면역 기능에 Cistanche 다당류의 이점은 무엇입니까
Mar 10, 2022
Cistanche Polysaccharide의 면역 활성 및 기전
쩡쿤리, 쩡이판, 루즈리앙
[추상적인]목적: 공부하기 위해면역성 있는의 활동시스탄체다당류(CDPS) 및 그 메커니즘면역성 있는시험관내 조절. 방법: 티아졸 블루 비색법(MTT)을 사용하여 CDPS의 조절 효과를 관찰했습니다(시탕슈 다당류) 시험관 내에서 마우스 흉선 림프구의 증식을 억제하는 IQS DEX TNF에 대해; CDPS(시탕슈 다당류)를 사용하여 유세포 분석기를 사용하여 세포 주기 및 세포 주기 분석을 수행했습니다. 세포 내 Ca2의 결정. 결과: CDPS(시탕슈 다당류) 더 높은 농도에서 ISQDEX의 림프구 증식 억제 효과 및 림프구 증식에 대한 고농도 TNF의 억제 효과에 저항할 수 있으며, 림프구에 대한 저농도 TNF의 증식 촉진 효과를 상승시킬 수 있습니다. 100ug/ml 200ug/ml CDPS(시탕슈 다당류) 분열 단계에서 세포를 크게 증가시킬 수 있습니다. 고농도(100ug/ml) CDPS(시탕슈 다당류) 마우스 흉선 세포에서 Ca 이온 농도를 크게 촉진할 수 있습니다. 결론: CDPS(시탕슈 다당류)은 세포가 분열기로 진입하도록 촉진할 수 있으며, 마우스 흉선 림프구 증식 촉진 효과는 마우스 흉선 림프구에서 칼슘 방출 촉진과 관련이 있는 것으로 추정된다.
시스탄체(시스탄체데저티콜라YC Ma)는 우리나라에서 희귀하고 귀중한 한약재입니다. "Shen Nong's Materia Medica"에 최상급으로 기재되어 있습니다.시스탄체피를 보양하고 신장을 보양하며 양을 보하고 장을 촉촉하게 하며 노화를 늦추는 기능이 있다. 현대 약리학 연구에 따르면시스탄체다당류몸의 상태를 개선할 수 있습니다면역성 있는기능, DNA 합성 촉진, 체력 강화, 지능 향상 및 명백한 노화 방지 효과가 있습니다[1]. 저자는 CDPS의 규제를 연구했습니다.(Cistanche 다당류), 다당류 성분시스탄체, 에면역성 있는기능마우스 림프구.
1 재료 및 방법
1.1 시약 및 약물.
RPM, I 1640 배지: GIB-CO; 헤페스: 파르코; L-글루타민: 상하이 동풍 시약 공장; 페니실린과 스트렙토마이신: 중국 북부 제약 공장; 콘카나발린(ConA), MTT: SIGM A Company; Phytohemagglutinin(PHA): 상하이 의료 연구소; 이소프로테레놀(ISO): 상하이 Tianfeng 제약 공장; 머캅토에탄올: Fluka Company; 신생아 송아지 혈청: Sijiqing Bioengineering Company; Dexamethasone(DEX)은 Zhejiang University School of Medicine의 첫 번째 부속 병원인 Dr. Ma Liang이 발표했습니다. 종양억제인자(TNF)는 Zhejiang University의 생명과학부 세포학과 교수인 Yu Yuehan이 제공했습니다. 나머지 시약은 모두 국내에서 생산된 분석 등급입니다.
1.2 실험 동물.
ICR 마우스(수컷, 68주, 체중 18-20g, 22)는 Zhejiang Experimental Animal Center에서 구입했습니다.
1.3 Cistanche 다당류의 추출 [2]:
시스탄체다당류우리 연구실에서 추출합니다! 생약을 분쇄한 후시스탄체, 뜨거운 에탄올에 침지하고 끓는 물에서 추출하여 에탄올에 침전시킨다. 중성 효소는 탈단백질화를 위한 Sewag 방법, 음이온 DEAE-Sephadex A{1}} 교환 크로마토그래피 및 Sephacry S-200 겔 여과 크로마토그래피와 결합하여 CDPS의 단일 성분을 얻습니다(시탕슈 다당류)). 건조한 상태로 유지하고 불완전한 RPMI1640을 사용하여 사용하기 전에 특정 농도를 만들고 한외여과로 멸균하십시오.
1.4 비장 및 흉선 림프구의 준비 [3]:
The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, 비장 세포의 농도를 X 10 /ml로 조정하고 흉선 세포의 농도를 X 10도 /ml로 조정
1.5 림프구 증식 반응:Mosmanmn 방법[4] 개선: 96-웰 세포 배양 플레이트에 1{16}}/ml 비장 세포 현탁액 또는 물 10/ml 흉선 세포 현탁액 100M1 및 각 웰에 다양한 농도의 약물 10041을 추가합니다. CO2.37C 인큐베이터에서 72시간 동안 배양합니다. 배양 종료 4시간 전에 각 웰에 8μ1의 MTT(5mg/ml)를 추가합니다. 배양이 끝나면 각 웰에서 150"1의 상등액을 흡인하고 0.5N 이소프로판올 염산염 150M1을 추가합니다. 마이크로 쉐이커에서 부드럽게 흔들어 파란색 결정을 완전히 녹입니다. 마이크로플레이트 판독기에서 OD570을 측정합니다. 각 실험을 설정합니다. 세 복제 우물로 포인트.
1.6 세포 주기에 대한 영향 결정[5]:
{{0}}웰 세포 배양 플레이트, 각 웰에 4 10도/ml 흉선 세포 현탁액 1ml를 첨가하고, 강한 CO, 37 인큐베이터에서 다양한 시약 및 다당류 용액을 2ml에 첨가 72시간 동안 배양 후, 원심분리 15{14}}0r/min에서 15분 동안 상층액을 버리고 침전된 세포를 고정하기 위해 7 에탄올을 추가하고 대기 테스트를 위해 4C에서 보관하고 PBS로 세포를 두 번 세척하고 15분 동안 1500r/min에서 원심분리하고 0.5ml0.1 RNaseA를 4C에서 30분 동안 분해한 후, 50ug/ml bromoacetate를 4C에서 30분 동안 염색하고 세포 샘플의 형광 강도를 FACScan 유세포 분석기에서 측정했습니다. 10,{22}} 각 샘플에 대해 세포 테스트 포인트를 수집하고 데이터는 Mul tricycle 소프트웨어 분석을 사용했습니다.
1.7 세포 내 칼슘 이온 농도 측정 [6]
위와 같은 방법으로 마우스 흉선세포를 채취합니다. 불완전한 RPMI1640 배양 배지에 현탁하고 세포 농도를 × 10'/ml로 조정합니다. 각 실험관 Fluo{4}}AM 염색 용액 5μ1, 2% F{8}}μ1에 흉선세포 현탁액 1ml 및 1μM을 추가하고, 37도에서 30분 동안 배양한 후 불완전한 RPM1640, 1500r/로 두 번 세척합니다. 분, 10분 동안 원심분리하고 상층액을 버리고 침전된 세포에 다양한 농도의 다당류 및 다당류를 첨가합니다. ConA 후, 형광 강도는 FACScan 유세포 분석기에서 측정되었습니다. 10개의{16}} 세포 테스트 포인트 데이터를 각 샘플에 대해 수집하고 CELLQUEST 소프트웨어로 분석했습니다. 1.8 통계적 방법은 분산 분석을 위해 사용되었으며 세포주기 및 칼슘 이온 측정은 유세포 분석기의 소프트웨어로 분석되었습니다.
cistanche Deserticola의 cistanche 다당류
2 결과
2.1 시험관 내 Cistanche 다당류는 ISO DEX TNF에 의해 마우스 흉선 림프구의 증식을 억제합니다
-아드레날린 수용체 작용제 isoproterenol(ISO)과 부신피질 호르몬 dexamethasone(DEX) 계열은 림프구 증식 CDPS를 억제합니다.시탕슈 다당류) 더 높은 농도(75 125ug/ml)에서는 림프구 증식에 대한 ISO DEX의 억제 효과에 저항할 수 있습니다(P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">시스탄체 다당류) (125ug/ml) 농도가 높을수록 TNF의 억제 효과에 저항할 수 있으며, 낮은 농도의 TNF로 림프구 증식을 상승적으로 촉진합니다(그림 2).
2.2 Cistanche 다당류의 흉선 림프구 주기 조절
CDPS(시스탄체다당류) 25ug/ml 1{7}}0ug/ml 200#g/ml 3가지 농도를 마우스 흉선 림프구에 72시간 동안 작용시키고, 세포 내 DNA 함량을 FACS로 측정하고, 증식 지수(PI)를 계산했습니다. 공식에 따르면. 그 결과 100ug/ml 및 200ug/ml 모두 분열기에서 세포를 유의하게 증가시킬 수 있으며 증식 지수(68.0%, 56.6)가 대조군(44.6) 및 200ug/ml보다 유의하게 높은 것으로 나타났습니다. 200ug/ml의 농도에서 세포 증식에 대한 영향이 감소하는 경향이 있기 때문에 그룹은 100ug/ml 그룹보다 약간 낮습니다[7]. 25ug/ml 그룹의 PI 값(47.5%)은 대조군에 비해 유의하게 높지 않았다.
2.3 Cistanche Polysaccharide가 마우스 흉선세포의 칼슘 이온 농도에 미치는 영향
실험 결과는 더 높은 농도(100 ug/ml)의 CDPS(시탕슈 다당류e) 마우스 흉선세포에서 칼슘 이온 농도의 증가를 유의하게 촉진할 수 있음 대조군과 비교하여 유의한 차이가 있다(P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">
3 토론
시스탄체, 일반적으로 알려진"사막 인삼"는 건조하고 비늘 모양의 다육질 줄기이다.시스탄체.시스탄체신양(腎陽), 정(治), 피(血), 장(腸)을 보양하는 기능이 있다. 일종의 뇌하수체-부신피질의 흥분에 속하거나 부신피질과 유사한 호르몬 작용을 한다. 조절할 수 있는 귀중한 한방면역성 있는기능몸의. 우리의 이전 연구 결과는 CDPS(시탕슈 다당류) 시험관 내에서 ConA PHA에 의해 활성화되거나 활성화되지 않은 흉선 T 림프구의 증식을 촉진할 수 있습니다. ConA PHA와 결합하면 두 가지 유형의 T 세포 자극제가 있습니다. 우리는 CDPS(시탕슈 다당류)은 T 세포에 대한 Badjuvant이며, 우리는 또한 CDPS(시탕슈 다당류) 더 높은 농도에서 마우스 비장 림프구의 분비를 상당히 증가시킬 수 있습니다[8]
일부 연구에서는 재조합 TNF가 시험관 내에서 정상 마우스 및 인간 T 림프구 클러스터의 세포자멸사를 유발할 수 있으며 이 효과는 IIL{0}} IL{1}} IFN 및 IIL{2}}에 의해 잠재적으로 억제될 수 있음을 발견했습니다. 덱사메타손(DEX)과 함께 림프구 발현과 IL{3}} 분비를 억제하고 고친화성 IL{6}}R 생성을 하향 조절하여 림프구 증식을 억제할 수 있습니다. 이 실험은 더 높은 농도의 CDPS(시스탄체다당류) 림프구 증식에 대한 고농도의 TNF의 영향을 상쇄할 수 있습니다. 억제, 림프구 증식을 촉진하기 위해 낮은 농도의 TNF와 상승적이며, 림프구 증식에 대한 ISQ DEX의 억제 효과를 상쇄할 수 있습니다. 이러한 효과는 정확히 CDPS(시스탄체다당류) T 림프구의 증식을 촉진하고 T 세포 IL{0}} 및 기타 사이토카인에 의한 자가분비를 완료합니다.
최근 몇 년 동안 식물성 다당류의 면역약리학적 효과에 대한 연구는 많이 진행되어 왔지만 이에 대한 연구는 거의 없었다.면역성 있는다당류의 조절 메커니즘, 특히 Ca2를 2차 메신저로 하는 림프구에 작용하는 다당류의 신호 전달 경로. 보고서가 없습니다. 이 실험은 이 분야에 대한 예비 연구를 수행했습니다. 세포내 신호전달 분자는 cAM R Ca", IP3 DG cGMP 등을 포함하며, 그 중 Ca"는 세포에 매우 중요한 생리학적 효과를 갖는다. 세포 내 Ca² 농도의 증가는 림프구 활성화 및 증식의 초기 단계에서 중요한 현상입니다. 이 과정은 주로 자극기에 의해 세포가 활성화되는 처음 수십 초에서 몇 분 동안 발생합니다. T 세포 활성화의 고전적인 방법은 포스파티딜 근육을 대사하는 포스파티딜이노시톨(PIB)입니다. 알코올 대사산물 1,4.{4}}이노시톨 삼인산(IP3)은 내부 메쉬 수용체에 결합하여 내부 메쉬에 저장된 Ca의 방출을 촉진하고 세포 내 Ca2 수준 및 세포내 Ca 농도를 증가시킬 수 있습니다. * 증가. 높음은 NF-AT(활성화된 T 세포의 누드 인자)의 생성을 촉진할 수 있고, 후자는 IIL{8}} 유전자의 발현을 촉진시키는 효과가 있습니다. 실험 결과에 따르면 농도가 높을수록(100ug/ml) )의 CDPS(시스탄체다당류)는 5 10분 동안 유효합니다. Time은 마우스 흉선세포의 Ca* 농도를 높이는 데 상당한 영향을 미치며 ConA와 상승 작용을 합니다. 따라서 우리는 CDPS(시탕슈 다당류) 마우스 흉선 림프구에서 칼슘 방출을 촉진하여 세포 내 칼슘 이온 농도를 증가시킵니다. 증가는 IL{0}} 유전자의 발현을 촉진하고 T 세포의 증식을 유도하는데, 이는 IL{0}}의 이론적 기반 중 하나입니다.시스탄체다당류신체에 대한 조절 효과
시탕슈 다당류
참고문헌
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