)을 사용하여 확립되었다 (100 mg · kg -1} · d -1). HUA 모델 래트는 무작위로 알로 푸리 놀 그룹 (30 mg · kg -1 · d -1), 낮고 높고 (50, 100 mg · kg -1 · d -1) 선량 그룹으로 무작위로 나뉘어졌다. mg · kg -1 · d -1) 용량 그룹. 정상적인 대조군이 이전에 확립되었다. 4 주간의 투여 후, 혈액 생화학 분석기를 사용하여 소변에서 Sua 우동, Crea, Adenosine Deaminase (ADA) 및 요산 (UUA) 수준을 검출 하였다. 효소 연결 면역 흡착제 분석을 사용하여 혈청에서 크 산틴 산화 효소 (XOD) 수준을 검출 하였다. 신장 조직을 수집하고 신장 계수를 계량하고 계산 하였다. 헤 마톡 실린 에오신 (HE) 염색을 사용하여 신장 병리학 적 변화를 관찰 하였다. immunohistochemistry (IHC) 및 실시간 PCR을 사용하여 신경 조직에서 요산 수송 체 1 (URAT1), 포도당 수송 체 9 (GLUT9), 유기 음이온 수송 체 1 (OAT1) 및 유기 음이온 수송기 3 (OAT3)의 단백질 및 mRNA 발현 수준을 검출 하였다. 결과 AS 및 ECH는 HUA 모델 쥐에서 신장 기능을 향상시키고, 혈액 요산 수준을 감소시키고, 요산 배설을 촉진하고, ADA 및 XOD의 혈청 수준을 하향 조절하고, 신장 조직에서 URAT1 및 GLUT9의 단백질 및 mRNA 발현을 상향 조절하는 동시에 신장 조직에서 OAT1 및 OAT3의 단백질 및 mRNA 발현을 상향 조절할 수있다.
결론 Cistanche tubulosa의 페닐 에탄 이노이드 글리코 사이드 AS 및 에코는 HUA 모델 래트에서 신장 기능을 개선하고 ADA 및 XOD 수준을 감소시키고 URAT1, GLUT9, OAT1 및 OAT3의 발현을 조절함으로써 요산 낮은 효과를 발휘할 수 있습니다.
키워드 : Cistanche Tubulosa; 암 테오 사이드; 에키나코 시드; 고요 혈증; 요산 감소; 기구
16% 아르 테오 시드를 갖는 Cistanche Tubulosa 추출물
고요 혈증 (HUA)은 인체의 장애 퓨린 대사로 인한 대사 질환으로 혈액 요산 수준이 높아집니다 [1]. 혈액 요산 수치가 7을 초과 할 때 일반적으로 진단됩니다. 0 mg · dl⁻¹ (416. 0} μmol·l⁻¹) 및 6. 고요 혈증의 발병은 주로 고 푸린식이, 만성 알코올 소비, 약물 사용 및 갑상선 기능 항진증과 같은 요인과 관련이 있습니다. 심혈관 질환, 당뇨병 및 고혈압의 위험을 증가시킬뿐만 아니라 [3-4]도 환자의 건강에 크게 영향을 미칩니다.
현재, 고산염에 대한 임상 치료에는 주로 요산 생산을 억제하고 요산 배설을 촉진하는 약물이 포함됩니다. 그러나 이러한 치료는 간 또는 신장 기능 장애가있는 환자에게 특정한 한계가 있습니다 [5-6]. 따라서 부작용이 낮은 효과적인 약물을 탐색하는 것은 고요 혈증의 예방 및 치료에 큰 의미가 있습니다.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, 전통 중국 의약에서 신장 통조림 허브로 일반적으로 사용되는 것은 발기 부전, 불임, 본질 및 혈액 부족, 허리 및 무릎의 약점, 근육 약화 및 장 건조로 인한 변비와 같은 상태를 치료하는 데 사용됩니다 [7]. 연구 결과에 따르면이를 보여주었습니다Cistanche Tubulosa신경 보호 [8], 항 염증성 [9], 골 대사 조절 [10] 및 암 환자의 화학 요법에서의 효능 향상 효과를 보유하고있다 [11]. 다양한 활성 성분 중에서 페닐 에타 노이드 글리코 사이드가 가장 풍부합니다.
Acteoside (AS) 및 Echinacoside (ech), 높은 함량을 갖는 2 개의 페닐 에타 노이드 글리코 사이드Cistanche Tubulosa, 강력한 생물학적 활동을 나타내고 개발 및 적용에 대한 상당한 잠재력을 보유하고 있습니다. 결과적으로, 우리의 연구 그룹은 추가 연구를 위해 AS 및 ECH를 선택했습니다. 마우스의 네트워크 약리학 예측 및 사전 실험을 통해, 우리는 페닐 에타 노이드 글리코 사이드 추출물이Cistanche Tubulosa특정 요산 저하 효과가있을 수 있습니다. 그러나 이러한 효과의 경로와 메커니즘은 여전히 불분명합니다.
따라서, 요산 생산의 메커니즘과 연구 초점으로서의 주요 배설 경로를 사용하여, 우리는 페닐 에탄 이노이드 글리코 사이드 추출물 AS 및 에코의 요산 저하 효과를 조사했다. 이 연구는 AS와 ECH가 요법산 저하 효과를 발휘하는 경로와 메커니즘을 설명하는 것을 목표로합니다.
1 재료
1.1 실험 동물
무게가 150-180g 인 70 명의 남성 SPF 등급 Sprague-Dawley (SD) 쥐를 Xinjiang Medical University의 실험 동물 센터에서 구입했습니다. 동물 생산 라이센스 번호 : SCXK (XIN) 2023-0001. 이 실험은 Xinjiang Autonomous Region Uygur Medicine Research Institute의 동물 윤리위원회 (Animal Ethics Committee)의 승인 번호 : IACUC- (Zhun) -2024-009에 의해 승인되었습니다.
1.2 약물 및 시약
페닐 에타 노이드 글리코 사이드 추출물 (AS 및 ech)~에서Cistanche Tubulosa (purity >고성능 액체 크로마토 그래피에 의해 검증 된 98%)를 추출, 정제 및 Uygur 제형 과학의 주요 실험실 인 Xinjiang Autonomous Region Uygur Medicine Research Institute에 의해 제조 하였다. 배치 번호 : 20220617 (AS) 및 20220526 (ech).
알로 푸리 놀 정제, 배치 번호 : 62208726, Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
옥소 소네이트 칼륨그리고아데닌, 배치 번호 : Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd에서 구매 한 i2130050 및 C2202255.
Crea (크레아티닌), UA (요산), 요소 및 ADA (아데노신 데 아미나 제) 분석 키트, 배치 번호 : 141123010, 141223004, 141323008 및 043624005, Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
XOD (크 산틴 산화 효소) 활성 분석 키트, 배치 번호 : Y10001219, 상하이 Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.
항체 (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), 배치 번호 : 3I5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2I44618, 친화력 생명 과학에서 구매했습니다.
HRP- 표지 된 염소 항-토끼 IgG, 배치 번호 : 245440113, ZSGB-Bio에서 구매.
헤 마톡 실린 염색 용액, 배치 번호 : 24135741H, Beijing Lanjieke Technology Co., Ltd.에서 구매했습니다.
DAB 발색경 시약 키트, 배치 번호 : 240010512, ZSGB-Bio에서 구매.
DEPC (디 에틸 피로 카보네이트), 카탈로그 번호 : D 60029-500 ml, Amresco (미국)에서 구매했습니다.
M5 Hiclear DL2000 DNA 마커, 카탈로그 번호 : MF025, 베이징 Genomics Biotechnology Co., Ltd.
Trizol ™ 시약, 카탈로그 번호 : 15596026, Thermo Fisher Scientific (미국)에서 구매.
5X 올인원 RT MasterMix그리고Evagreen Express 2 × x qpcr mastermix-low rox, 카탈로그 번호 : G492 및 G891, 모두 Applied Biological Materials Inc. (ABM)에서 구매했습니다.
2 가지 방법
2.1 모델 설정 및 그룹화
70 명의 수컷 Sprague-Dawley (SD) 래트를 적응하고 정상 대조군 (1 0 쥐)과 모델 대조군 (60 래트)의 두 그룹으로 나누었다. 정상 대조군은 GAVAGE를 통해 0.5% CMC-NA를 투여 하였다. 모델 대조군은 14 일 연속 14 일 동안 매일 한 번, 10 ml · kg⁻¹의 용량으로 아데닌 (100 mg · kg⁻¹)과 결합 된 칼륨 옥소 소네이트 (1.5 g · kg⁻¹)를 투여 하였다. 이 모델은 생화학 분석기에 의해 측정 된 바와 같이 요소, CREA 및 SUA 수준이 크게 증가했을 때 성공적으로 확립 된 것으로 간주되었습니다.
고후 혈증 모델 래트는 SUA, 우레아 및 크레아 수준에 기초하여 다음 그룹으로 더 나뉘어졌다 : 모델 대조군, 알로 푸리 놀 그룹 (3 {0 mg · kg⁻¹), 그룹으로서 저용량 (50 mg · kg⁻¹), 고용량 (100 mg · kg ¹), ech 그룹 (50 mg · kg ¹), mg-ech ech-dose roc-dose ach-ech gose hightops as group (50 mg · kg⁻¹). 각 그룹에 10 개의 쥐가있는 에코 그룹 (100 mg · kg⁻¹). 안정적인 고요 혈증을 유지하기 위해, 정상 대조군을 제외한 모든 그룹은 아침에 GAVAGE를 통해 아데닌 (100 mg · kg⁻¹)과 결합 된 옥소 소네이트 (500 mg · kg⁻¹)를 투여 한 후 오후에 각 치료 그룹에서 각각의 약물을 투여 하였다. 정상 대조군은 아침에 0.5% CMC-NA 용액을 받았고 오후에는 14 일 연속 1 회 1 회 연속으로 10 mL · kg⁻¹의 용량으로 식수를 받았다. 그 후, 모델링 제의 투여가 중단되었고, 각각의 약물을 추가 14 일 동안 매일 지속적으로 투여 하였다.
2.2 샘플 수집
최종 용량 후, 래트를 하룻밤 사이에 금식 하였다 (물은 제한되지 않았다). 요산 검사를 위해 각 그룹의 소변을 수집 하였다. 금식 후 체중을 측정하고, 마취하에 혈액 샘플을 수집 하였다. 혈청을 원심 분리로 분리하고 나중에 사용하기 위해 저장 하였다. 신장 조직을 수집하고 계량 하였다. 하나의 신장을 4% 파라 포름 알데히드 용액에 고정 시켰으며, 다른 신장은 추가 분석을 위해 액체 질소에서 스냅 프로 젠이었다.
2.3 쥐 소변에서 요산의 측정
각 그룹으로부터의 소변 샘플을 원심 분리 (3, 000}}}} r · min⁻¹, 10 분, 원심 분리 반경 14 cm), 상청액을 수집 하였다. 소변 샘플을 식염수로 1 : 9로 희석하고 생화학 분석기를 사용하여 요산 함량에 대해 분석 하였다.
2.4 쥐 혈청에서 ADA, URE, CREA 및 SUA의 측정
각 그룹으로부터의 혈액 샘플을 원심 분리 (3, 000}}} R · min⁻¹, 10 분, 원심 분리 반경 14cm) 및 혈청을 수집 하였다. 혈청의 ADA, 우레아, 크레아 및 SUA 수준은 생화학 분석기를 사용하여 측정되었습니다.
2.5 쥐 혈청에서 XOD 측정
래트 혈청에서 XOD 수준의 변화는 제조업체의 지시에 따라 효소 분석을 사용하여 측정되었다. 290 nm에서의 초기 흡광도 (AAT) 및 최종 흡수성 (a₂)이 기록되었고, ΔA (ΔA=a₂ -A₁)를 계산 하였다. ΔA를 공식으로 대체했습니다.
XOD (NMOLATING (NMOLATING · MINATING · MLING)=[ΔA × 반응 시스템 총 부피 ÷ (어산의 어금니 멸종 계수 × 광학 경로 길이) × 10 작동 ÷ 시간 {= 4262 × ΔA,
혈청의 밀리 리터당 분당 촉매 된 요산의 양을 계산합니다.
2.6 신장 계수 측정
신장 조직을 수집하고 식염수로 세척하고 과도한 물을 제거 하였다. 장기 중량을 정확하게 측정하고 신장 계수를 다음과 같이 계산 하였다.
신장 계수=신장 체중 (mg) / 체중 (g).
2.7 염색에 의한 신장 조직의 조직 병리학 적 관찰
4% 파라 포름 알데히드 용액에 고정 된 신장 조직을 등급의 에탄올 농도로 탈수시키고, 자일 렌으로 제거하고, 파라핀에 매립 한 후 4- μM 슬라이스로 절단 하였다. 섹션을 자일 렌으로 탈 파라핀 화하고, 등급이 매겨진 에탄올로 수화시키고, 헤 마톡 실린 및 에오신 (HE)으로 염색하고 중성 껌으로 밀봉 하였다. 신장 조직의 형태 학적 변화는 광학 현미경으로 관찰되었고, 이미지는 400x 배율로 포획되었다.
2.8 IHC에 의한 신장 조직에서 URAT1, GLUT9, OAT1 및 OAT3 단백질 발현의 검출
4% 파라 포름 알데히드 용액에 고정 된 신장 조직을 등급의 에탄올 농도로 탈수시키고, 자일 렌으로 제거하고, 파라핀에 매립 한 후, 절단되었다. 항원 검색 및 염소 혈청 차단이 수행되었다. 1 차 항체 (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3)를 1 : 200 희석액으로 첨가하고 밤새 4도에서 배양 하였다. 다음날, 섹션을 PBS로 세척하고, 공기 건조시키고, 37도에서 비오틴-표지 된 염소 항-토끼 IgG와 30 분 동안 인큐베이션 하였다. 섹션을 PBS로 세척하고 10 분 동안 DAB 염색체 시약과 함께 배양 한 후, 3 분 동안 PBS 헹굼, 헤 마톡 실린 염색, 염산 에탄올 용액으로의 분화, 리튬 탄산염 블루 링, 구배 에탄올로의 탈수, Xylene으로 개간 하였다.
각각의 래트에 대해, 신장 섹션의 2 개의 무작위 4 0 0 × 밭을 선택 하였다. 양성 염색 (브라운-노란색)을 분석하고, 통계 분석을 위해 각 필드의 통합 광학 밀도 (IOD)를 측정 하였다.
